血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒及其制备方法、检测方法技术

本发明专利技术提供一种血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒，包括上下卡壳、免疫试纸条、检测试纸等，含有血红蛋白单抗、血红蛋白-结合珠蛋白复合物单抗和转铁蛋白单抗的金标复合物划在硝酸纤维素膜上，硝酸纤维素膜上平行设置有3条检测线、质控线(15)以及金标复合物划膜线(8)。本发明专利技术还提供了血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒的制备方法和检测方法。本发明专利技术操作方便简单，性能稳定，结果准确，在临床上对直肠癌或结肠癌等下消化道出血症状的肿瘤早期诊断和鉴别有较好的参考价值，对消化道出血性疾病的阳性检出率有显著提高。适合临床医检和家庭自检，同时为此类疾病的大规模普查提供一种手段。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒，包括上下卡壳、免疫试纸条、检测试纸等，含有血红蛋白单抗、血红蛋白-结合珠蛋白复合物单抗和转铁蛋白单抗的金标复合物划在硝酸纤维素膜上，硝酸纤维素膜上平行设置有3条检测线、质控线(15)以及金标复合物划膜线(8)。本专利技术还提供了血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒的制备方法和检测方法。本专利技术操作方便简单，性能稳定，结果准确，在临床上对直肠癌或结肠癌等下消化道出血症状的肿瘤早期诊断和鉴别有较好的参考价值，对消化道出血性疾病的阳性检出率有显著提高。适合临床医检和家庭自检，同时为此类疾病的大规模普查提供一种手段。【专利说明】血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试 剂盒及其制备方法、检测方法
本专利技术属于临床体外诊断试剂
，具体为一种血红蛋白、血红蛋白-结合 珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒，应用免疫学原理、侧向层析技术以及化学邻甲苯胺显 色法，通过检测人粪便中的血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白，发现下消 化道出血症状，早期诊断直肠癌或结肠癌等下消化道肿瘤。
技术介绍
奠便中的血红蛋白（Hb,Hemoglobin)又称便隐血（FOB,FecalOccultBlood)， 目前在临床上被看作是诊断直肠癌、结肠癌的肿瘤标志物之一。结合珠蛋白（Hp， Haptoglobin，也称为触珠蛋白或珠球蛋白）广泛存在于人类和许多哺乳动物的血液及其 他体液中，个体内的含量比较稳定。结合珠蛋白具有结合游离血红蛋白的能力，作用类似于 血红蛋白的转运蛋白，血红蛋白容易与结合珠蛋白结合形成稳定不可逆的复合物，叫做血 红蛋白-结合珠蛋白复合物（Hb-HpComplex)。除作为溶血诊断指标外，近年来随着研宄 的深入，结合珠蛋白还与恶心肿瘤、肾病、组织损伤等高度相关。转铁蛋白（TF)，检测的敏 感度和特异性与血红蛋白检测相当，但是稳定性明显高于血红蛋白，可以克服被检测标本 中的血红蛋白在胃肠道内滞留时间过长而被分解或破坏后出现的假阴性结果。消化道少量 出血可不引起大便颜色改变，只有靠便隐血试验才能确定。凡是消化道疾病引起少量出血 的，均可有隐血便，因此隐血检查对于诊断多种消化道出血性疾病都有重要价值，是普查筛 选消化道疾病的有效手段，便隐血试验已经成为人们不断深入研宄的热点。 便隐血在目前临床上主要检测方法有化学法和免疫学方法：化学法常用的有邻甲 苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹拉米洞法、俞创木脂法等。其设计原理基本相同，都是基 于血红蛋白中的含铁血黄素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化氢， 分解释放新生态氧，氧化上述色原物质而呈色，显色的深浅反应了血红蛋白的多少。然而在 实际应用中由于粪便成份差别很大，各实验室具体操作细节不同，用化学法检测结果存在 很大差异，并且缺乏特异性和准确性。外源性食物中如果含有血红蛋白、肌红蛋白，其血红 素的作用均可以使实验呈阳性，大量生食蔬菜中含有活性的植物过氧化物也可催化过氧化 物分解，出现假阳性反应。血液在肠道中停留过久，血红蛋白变性，则会出现与病情不符的 阴性结果。此外，如果患者服用大量的维生素C或其他具有还原性的药物，在实验中可将过 氧化物还原，从而不能氧化色原物质，也可使实验出现假阴性。因此，化学法易受干扰因素 多、假阳性率高、冰醋酸配成的试剂易形成晶体等条件限制，未能得到广泛使用，亟需一种 特异性好、灵敏度高、检测快速、简单的隐血检测方法。 免疫学方法是目前检测隐血常用的方法，主要包括免疫单抗法、酶联免疫吸附法、 免疫斑点法、胶乳免疫透射比浊法、放射免疫扩散法、反向间接血凝法、胶体金标记夹心免 疫检验法等。