本发明专利技术公开了一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条及其制备方法和应用，特点是包括样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，PVC底板上按顺序依次粘附有样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，检测线和质控线上包被有敌稗分子印迹聚合物‑量子点复合物，其制备方法包括敌稗分子印迹聚合物‑量子点复合物的制备步骤；将敌稗分子印迹聚合物‑量子点复合物均匀吸附在硝酸纤维素膜上，形成荧光强度一致的检测线T线和质控线C线，在PVC底板上按顺序依次粘附样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫得到试纸条的步骤，优点是选择性强、灵敏度和准确性高。
A biomimetic immunofluorescence test strip for the detection of herbicide fenpropanil and its preparation and Application
【技术实现步骤摘要】
一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种快速检测环境水体中除草剂类内分泌干扰物敌稗的方法，尤其是涉及一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条及其制备方法和应用。
技术介绍
敌稗是一种酰胺类除草剂，对稻苗安全而对稗草有很强的触杀作用，在我国广泛应用于多种农作物，在生产、使用的过程中亦可以进入环境造成土壤、水体、大气的污染。敌稗在植物体内几乎不输导，只是在药剂接触部位起作用。它的作用机制是多方面的，不仅破坏植物的光合作用，而且还抑制呼吸作用与氧公磷酸化作用，干扰核酸与蛋白质合成等，从而使敏感植物的生理机能受到影响，加速失水、叶片逐渐枯干，最后死亡。动物毒理学研究表明：敌稗会影响肝和脾的正常生理功能，提高间质细胞瘤和淋巴瘤的发病率，所以敌稗对于环境生态和人类健康的影响不容忽视。目前常用的检测敌稗的技术主要是色谱方法，主要有气相色谱法（Gaschromatography,GC）、液相色谱质谱联用法（liquidchromatography-massspectrometry,LC-MS）、气相色谱质谱连用法（Gaschromatography-massspectrometry,GC-MS）。上述方法检测过程复杂，而且无法实现现场检测。仿生免疫层析试纸快速检测技术是基于仿生免疫层析原理建立起来的一种适用于现场检测的技术，典型的仿生免疫层析试纸包括样品垫、PVC底板、检测线、控制线、玻璃纤维膜和吸收垫。以微孔膜作为固相载体，经渗透和毛细管虹吸作用使待测样品中的抗原与膜上包被的抗体结合，通过标记垫上标记物来呈现反应结果。定量层析技术，是在传统仿生免疫层析技术基础上发展起来的一种新型的定量检测技术。该技术不但具有操作简便、检测快速和便携性强的优点，还能通过荧光信号的强弱实现检测结果的定量。而由于荧光信号的漂移、检测时间不固定等操作原因、试纸条批内不均一、主校准曲线漂移等因素的影响，检测结果常常发生测定偏差较大问题，从而不能准确真实的反应待测物质的含量，因此，如何提高检测的精确度及可信度是需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种选择性强、灵敏度和准确性高的检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条及其制备方法和应用。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条，包括样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，所述的PVC底板上按顺序依次粘附有样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述的检测线和所述的质控线上包被有敌稗分子印迹聚合物-量子点复合物。所述的检测线与所述的质控线之间的间隔距离为5mm，所述的检测线和所述的质控线之间的硝酸纤维素膜的中间隔断距离为1mm。被检测物通过层析进入检测线而无法到达控制线。上述检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条的制备方法，包括以下步骤：（1）敌稗配制采用由环己烷和丙酮按体积比9：1的比例混合而成的溶液为溶剂配制敌稗溶液；（2）敌稗分子印迹聚合物-量子点(MIP-QDs)复合物的制备将1.8mL的Tritonx-100和7.5mL的致孔剂环己烷加入圆底烧瓶，以400r/min的速度常温搅拌15min，然后向圆底烧瓶中加入400μL浓度为1mg/mL的溶于氯仿的CdSe/ZnS量子点（QDs）溶液，再加入50μL的交联剂TEOS和100μL的氨水，黑暗常温搅拌2小时；将45.6μL的APTES和110μL的浓度为25mg/mL的敌稗溶液加入到小棕瓶中，黑暗中搅拌2小时后；目的是待测物质敌稗与功能单体APTES的键合；将小棕瓶中的混合物倒入圆底烧瓶，继续黑暗环境下搅拌12小时；然后倒入盛有10mL丙酮的离心管中，等待沉淀完成后，以9000r/min离心10分钟后，去除上清液；离心管中加入6mL超纯水，震荡20分钟后以9000r/min离心20分钟后，去除上清液；离心管中加入由乙醇和乙腈按体积比8：2的比例混合而成的溶液，超声均匀后震荡40分钟后，以9000r/min转速离心15分钟，去除上清液；重复用由乙醇和乙腈按体积比8：2的比例混合而成的溶液洗涤除去模板分子敌稗直到用荧光分光光度计测量聚合物的荧光值不再变化，即得到敌稗分子印迹聚合物-量子点(MIP-QDs)复合物，将其加入到含有1mL乙醇的琥珀色玻璃瓶内，放置在4℃冰箱避光保存；（3）硝酸纤维素膜上检测线T线和质控线C线的制备将洗脱去模板分子的敌稗分子印迹聚合物-量子点复合物均匀吸附在硝酸纤维素膜上，形成荧光强度一致的检测线T线和质控线C线，常温下干燥避光保存；（4）仿生免疫荧光试纸条的制备在PVC底板上按顺序依次粘附样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，得到检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条。上述检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条的检测方法，包括以下步骤：将检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条水平放置，用滴管向试纸孔缓慢逐滴加入含有待测样品的检测体系，在紫外灯下，当存在高于0.005mg/L的敌稗分子时，可以肉眼捕捉检测线处明显的荧光猝灭，即可以判断检测体系中是否存在敌稗，检测体系配置方法为：配制4mmol/L的PBS缓冲液，加入氯化钠使体系中氯化钠浓度为0.045g/L，调整混合液pH为9，将待测样品溶于检测体系中即可。其中优化该检测体系的目的是提高荧光试纸条的灵敏度，具体实验操作目的是该体系可以用于配制不同浓度敌稗分子的溶剂。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条及其制备方法，利用量子点的优良荧光特性和分子印迹技术的高选择性，采用表面接枝技术制备了敌稗的MIP-QDs，优化了获得最大荧光抑制效率的最佳条件。利用竞争法来检测样品中敌稗，根据检测线条带的荧光强弱变化，利用凝胶成像技术判断待测样品中是否含有目标物并且达到可视化检测的目的。优点如下：1、本专利技术基于MIP-QDs的仿生免疫荧光试纸条检测敌稗是利用类似抗体的特异性识别实现的，因此具有较高的特异性；2、本专利技术的仿生免疫荧光试纸条检测时间快速，只需要便携式紫外灯检测就可达到低浓度可视化检测的目的，检测成本低；3、本专利技术的检测试纸条检测限低，通过凝胶成像仪对猝灭强度进行评估获得能够与检测信号定量比较的信号并建立标准曲线，可用于检测环境中低浓度敌稗；4、本专利技术的检测试纸条操作简便，不需由专业人员操作。附图说明图1为本专利技术仿生免疫荧光试纸条的主视图；，其中图中各标注如下：1、样品垫、2、玻璃纤维膜、3、PVC底板、4、硝酸纤维素膜、5、检测线T线、6、质控线C线、7、吸水垫；图2为仿生免疫荧光试纸条在空白对照以及敌稗浓度分别为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L时紫外仪下荧光变化图（左）以及凝胶成像仪下荧光变化规律图（右）；图3为不同浓度的敌稗溶液与荧光试纸条荧光猝灭OD值拟合的线性标准曲线；图4为不同本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条，包括样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，所述的PVC底板上按顺序依次粘附有样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，其特征在于：所述的检测线和所述的质控线上包被有敌稗分子印迹聚合物-量子点复合物。/n
【技术特征摘要】
1.一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条，包括样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，所述的PVC底板上按顺序依次粘附有样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，其特征在于：所述的检测线和所述的质控线上包被有敌稗分子印迹聚合物-量子点复合物。
2.根据权利要求1所述的一种检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条，其特征在于：所述的检测线与所述的质控线之间的间隔距离为5mm，所述的检测线和所述的质控线之间的硝酸纤维素膜的中间隔断距离为1mm。
3.一种权利要求1所述的检测除草剂敌稗的仿生免疫荧光试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）敌稗配制
采用由环己烷和丙酮按体积比9：1的比例混合而成的溶液为溶剂配制敌稗溶液；
（2）敌稗分子印迹聚合物-量子点复合物的制备
将1.8mL的Tritonx-100和7.5mL的致孔剂环己烷加入圆底烧瓶，以400r/min的速度常温搅拌15min，然后向圆底烧瓶中加入400μL浓度为1mg/mL的溶于氯仿的CdSe/ZnS量子点溶液，再加入50μL的交联剂TEOS和100μL的氨水，黑暗常温搅拌2小时；将45.6μL的APTES和110μL的浓度为25mg/mL的敌稗溶液加入到小棕瓶中，黑暗中搅拌2小时后；目的是待测物质敌稗与功能单体APTES的键合；将小棕瓶中的混合物倒入圆底烧瓶，继续黑暗环境下搅拌12小时；然后倒入盛有10mL丙酮的离心管中，等待沉淀完成后，以9000r/min离心10分钟后，去除上清液；离心管中加入6m...
【专利技术属性】
技术研发人员：史西志，张泽明，刘晨曦，张蓉蓉，孙爱丽，陈炯，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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