糖化血红蛋白的测定方法技术

本发明专利技术提供测定样品中的糖化血红蛋白的方法，其特征在于将样品中的糖化血红蛋白直接氧化，和测定由此生成的物质或由此消耗的物质；和测定样品中的糖化血红蛋白的方法，其特征在于，使用酶将样品中的糖化血红蛋白直接氧化，和测定由此生成的物质或由此消耗的物质。测定糖化血红蛋白的该方法在生活习惯相关疾病如糖尿病的诊断中是有用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定样品中的糖化血红蛋白的方法。
技术介绍
糖化蛋白被包含在生物样品如包括在生命体中的血液的体液和毛发等中。在血液 中存在的糖化蛋白的浓度取决于溶解在血清中的糖如葡萄糖的浓度，并且最近，在临床诊 断的领域中，作为在血液中的糖化蛋白的血红蛋白Ale (在下文中，HbAlc ;非专利文献1)的 浓度的测定正被用于诊断和监控糖尿病。作为用于测量该HbAlc的方法，使用高效液相色 谱法（HPLC)的仪器分析方法（非专利文献2)、使用抗原-抗体反应的免疫测定法（例如， 非专利文献3)等是已知的，但是近年来，发展了酶测定法，并且例如，发展了使用蛋白酶和 糖化肽氧化酶的方法（专利文献1)。酶测定法可以应用到多功能自动分析仪，并且由于操 作也是简单的，所以它们被积极地开发。 用在酶测定法中的糖化肽氧化酶是催化反应的酶，所述反应通过在氧分子的存 在下氧化裂解在通过由葡萄糖的半缩醛和肽的N末端氨基之间的反应生成的葡萄糖胺的 Amadori重排生成的酮糖衍生物中的C-N键而生成糖邻酮醛糖（α -酮醛）、肽和过氧化氢。 在酶测定法的情况下，已知一种方法，其中首先利用蛋白酶分解HbAlc，并且从血 红蛋白的β链的N末端生成α-糖化缬氨酰组氨酸（在下文中表示为α-FVH);然后，使 糖化肽氧化酶作用于生成的a -FVH以生成过氧化氢，在过氧化物酶的存在下由生成的过 氧化氢生成醌系色素，并且通过使用分光光度计的比色法确定生成的量（专利文献1)。 然而，常规已知的糖化肽氧化酶（例如，专利文献2、3、4和5和非专利文献4)能 作用的糖化肽通常为二肽，最大为六肽（专利文献6和7)，并且作用于具有更长的氨基酸链 长的糖化肽和作用于糖化蛋白的糖化肽氧化酶是未知的。因此，如上所述，关于酶测定法， 唯一已被报道的方法是包含如下的方法：使蛋白酶作用于糖化蛋白，使糖化肽氧化酶作用 于生成的糖化肽，和测定生成的过氧化氢。 关于包含使蛋白酶作用于糖化血红蛋白、使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽、 和测定生成的过氧化氢的这个方法，在除了糖化血红蛋白的测定外使用自动分析仪等同时 进行其它测定的情况下，在糖化血红蛋白测定试剂中的蛋白酶可能作用于其它试剂并且可 能影响测定值。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本专利申请特开（JP-A) 2001-95598号公报（未审查的，公开的日 本专利申请）。 专利文献2 :国际公开第W0 2004/104203号小册子。 专利文献 3 :JP-A (特开）2003-235585。 专利文献4 :国际公开第W0 2004/038033号小册子。 专利文献5 :国际公开第W0 2010/041715号小册子。 专利文献6 :国际公开第WO 2004/038034号小册子。 专利文献7 :国际公开第W0 2008/108385号小册子。 非专利文献 非专利文献1 :临床化学和实验室医学（Clin Chem Lab Med)，第36卷，第299~ 308 页（1998)。 非专利文献 2 :糖尿病（Diabetes)，第 27 卷（2)，第 102-107 页（1978)。 非专利文献3 :日本临床检查自动化学会会志（Nihon Rinsho Kensa Jidoka Gakkai Kaishi(Journal of the Japan Society for Clinical Laboratory Automation))，第 18 卷，第 4 号，第 620 页（1993)。 非专利文献4 :应用微生物学和生物技术（Appl Microbiol Biotechnol)，第78 卷，第5号，第775~781页（2008)。
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的是提供，其包含将糖化血红蛋白直接氧化 和测定由氧化生成或消耗的物质，而不使蛋白酶作用于糖化血红蛋白。 技术方案 本专利技术涉及以下⑴~（4)。 (1)测定样品中的糖化血红蛋白的方法，其中所述方法包括将样品中的糖化血红 蛋白直接氧化，和测定由氧化生成或消耗的物质。 (2)如⑴所述的方法，其中使用酶将糖化血红蛋白直接氧化。 (3)如⑴或⑵所述的方法，其中生成的物质是过氧化氢。 (4)如（1)~（3)所述的方法，其中糖化血红蛋白是血红蛋白Ale。 有益效果 本专利技术提供测定糖化血红蛋白的方法，其包括将样品中的糖化血红蛋白直接氧 化，并且测定由氧化生成或消耗的物质。【附图说明】 图1显示了示出通过本专利技术的使用FP0X-19将HbAlc直接氧化的HbAlc测定方法 确定的HbAlc浓度和通过使用HPLC法（K0500法）和血红蛋白-SLS法两者的HbAlc测定 方法确定的HbAlc浓度之间的相关性的图。 图2显示了示出通过本专利技术的使用FP0X-20将HbAlc直接氧化的HbAlc测定方法 确定的HbAlc浓度和通过使用HPLC法（K0500法）和血红蛋白-SLS法两者的HbAlc测定 方法确定的HbAlc浓度之间的相关性的图。 图3显示了示出本专利技术的通过使用FP0X-32将HbAlc直接氧化的HbAlc测定方法 确定的HbAlc浓度和通过使用HPLC法（K0500法）和血红蛋白-SLS法两者的HbAlc测定 方法确定的HbAlc浓度之间的相关性的图。 图4显示了示出本专利技术的通过使用FP0X-42将HbAlc直接氧化的HbAlc测定方法 确定的HbAlc浓度和通过使用HPLC法（K0500法）和血红蛋白-SLS法两者的HbAlc测定 方法确定的HbAlc浓度之间的相关性的图。【具体实施方式】 1.本专利技术的测定糖化血红蛋白的方法 本专利技术的测定方法是用于测定糖化血红蛋白的方法，其包括将糖化血红蛋白直接 氧化和测定由氧化生成或消耗的物质。在本专利技术中HbAlc作为糖化血红蛋白是优选的。虽 然用于将糖化血红蛋白直接氧化的方法可以是任何方法，只要能将糖化血红蛋白直接氧化 即可，但是优选使用酶的氧化方法。 以下描述本专利技术的测定方法。 (样品和测定对象） 在本专利技术的测定方法中使用的样品没有特别限制，只要其包含糖化血红蛋白即 可，并且实例包括生物样品如全血、血浆、血清、血细胞、细胞样品、尿、脊髓液、汗、泪液、唾 液、皮肤、粘膜和毛发。作为样品，优选全血、血浆、血清、血细胞等，并且特别优选全血、血细 胞等。全血包括来自全血的血细胞级分与血浆混合的样品。关于这些样品，可以使用进行 了预处理如溶血、分离、稀释、浓缩和纯化的样品。 血红蛋白是由两种亚单元α链和β链各自两个组成的血红素蛋白，且具有64000 的分子量。在血红蛋白的α链的Ν端的三个氨基酸的序列是缬氨酸-亮氨酸-丝氨酸， 并且在β链的Ν端的三个氨基酸的序列是缬氨酸-组氨酸-亮氨酸。将HbAlc定义为其 中β链的N端缬氨酸残基被特别糖化的血红蛋白；然而，已知血红蛋白在分子内具有多个 糖化位点，其包括α链的Ν端（生物化学杂志（The Journal of Biological Chemistry) (1980)，256,3120 ~3127)。 (测定方法） 在本专利技术中，在样品中的待测糖化血红蛋白可以例如通过按序执行以下步骤（i) 和（ii)进行测定。 (i)通过使酶作用于样品中的糖化血红蛋白而将糖化血红蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定样品中的糖化血红蛋白的方法，其中所述方法包括将样品中的糖化血红蛋白直接氧化，和测定由氧化生成或消耗的物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：小川德之，楳原芙美，木村豪秀，村田幸作，桥本涉，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP