糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒技术

本发明专利技术提供不受血红蛋白的影响、准确且高灵敏度地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法。一种含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，在表面活性剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤素氧化物存在下进行该反应，并且对生成的过氧化氢进行测定。根据本发明专利技术，提供含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其可用于对糖尿病的诊断有用的糖化血红蛋白的测定等。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请号为201280029249.4(国际申请号为PCT/JP2012/065237)、中国国 家阶段进入日为2013年12月13日（国际申请日为2012年6月14日）、专利技术名称为"糖化血红蛋 白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒"的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒。
技术介绍
糖化血红蛋白是在血红蛋白上结合葡萄糖而成的糖化物。血红蛋白具有由α链、β 链构成的四聚体结构，将β链的Ν末端糖化后的血红蛋白称为血红蛋白A1 c (以下也记作 HbAlc)，血糖值越高越增加，因此，作为糖尿病标志物而在临床检查中进行测定。 作为糖化血红蛋白的测定方法，已知HPLC法等色谱法、电泳法、胶乳免疫凝集法等 利用抗体的免疫测定法、使用作用于糖化蛋白的酶和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶 的酶测定法等。 作为糖化血红蛋白的酶测定法，已知如下方法(吸光度法)等:首先，利用变性剂使 含有血红蛋白的试样中的血红蛋白变性，使蛋白质分解酶作用于变性后的血红蛋白，接着 使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽，使生成的过氧化氢在过氧化物酶等过氧化活性物质 存在下与氧化显色型色原体反应而生成色素，由生成的色素的吸光度测定糖化血红蛋白。 但是，利用该吸光度法的糖化血红蛋白的测定中，大量存在于试样中的血红蛋白 的影响成为问题。作为针对该问题的解决方法，已知例如:使用阳离子型表面活性剂和/或 两性表面活性剂的方法(专利文献I)、使用砜化合物和/或硝基化合物的方法(专利文献2、 专利文献3)、使用四唑·_化合物的方法(专利文献4)、使用聚氧乙烯烷基醚硫酸盐类等特定 的阴离子系表面活性剂的方法(专利文献5)等。 但是，这些方法中，也未必能够避免血红蛋白的影响，因而需要不受血红蛋白影响 的、准确地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法。 另外，基于氧化还原反应的底物和酶的测定方法中，已知为了避免还原剂、特别是 抗坏血酸的妨碍而使用碘酸盐的方法(专利文献6)。但是，还不知道为了避免血红蛋白的影 响而使用碘酸盐等卤素氧化物的方法。 现有技术文献 专利文献 专利文献1:日本特开平3-010696号公报 专利文献2:W02003/107011小册子 专利文献3:日本特开2007-147630号公报 专利文献4:日本特开2000-210100号公报 专利文献5:W02005/049858小册子 专利文献6:日本特开昭56-151358号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题 本专利技术的目的在于提供用于不受血红蛋白的影响、准确且高灵敏度地测定含有血 红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法和试剂。 用于解决问题的方法 本专利技术人进行了深入的研究，结果发现了如下见解:在表面活性剂存在下使蛋白 质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤 素氧化物存在下进行该反应，并对生成的过氧化氢进行测定，由此，能够不受血红蛋白的影 响、准确且高灵敏度地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白，从而完成了本专利技术。 即，本专利技术涉及以下~项。 -种含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，在表面 活性剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行 作用的反应中，在卤素氧化物存在下进行该反应，并对生成的过氧化氢进行测定。 如所述的方法，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或其盐和高碘 酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。 如或所述的方法，其中，表面活性剂为阳离子型表面活性剂。 如所述的方法其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式（I)表示的吡 啶犠盐、下述通式（II)表示的辚盐和下述通式（III)表示的季铵盐组成的组中的阳离子型 表面活性剂，式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，Ra表示氢原子、取 代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，η表示1~5的整数，表示一价的阴离子，式(II)中，R2~R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，式（III)中，R6~R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Ζ-表示一价的阴离子。 如~中任一项所述的方法，其中，过氧化氢的测定使用过氧化氢测定试 剂进行。 如所述的方法，其中，过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无色型色原 体的试剂。 -种糖化血红蛋白测定试剂，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋 白，其特征在于，含有蛋白质分解酶、果糖基肽氧化酶、卤素氧化物和表面活性剂。 如所述的试剂，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或其盐和高碘 酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。 如或所述的试剂，其中，表面活性剂为阳离子型表面活性剂。 如所述的试剂，其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式（I)表示的 吡啶德盐、下述通式（II)表示的辚盐和下述通式（III)表示的季铵盐组成的组中的阳离子 型表面活性剂，式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，Ra表示氢原子、取 代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，η表示1~5的整数，表示一价的阴离子，式(II)中，R2~R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，式（III)中，R6~R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，表示一价的阴离子。 如~中任一项所述的试剂，其中，还含有过氧化氢测定试剂。 如所述的试剂，其中，过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无色型色 原体的试剂。 -种糖化血红蛋白测定试剂盒，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红 蛋白，其特征在于，包含含有蛋白质分解酶、卤素氧化物和表面活性剂的第一试剂以及含有 果糖基肽氧化酶的第二试剂。 -种糖化血红蛋白测定试剂盒，用于测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红 蛋白，其特征在于，包含含有蛋白质分解酶和表面活性剂的第一试剂以及含有果糖基肽氧 化酶和卤素氧化物的第二试剂。 如或所述的试剂盒，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、溴酸或 其盐和高碘酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。 如~中任一项所述的试剂盒，其中，表面活性剂为阳离子型表面活 性剂。 如所述的试剂盒，其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式（I)表示 的吡啶铺盐、下述通式（II)表示的辚盐和下述通式（III)表示的季铵盐组成的组中的阳离 子型表面活性剂，式(I)中，R1表示取代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，Ra表示氢原子、取 代或未取代的烷基或者取代或未取代的烯基，η表示1~5的整数，表示一价的阴离子，式(II)中，R2~R5相同或不同，表示取代或未取代的烷基，Y-表示一价的阴离子，式（III)中，R6~R9相同或不同，表示取代或未取代的烷基，表示一价的阴离子。 如~中任一项所述的试剂盒，其中，在第一试剂和第二试剂中或者 在第二试剂和第一试剂中还分别含有过氧化物酶和无色型色原体。专利技术效果根据本专利技术，提供用于不受血红蛋白的影响、准确且高灵敏度地测定含有血红蛋 白的试样中的糖化血红蛋白的方法、试剂和试剂盒。【附图说明】 图1是表示使用实施例1~3和比较例1的试剂盒的样本中的HbAlc的测定中血红蛋 白浓度与反应吸光度的关系的图。?表示使用比较例1的试剂盒的测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，在表面活性剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤素氧化物存在下进行该反应，并对生成的过氧化氢进行测定。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：征矢阳代，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP