糖化血红蛋白的测定方法技术

一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，使含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白与催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶在选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N‑酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N‑酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的存在下反应而生成过氧化氢，对所生成的所述过氧化氢进行测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖化血红蛋白的测定方法
本专利技术涉及样本中的糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂及测定试剂盒。本申请基于2016年7月29日在日本提出的日本特愿2016-150498号要求优先权，将其内容援引于此。
技术介绍
糖化蛋白质包含于生物体内的血液等体液、毛发等生物试样中。存在于血液中的糖化蛋白质的浓度依赖于血清中所溶解的葡萄糖等糖类的浓度，在临床诊断领域中，作为血液中的糖化蛋白质的血红蛋白A1c(以下称为HbA1c)的浓度测定被用于糖尿病的诊断、监控中(参照非专利文献1)。血红蛋白是具有α链及β链这2种亚单位各2个、分子量为64000的血红素蛋白。HbA1c特别被定义为将β链的N末端缬氨酸残基被糖化的血红蛋白。作为测定该HbA1c的方法，已知使用高效液相色谱(HPLC)的仪器分析方法(参照非专利文献2)、使用抗原抗体反应的免疫测定法(非专利文献3)等。近年来，正在进行能应用于具有通用性的自动分析装置、并且操作也简便的HbA1c的酶测定法的开发，并且已报道了各种方法。迄今为止所报道的HbA1c的酶测定法主要为使用蛋白酶和糖化肽氧化酶的方法。即，使蛋白酶作用于血细胞中的HbA1c而生成作为糖化肽的果糖基二肽(Fru-Val-His)，使果糖基肽氧化酶作用于所生成的该果糖基二肽而生成过氧化氢，测定所生成的过氧化氢，由此测定样本中的HbA1c的方法(参照专利文献1)；使蛋白酶作用于血细胞中的HbA1c而生成作为糖化肽的果糖基六肽(Fru-Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu)，使果糖基六肽氧化酶作用于所生成的该果糖基六肽而生成过氧化氢，测定所生成的过氧化氢，由此测定样本中的HbA1c的方法(参照专利文献2～4)。另一方面，还已知如下方法：不使用蛋白酶而是使用催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶，测定样本中的糖化血红蛋白(参照专利文献4～6)。另外报道了一种HbA1c浓度及HbA1c浓度比的测定方法，其特征在于，对至少用阴离子性表面活性剂进行了预处理的含有血红蛋白的试样中的血红蛋白进行测定，进而使会生成果糖基缬氨酰组氨酸的蛋白分解酶作用于血红蛋白测定用反应液，进行HbA1c浓度测定(参照专利文献7)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2001-95598号公报专利文献2：国际公开第2008/108385号专利文献3：国际公开第2013/162035号专利文献4：国际公开第2015/005258号专利文献5：国际公开第2015/005257号专利文献6：国际公开第2015/060429号专利文献7：国际公开第2005/049858号非专利文献非专利文献1：ClinChemLabMed，第36卷、p.299-308(1998).非专利文献2：Diabetes，第27卷、第2期、p.102-107(1978).非专利文献3：日本临床检查自动化学会会刊、第18卷、第4期、p.620(1993).
技术实现思路
专利技术所要解决的问题以往的不使用蛋白酶、而是使用催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶的方法存在灵敏度不充分的问题。因此，本专利技术的目的在于，提供使用催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶来简便且高灵敏度地测定样本中的糖化血红蛋白的方法、试剂及试剂盒。用于解决问题的方法本专利技术人为了解决该问题而进行了深入研究，发现了如下方法，通过使含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白与催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶在特定的阴离子性表面活性剂的存在下反应，可以简便且高灵敏度地测定含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白，从而完成了本专利技术。即，本专利技术涉及以下的[1]～[15]。[1]一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，使含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白与催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶在选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的存在下反应而生成过氧化氢，对所生成的上述过氧化氢进行测定。[2]根据[1]所述的测定方法，其中，上述过氧化氢的测定利用过氧化氢测定试剂进行。[3]根据[2]所述的测定方法，其中，上述过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无色型色原体的试剂。[4]根据[3]所述的测定方法，其中，上述无色型色原体为吩噻嗪系色原体。[5]根据[4]所述的测定方法，其中，上述吩噻嗪系色原体为10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪或其盐。[6]一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定试剂，其含有：催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶；以及选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂。[7]根据[6]所述的测定试剂，其还含有过氧化氢测定试剂。[8]根据[7]所述的测定试剂，其中，上述过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无色型色原体的试剂。[9]根据[8]所述的测定试剂，其中，上述无色型色原体为吩噻嗪系色原体。[10]根据[9]所述的测定试剂，其中，上述吩噻嗪系色原体为10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪或其盐。[11]一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定试剂盒，其包含：含有选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的第一试剂；以及含有催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶的第二试剂。[12]一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定试剂盒，其包含：含有催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶的第一试剂；以及含有选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的第二试剂。[13]根据[11]或[12]所述的测定试剂盒，其中，进一步将过氧化物酶及无色型色原体分别包含在第一试剂和第二试剂中、或者第二试剂和第一试剂中。[14]根据[13]所述的测定试剂盒，其中，上述无色型色原体为吩噻嗪系色原体。[15]根据[14]所述的测定试剂盒，其中，上述吩噻嗪系色原体为10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪或其盐。专利技术效果根据本专利技术，提供简便且高灵敏度地测定含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的方法、试剂及试剂盒。附图说明图1是示出使用在第二试剂中含有FPOX-47Δ3的试剂盒A的含血红蛋白试样中的HbA1c的测定中的、HbA1c浓度与吸光度差ΔE的关系的图。纵轴表示吸光度差ΔE(Abs×10000)，横轴表示HbA1c浓度(μmol/L)。具体实施方式(1)含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定方法本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，使含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白与催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶在选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N‑酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N‑酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的存在下反应而生成过氧化氢，对所生成的所述过氧化氢进行测定。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.29 JP 2016-1504981.一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特征在于，使含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白与催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶在选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂的存在下反应而生成过氧化氢，对所生成的所述过氧化氢进行测定。2.根据权利要求1所述的测定方法，其中，所述过氧化氢的测定利用过氧化氢测定试剂进行。3.根据权利要求2所述的测定方法，其中，所述过氧化氢测定试剂为含有过氧化物酶和无色型色原体的试剂。4.根据权利要求3所述的测定方法，其中，所述无色型色原体为吩噻嗪系色原体。5.根据权利要求4所述的测定方法，其中，所述吩噻嗪系色原体为10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪或其盐。6.一种含血红蛋白试样中的糖化血红蛋白的测定试剂，其含有：催化将糖化血红蛋白氧化而生成过氧化氢的反应的酶；以及选自由氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸、聚氧乙烯烷基醚乙酸、氨基的氢原子可被取代基取代的N-酰基氨基酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯多环苯基醚磷酸、烷基磷酸及它们的盐组成的组中的至少1种阴离子性表面活性剂。7.根据权利要求6所述的测定试剂，其还含有过氧化氢测定试剂。8.根据权利要求7所述的测定试剂，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：征矢阳代，片山有基，小川德之，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP