本发明专利技术涉及一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物浓度检测用酶组合物，更为详细地，涉及一种酶组合物，所述酶组合物用于检测存在于小便内的作为嘌呤代谢物(Purine met abolite)的次黄嘌呤(Hypoxanthine)及黄嘌呤(Xanthine)的浓度，并且包括黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase)、1‑甲氧基‑5‑甲基吩嗪硫酸甲酯盐(1‑Methoxy‑5‑meth ylphenazinium methyl sulfate,MePMS)、EZ‑cytox(WST‑8)以及磷酸钾缓冲溶液。
Enzyme compositions for hypoxanthine and xanthine concentration analysis as purine metabolites for cancer diagnosis
The present invention relates to an enzymatic composition for purine met abolite concentration detection for cancer diagnosis, in more detail, to an enzymatic composition for detection of hypoxanthine and xanthine concentrations in urine as purine metabolites, and for inclusion. Including xanthine oxidase (Xanthine oxidase), 1 methoxy 5 methylphenazine sulfate (1 methoxy 5 meth ylphenazinium methyl sulfate, MePMS), EZ CytOx (WST 8) and potassium phosphate buffer solution.
【技术实现步骤摘要】
作为用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物的次黄嘌呤及黄嘌呤浓度分析用酶组合物
本专利技术涉及一种为了肿瘤诊断而用于检测作为嘌呤代谢物的次黄嘌呤及黄嘌呤(以下称嘌呤代谢物)浓度的酶组合物，更为详细地，涉及一种酶组合物，所述酶组合物用于检测存在于小便内的嘌呤代谢物的浓度，包括黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase)、1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(1-Methoxy-5-methylphenaziniummethylsulfate,MePMS)、EZ-cytox(WST-8)以及磷酸钾(PotassiumPhosphate)缓冲溶液。
技术介绍
根据2014年统计厅发布的相关数据，经调查，韩国国内所有癌患者有217,057名，并且因癌而导致的死亡人数为76,855名，在各主要死亡原因中死亡率占第一位。现有的肿瘤诊断具有侵袭性并伴随有疼痛，难以避免以及难以诊断检查。因所述理由，侵袭性最小且对肿瘤的早期及预后进行预测的诊断方法成为新一代诊断方法。根据最近研究，在癌细胞的能量代谢及核酸合成方面，阐明了嘌呤代谢物的相关性。众所周知，与正常细胞不同，癌细胞快速地合成DNA并进行细胞复制，为此，大量消耗核酸、蛋白质、氨基酸、葡萄糖等物质。嘌呤碱作为核酸的构成物质，是具有六角形环的芳香族有机化合物。嘌呤碱的生物合成经过多种途径形成，分为从头合成途径(Denovopathway)和补救合成途径(Salvagepathway)。就从头合成途径的情况而言，经过与PRPP(磷酸核糖焦磷酸)、氨基酸、ATP(三磷酸腺苷)、二氧化碳等的反应生成，补救合成途径通过PRPP和次黄嘌呤(hypoxanthine)的结合实现。根据最近发表的论文，在癌症中谷氨酰胺的使用量增加，这被报道为在线粒体(mitochondria)的ATP合成中产生从头合成途径，从而使得癌细胞的ATP合成增加。并且认为，为了作为癌细胞的特征的无限分裂，需要大量核酸，产生从头合成途径和补救合成途径的活跃反应，但是在癌细胞中谷氨酰胺的使用量增多，与从头合成途径的生物合成相比，补救合成途径的再次使用率增加，据此，小便内嘌呤代谢物的浓度减小。先行技术文献【专利文献】(专利文献0001)韩国公开专利第2017-0021349号
技术实现思路
就本专利技术的用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物检测用酶组合物而言，通过案例研究的结果，可知，与普通人相比较时，就肿瘤发生患者的情况而言，存在于小便内的嘌呤代谢物的浓度变低，可以将所述嘌呤代谢物用作肿瘤发生诊断用生物标志物。据此，本专利技术的目的在于提供一种酶组合物，其使得存在于受检者的小便内的嘌呤代谢物与根据本专利技术的酶组合物发生反应，通过对在所述反应过程出现的颜色变化进行吸光度测定来计算小便内嘌呤代谢物的浓度，从而可以诊断肿瘤发生与否。此外，本专利技术的目的在于提供一种利用所述酶组合物来测定用于肿瘤诊断的嘌呤代谢体的浓度的方法。另外，本专利技术提供一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物检测用酶组合物，其用于检测存在于小便内的嘌呤代谢物的浓度，包括黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase)、1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(1-Methoxy-5-methylphenaziniummethylsulfate,MePMS)、EZ-cytox(WST-8)以及磷酸钾缓冲溶液。另外，本专利技术作为对存在于受检者的小便内的嘌呤代谢物的浓度进行测定的方法，其目的在于提供一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物的浓度测定方法，用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物的浓度测定方法的特征在于，利用所述酶组合物，黄嘌呤氧化酶将次黄嘌呤氧化为黄嘌呤、将黄嘌呤氧化为尿酸(Uricacid)的过程中产生的氢离子使得所述EZ-cytox的结构转化为甲臜(Formazan)形态，在所述转化过程中，颜色发生变化，通过对变化的颜色进行吸光度测定，从而计算小便内嘌呤代谢物的浓度，进而诊断出肿瘤发生与否。就根据本专利技术的酶组合物而言，用非侵袭的方法检测存在于小便内的嘌呤代谢物的浓度，从而可以在早期诊断出体内肿瘤(恶性或良性)发生与否。据此，可以预测出治疗的方向和程度，所以不仅可以进行有效的治疗，而且可以减少可能要支出的大笔的肿瘤治疗费。此外，就根据本专利技术的酶组合物而言，没有利用目前所使用的装备(核磁共振(NMR：NuclearMagneticResonance)、色谱分析法、质谱仪等)，所以可以在没有实验者的偏差或者小便样品的预处理等一系列的过程的情况下更加容易地诊断出肿瘤发生与否。附图说明图1是确认分析性能的图表。图2是确认检测限度、定量限度以及直进性的图表。图3是确认临床性能(胰腺癌)的图表。图4是确认临床性能(结肠直肠癌)的图表。图5是涉及试剂盒的形态的照片。图6是黄嘌呤氧化酶表达矢量图(xanthineoxidaseexpressionvectormap)。具体实施方式以下，对本专利技术进行更为详细地说明。本专利技术涉及一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物检测用酶组合物，其用于检测存在于小便内的嘌呤代谢物的浓度，并且包括黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase)、1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(1-Methoxy-5-methylphenaziniummethylsulfate,MePMS)、EZ-cytox(WST-8)以及磷酸钾缓冲溶液。所述磷酸钾缓冲溶液可以额外地包括NP-40(NonidetP40：乙基苯基聚乙二醇)。所述EZ-cytox是利用水溶性的四唑盐(tetrazoliumsalt)的细胞增殖/毒性检测试剂盒。所述酶组合物可以用于胰腺癌、结肠直肠癌等的诊断，但并非限于此。对本专利技术进行具体地说明，作为嘌呤代谢物的次黄嘌呤及黄嘌呤因黄嘌呤氧化酶而分别被氧化为黄嘌呤、尿酸(参照图片1)。在此过程中，与如下反应式1一样，产生两个氧和两个氢。【图片1】【反应式1】R-H+H2O+2O2->ROH+2O2-+2H+在所述反应过程中生成的氢离子使得EZ-cytox(WST-8,watersolubletetrazoliumsalt：水溶性四唑盐)的结构转化为甲臜(Formazan)形态(参照图片2)。【图片2】在所述过程中，原来EZ-cytox(WST-8)的颜色呈现出浅橙色，但转换为甲臜形态的同时呈现出深橙色。此外，使得所述氢离子能够与EZ-cytox发生反应的是1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(1-Methoxy-5-methylphenaziniummethylsulfate,MePMS)，所述1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐起到诱导颜色的作用(参照图片3)。【图片3】在所述次黄嘌呤及黄嘌呤氧化为尿酸的过程中所产生的氢离子的数量与结构发生了转化的EZ-cytox甲臜(Formazan)的数量相同，换句话说，次黄嘌呤及黄嘌呤的浓度相同。据此，所呈现出的颜色越呈现为深橙色，则意味着转化的甲臜结构越多，意味着在氧化过程中生成了大量氢离子，这意味着体内嘌呤代谢物的浓度越高，所以这样的结果主要会出现在没有发生肿瘤的普通人身上。相反，所呈现出的颜色越呈现为浅橙色，则意味着转化的甲臜结构越少，这是因为在氧化过程中生成了少量氢离子，换句话说，体内次黄嘌呤及黄嘌呤的浓度低，所以这样的结果主要会出现在发生肿瘤的患者身上。据此本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物浓度检测用酶组合物，其用于检测存在于小便内的作为嘌呤代谢物的次黄嘌呤及黄嘌呤的浓度，并且包括黄嘌呤氧化酶、1‑甲氧基‑5‑甲基吩嗪硫酸甲酯盐、EZ‑cytox(WST‑8)以及磷酸钾缓冲溶液。
【技术特征摘要】
2017.05.25 KR 10-2017-00647331.一种用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物浓度检测用酶组合物，其用于检测存在于小便内的作为嘌呤代谢物的次黄嘌呤及黄嘌呤的浓度，并且包括黄嘌呤氧化酶、1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐、EZ-cytox(WST-8)以及磷酸钾缓冲溶液。2.根据权利要求1所述的用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物浓度检测用酶组合物，其特征在于，所述磷酸钾缓冲溶液额外地包括NP-40。3.根据权利要求1所述的用于肿瘤诊断的嘌呤代谢物浓度检测用酶组合物，其特征在于，对在所述组合物与小便反应时呈现出的颜色进行吸光度测定，从而计算小便内嘌呤代谢物的浓度，...
【专利技术属性】
技术研发人员：申东进，金昌贤，
申请(专利权)人：高普生物有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR
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