The invention discloses an enzyme activity determination method, which solves the problems of light color and long reaction time when methylene blue is used as a hydrogen acceptor in the prior art. The invention comprises the first step: mixing the sample with mixed reagent and placing it in an ultraviolet analyzer to adjust the suitable reaction conditions for the enzyme reaction; the second step: in a spectrophotometer, the speed of the decrease of the absorbance at 340 nm of the main wavelength is detected, and then the activity of the enzyme is calculated; the sample is an oxidoreductase, and the mixed reagent includes: phosphoric acid buffer, glutamic acid and 2. Ketoglutarate, NADPH, ATP, methylene blue, ethylene glycol. The invention can effectively reduce the reaction time, make the color change more remarkable and have better effect.
【技术实现步骤摘要】
一种酶活测定方法
本专利技术涉及酶活性检测领域，具体涉及的是一种酶活测定方法。
技术介绍
氧化还原酶是现已知酶种类中最多的一类，其中氧化酶(oxidase；oxydase)能催化物质被氧气所氧化的作用；脱氢酶(dehydrogenase)能催化从物质分子脱去氢的作用，多以催化供体中醇基团(-CHOH)、醛、酮基团(-HCO或-RCO)及烷基因(-CH2-CH2-)的氧化还原。它作为一类蛋白质，能够激活某些特殊的氢原子，使这些氢原子被适当的受氢体转移而将原来的物质氧化。天然受体主要有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)和细胞色素。氧化还原酶参与多种生命活动，包括糖、脂肪、氨基酸、核苷酸代谢、氨基酸合成和降解、丙酮酸的氧化、光合作用、戊糖磷酸途径(HMP)、氧化磷酸化、脂肪的氧化和合成等，且在能量转移和物质循环中也是不可或缺的。生物体的氧化还原酶活性在很大程度上反映了生物体的活性状态，能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。因此，氧化还原酶活性检测被广泛应用于污水生化处理、细菌菌落总数检验、水质毒性检验、土壤污染评价等研究与应用领...
【技术保护点】
1.一种酶活测定方法，包括：第一步：将样品与混合试剂混合后放置到紫外光分析仪中，调节到酶反应的合适反应条件；第二步：在分光光度计中，检测在主波长340nm吸光度下降的速度，进而测算出酶的活性大小；其特征在于，所述样品为氧化还原酶，所述混合试剂包括：磷酸缓冲液、谷氨酸、2‑酮戊二酸酯、NADPH、腺苷三磷酸、亚甲基蓝，乙二醇；其中，谷氨酸1～30mmol/l，2‑酮戊二酸酯1～50mmol/l，NADPH 0.15～0.3mmo/l，腺苷三磷酸1～10mmol/l，亚甲基蓝0.5～50mmol/L，磷酸缓冲液与乙二醇的体积比为1～10︰90～99。
【技术特征摘要】
1.一种酶活测定方法，包括：第一步：将样品与混合试剂混合后放置到紫外光分析仪中，调节到酶反应的合适反应条件；第二步：在分光光度计中，检测在主波长340nm吸光度下降的速度，进而测算出酶的活性大小；其特征在于，所述样品为氧化还原酶，所述混合试剂包括：磷酸缓冲液、谷氨酸、2-酮戊二酸酯、NADPH、腺苷三磷酸、亚甲基蓝，乙二醇；其中，谷氨酸1～30mmol/l，2-酮戊二...
【专利技术属性】
技术研发人员：张翔，刘金凤，向世明，宋立波，杜烨，彭捷，黄清东，
申请(专利权)人：四川百特芳华医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51
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