免疫法检测的指标一般是人血红蛋白或人红细胞基质，所用抗体是抗人血红 蛋白抗体或抗人红细胞基质抗体，检测人血红蛋白可检出消化道任何部位的出血，检测人 红细胞基质只能检出下消化道出血，但是血红蛋白由于受到肠道内细菌的作用及大肠粘膜 产生的粘液成分影响而变性，易出现假阴性反应。 血红蛋白检测的局限性：免疫层析一步法目前是用抗人血红蛋白抗体来特异性结 合人血红蛋白抗原，此法简便、快捷，只特异性地针对人血红蛋白抗原表位，基本排除了饮 食及药物等因素的干扰，被世界卫生组织胃肠镜检查协会推荐作为粪便隐血实验的一种较 为确认的方法。免疫胶体金法隐血试验有一定的灵敏度，高于或低于此范围均可出现假阴 性。单克隆抗体胶体金法在检测消化道出血有时候会漏诊，其原因主要有： A.血红蛋白经过消化酶降解而变性，已不具有原来的免疫原性； B.过量的大出血而致使反应体系中抗原过剩，出现后带现象； C.病人的血红蛋白抗原结构改变也会影响血红蛋白或红细胞基质与单克隆抗体 亲和度。 到目前为止，单一的大便隐血FOB诊断方法的灵敏度和特异性都有待进一步提 高。临床上往往需要两种或以上的方法联合检测。目前市场上已有相关的联合检测试剂出 现。 转铁蛋白的检测对于消化道出血的诊断有很重要的价值。转铁蛋白检测，敏感度 和特异性与血红蛋白检测相当，但稳定性明显高于血红蛋白，可以克服被检测标本中的血 红蛋白在胃肠道内滞留时间过长而被分解或破坏后出现的假阴性结果。 血红蛋白-结合珠蛋白复合物检测：隐血反应测的是有无隐血，而不是有无肿瘤 标志，隐血反应呈阳性必须用其他方法确认，例如肠镜等，这是因为可能由其他因素引起的 偶尔出血阳性，同样潜血反应阴性也有可能是假阴性，这是由于早期肿瘤少量出血和大便 中结合珠蛋白形成复合物，而这种复合物抗血红蛋白抗体不能对之识别，检测结果呈阴性。 日本的目黑高志对48例结肠癌或直肠癌患者的粪便，用放射免疫法检测其血红蛋白-结合 珠蛋白复合物Olb-Hp)及血红蛋白（Hb)，结果阳性分别为44例及35例，这里至少有9例 便隐血者为假阴性，也就是说测定大便隐血诊断直肠癌或结肠癌的阳性符合率仅在70%左 右，而测定血红蛋白-结合珠蛋白的复合物对直肠癌或结肠癌的阳性符合率在90 %以上， 造成测定便隐血对直肠癌或结肠癌20% -30%假阴性主要原因：由于消化道少量出血，释 放出的血红蛋白（Hb)在经过较长的肠道时与粪便内的Hp结合成复合物引起隐血假阴性， 显然检测粪便中的血红蛋白来诊断是否患直肠癌或结肠癌的肿瘤标志物有严重漏检。 临床上往往需要两种或以上的方法联合检测，目前市场上已有血红蛋白-转铁 蛋白联检试剂盒、血红蛋白-Hb-Hp复合物联检试剂盒等。如中国专利技术专利申请公布号为 CN101965515A(公布日为2011年2月2日）提供了一种用于检测潜血的方法和装置，包括 检测在GI样品中的转铁蛋白和血红蛋白，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转 铁蛋白和血红蛋白的各自的预定值相比较，由此去顶来自GI的出血，并提供使用横向流动 三明治免疫测定装置来实现对转铁蛋白和血红蛋白的检测，该技术方案缺少血红蛋白-结 合珠蛋白复合物检测，对直肠癌或结肠癌的阳性符合率较低。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试 剂盒，由一根同时检测血红蛋白、血红蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血红蛋白、血红蛋白‑结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒，包括上卡壳(1)、下卡壳(2)、置于上卡壳和下卡壳之间的免疫试纸条(6)和检测试纸(20)，上卡壳设有加样孔(3)、观察窗口(4)和化学试纸观察窗口(17)，下卡壳(2)开有与免疫试纸条(6)位置对应的第一凹槽(5)和与化学法试纸位置对应的第二凹槽(21)，其特征在于免疫试纸条(6)包括吸水纸(10)、硝酸纤维素膜(9)、样品垫(7)和PVC底板(11)，样品垫边缘处黏贴在硝酸纤维素膜上，吸水纸边缘处黏贴在硝酸纤维素膜上，硝酸纤维素膜固定在PVC底板上，含有血红蛋白单抗、血红蛋白‑结合珠蛋白复合物单抗和转铁蛋白单抗的金标复合物划在硝酸纤维素膜上，硝酸纤维素膜上平行设置有3条检测线、质控线(15)以及靠近硝酸纤维素膜(9)底端的金标复合物划膜线(8)，质控线(15)处包被有羊抗鼠IgG，3条检测线处同时包被有血红蛋白单抗、血红蛋白‑结合珠蛋白单抗和转铁蛋白单抗，金标复合物划膜线处含有血红蛋白单抗、血红蛋白‑结合珠蛋白复合物单抗和转铁蛋白单抗的金标复合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢福文，詹特斌，丁超，
申请(专利权)人：杭州慧缘泰医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33