一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及试剂盒技术领域，尤其涉及一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述金标抗体工作液由胶体金浓缩液与金标抗体稀释液按体积比1:5～30的比例混合而成；洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。利用该试剂盒可以快速、准确的检测2019‑nCOV，缩短了检测时间，操作简单方便。

2019 novel coronavirus antibody detection kit and preparation method thereof

【技术实现步骤摘要】
一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及试剂盒
，尤其涉及一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”，2020年1月12日被世界卫生组织命名。新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。S蛋白是病毒的主要蛋白之一，其编码基因用于病毒分型。N蛋白包裹病毒基因组，可作为诊断抗原。基于目前的流行病学调查，其临床表现：潜伏期一般为3～7天，最长不超过14天。人群普遍易感，以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重型病例多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。值得注意的是重型、危重型患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，多在1周后恢复。多数患者预后良好，儿童病例症状相对较轻，少数患者病情危重。死亡病例多见于老年人和有慢性基础疾病者。可能的传播途径包括飞沫传播、粪口传播以及接触传播。新型冠状病毒(2019-nCoV)感染后，机体可产生特异性抗体，如出现阳性结果表明机体感染过新型冠状病毒(2019-nCoV)。目前实验室检测方法主要采用病毒核酸检测，该方法检测时间长，对实验室不同反应条件空间要求相互独立，且需专业人员通过设备进行操作，具有一定的局限性，不适合大规模检测应用。因此针对上述问题，有必要开发一种检测2019新型冠状病毒抗体试剂盒及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种简便、快速、检测准确的2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述检测卡包括上板块和下板块，所述上板块上设有反应窗口，所述下板块的内部设有反应膜和吸水垫，与所述反应窗口相对应的所述反应膜上设有包被羊抗鼠抗体的质控区、包被2019-nCoV的N蛋白抗原的第一检测区和包被2019-nCoV的S蛋白抗原的第二检测区；所述金标抗体工作液由胶体金浓缩液与金标抗体稀释液按体积比1:5～30的比例混合而成；所述洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。作为一种改进的技术方案，每100ml所述金标抗体稀释液由121.1～242.2mg三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化钠、0.5～0.7mg的牛血清白蛋白、3～7wt％的甘露醇、2～10wt％的蔗糖、2mL的甘油、0.01～0.1wt％的PEG20000、0.01～0.1wt％的PVP40和蒸馏水配置而成。作为一种改进的技术方案，所述洗涤液配制时按照每100mL、10～20mM的Tris溶液中含有氯化钠0.9～2.0g、牛血清白蛋白0.3～0.6g、1ml10wt％的PVP-40、PC3000.1～0.5mL进行配制，其中所述Tris溶液的pH为8.0-8.5。作为一种改进的技术方案，所述上板块和所述下板块为卡固连接，其中所述下板块的底面上设有卡槽，所述上板块的底面上设有与所述卡槽相适配的卡柱。作为一种改进的技术方案，所述反应窗口为一个上底直径为1—3cm的倒锥形引流窗口，所述反应窗口的底部设有突出部。作为一种改进的技术方案，所述下板块的两侧内壁上分别设有卡块。本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种简便、快速、检测准确的2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)检测卡的组装将吸水垫放置于下板块内部，再将反应膜放置在吸水垫上方，将上板块和下板块卡固在一起；(2)包被反应膜1)包被抗原用抗原包被液分别将2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCoV的S蛋白抗原稀释至终浓度为0.2mg/ml，再将配置的2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCoV的S蛋白抗原分别喷涂于反应膜上，形成第一检测区和第二检测区；2)包被羊抗鼠抗体将PBS缓冲液将羊抗鼠IgG多抗稀释至2mg/ml，再将其喷涂于上述1)的反应膜上，形成质控区；3)烘干处理上述操作结束后再将检测板在37℃条件下干燥2-4h，在湿度小于40％的环境下平衡2h后，放置在铝箔袋内封口保存；(3)金标抗体工作液的配置1)胶体金的标记：取0.5～1wt％的氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入0.4～0.8wt％柠檬酸三钠溶液0.8～1mL，混匀，继续煮沸5～15min，冷却至室温，加入1mg/mL鼠抗人lgM单抗0.2～0.5mL，搅拌10～30min后再加入0.3～0.7mg牛血清白蛋白，继续搅拌10～30min，离心，弃去上清液，下层沉淀即胶体金标浓缩液；2)金标抗体稀释液配置：将121.1～242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化钠和0.5～0.7mg的牛血清白蛋白混合，加入双蒸水，溶解后依次加入3～7wt％甘露醇、2～10wt％蔗糖、2mL甘油、0.01～0.1wt％PEG20000，0.01～0.1wt％PVP40，定容至100mL，得到金标抗体稀释液；3)将胶体金标浓缩液与金标抗体稀释液按体积比1:5～30的比例混合，得到金标抗体工作液；(4)洗涤液的配置配制10～20mMTris溶液100mL，用HCl调节pH至8.0～8.5，得到Tris-HCl缓冲液，再依次加入NaCl0.9～2.0g、BSA0.3～0.6g、1mL10wt％PVP-40和PC3000.1～0.5mL，混匀，得到洗涤液；(5)试剂盒的组装将金标抗体工作液和洗涤液分别放入容量瓶内封装，将检测卡、金标抗体工作液瓶、洗涤液瓶以及比色卡分别放入包装盒内部，封装即可。作为一种改进的技术方案，抗原包被量为0.2mg/ml的2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和2019新型冠状病毒的S蛋白抗原各0.5μl，所述羊抗鼠抗体包被量为2mg/ml的羊抗鼠抗体0.5μl。作为一种改进的技术方案，所述抗原包被液由121.1～242.2mg三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg氯化钠、5-15ml甘油、1～3wt％海藻糖、0.01～0.1wt％明胶、0.1～0.5％Pro-clin300和双蒸水配置而成，所述抗原包被液的pH为8.0～8.5。采用了上述技术方案后，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术采用金标渗滤法并包被高灵敏度2019-nCoV抗原检测新型冠状病毒，采用硝酸纤维膜作为反应膜，因采用大表面积高蛋白质结合力的小孔径膜的穿流式反应模式，可促使抗原和抗体在膜上反应时处于高浓度状态，保证了检测灵敏度、特异性，缩短了反应时间，3min即可判本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述检测卡包括上板块和下板块，所述上板块上设有反应窗口，所述下板块的内部设有反应膜和吸水垫，与所述反应窗口相对应的所述反应膜上设有包被羊抗鼠抗体的质控区、包被2019-nCOV的N蛋白抗原的第一检测区和包被2019-nCOV的S蛋白抗原的第二检测区；所述金标抗体工作液由胶体金标浓缩液与金标抗体稀释液混合而成；所述洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：包括检测卡、金标抗体工作液、洗涤液和比色卡；所述检测卡包括上板块和下板块，所述上板块上设有反应窗口，所述下板块的内部设有反应膜和吸水垫，与所述反应窗口相对应的所述反应膜上设有包被羊抗鼠抗体的质控区、包被2019-nCOV的N蛋白抗原的第一检测区和包被2019-nCOV的S蛋白抗原的第二检测区；所述金标抗体工作液由胶体金标浓缩液与金标抗体稀释液混合而成；所述洗涤液包括Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和防腐剂。


2.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：每100ml所述金标抗体稀释液由121.1～242.2mg三羟甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化钠、0.5～0.7mg的牛血清白蛋白、3～7wt％的甘露醇、2～10wt％的蔗糖、2mL的甘油、0.01～0.1wt％的PEG20000、0.01～0.1wt％的PVP40和蒸馏水配置而成。


3.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液配制时按照每100mL、10～20mM的Tris溶液中含有氯化钠0.9～2.0g、牛血清白蛋白0.3～0.6g、1ml10wt％的PVP-40、PC3000.1～0.5mL进行配制，其中所述Tris溶液的pH为8.0-8.5。


4.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述上板块和所述下板块为卡固连接，其中所述下板块的底面上设有卡槽，所述上板块的底面上设有与所述卡槽相适配的卡柱。


5.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述反应窗口为一个上底直径为1—3cm的倒锥形引流窗口，所述反应窗口的底部设有突出部。


6.根据权利要求1所述的一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述下板块的两侧内壁上分别设有卡块。


7.一种如权利要求1所述的2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)包被反应膜
1)包被抗原
用抗原包被液分别将2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCOV的S蛋白抗原稀释至终浓度为0.2mg/ml，再将配置的2019-nCoV的N蛋白抗原和2019-nCoV的S蛋白抗原分别喷涂于反应膜上，形成第一检测区和第二检测区；
2)包被羊抗鼠抗体
将PBS缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，王传新，冯照雷，杜鲁涛，李娟，彭芹，杨金红，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37