检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒，试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，呋喃唑酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中。反应膜上具有包被有呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“|”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“|”。本实用新型专利技术试剂盒具有便携性好、灵敏度高、检测时间短等特点，可以在呋喃唑酮代谢物残留检测中发挥重要作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及ー种检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒，特别是检测动物组织中呋喃唑酮代谢物的试剂盒。
技术介绍
呋喃唑酮(Furazolidone)属硝基呋喃类药物，为广谱抗生素，对革兰氏阳性及阴性菌均有一定抗菌作用，被广泛应用于家禽、家畜、水产品的痢疾、肠炎、球虫病以及火鸡黑头病的预防和治疗。但研究证明硝基呋喃类药物及其代谢物具有相当大的毒性，有致畸胎副作用，且能诱发癌症。我国农业部文件农牧发 I号规定食品性动物中呋喃唑酮的检出限为不得检出。 由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。目前用来检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC-MS、LC-MS/MS)等，这些方法虽然具有灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少等优点，但仍存在一定缺点，如样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，已逐渐不能满足发达国家及食品加工企业对检测方法检测限的要求；而常用的免疫分析法主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法，需要的检测费用还是较高，不适合企业低成本的检测需要。因此，在实践中有必要建立ー种敏感度高、操作简单、成本低、检测药物种类多、适合大規模推广的检测方法。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒。本技术的试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶包括微孔试剂条和8个试纸条，微孔试剂条有8个反应孔，反应孔上具有微孔塞，其中冻干有呋喃唑酮代谢物单克隆抗体-肢体金标记物。试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“ I ”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“ I ”。检测线和质控线平行，检测线位于距离样品吸收垫ー侧5-8mm处，质控线位于距离检测线4-7mm处，试纸条上贴有保护膜，保护膜覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX标记线。本技术试剂盒中的试纸条底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体为硬纸盒；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料。本技术试剂盒具有如下有益效果I、灵敏度高。呋喃唑酮代谢物检测试剂盒以胶体金标记高亲和カ的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华カ相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和カ影响很小，且具有较高的标记率。其中的呋喃唑酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂条中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，増加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。本试剂盒对呋喃唑酮代谢物的检测灵敏度为I μ g/L。2、操作简便快速。使用试剂盒检测时无需任何其它试剂，只要将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后，将试纸标有MAX标记线的一端向下插入微孔中，室温(20-25°C )孵育5min后观察結果。3、显示检测结果形象、直观、准确。检测试纸条以显示红色线“I”及“ Il ”印迹作为阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线“ I ”印迹表示被检测样本液中呋喃唑酮代谢物的含量高于或等于试剂盒对呋喃唑酮代谢物的最低检测限，两条红线“ Il ”印迹 表示被检测样本中呋喃唑酮代谢物的含量低于试剂盒对呋喃唑酮代谢物的最低检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。4、成本低，投资少。使用本技术试剂盒，不需另配仪器设备及其它试剂，使现场检测一歩到位，成本低廉，投资少，见效快。5、易于大范围推广应用。试剂盒操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、食品企业等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图I为本技术试纸条结构示意图；图2为本技术试纸条俯视图；图3为本技术微孔试剂图；图4为本技术试纸条检测结果判定图；图5为本技术试剂桶结构示意图；图6为本技术固定用具的俯视图；图7为本技术盒体与固定用具的侧视图。具体实施方式一、呋喃唑酮代谢物检测试剂盒的组装制备⑴试纸条样品吸收垫I、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX标记线，检测线4包被有呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控线5包被有羊抗鼠抗抗体。底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。(2)微孔试剂条微孔试剂条8具有微孔塞9，板孔中冻干有呋喃唑酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物。(3)将(I)试纸条和(2)微孔试剂条装入具有密封盖的塑料试剂桶10，将塑料试剂桶放置于试剂盒盒体12内的固定用具11中。ニ、试剂盒的使用(I)样品前处理取(5. 0±0· 05) g均质样本至50ml聚苯こ烯离心管中，加入5ml 10%三氯こ酸，再加入100 μ I衍生化试剂(向装有151mg 2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml)，充分振荡3min，在60°C放置I. 5h ;取出依次加入Iml O. 5mol/L磷酸氢ニ钾溶液、I. 5ml 2mol/L氢氧化钠溶液和IOmlこ酸こ酷，振荡10s，脂肪含量高的样本轻微振荡8 10下；3000g以上，室温(20 25°C )离心5min ;取8mlこ酸こ酯相至IOml干燥的玻璃试管中，于50 60°C水浴氮气流下吹干，加入Iml正己烷，用涡旋仪涡动30s，再加入O. 6mlO. 2mol/L磷酸盐缓冲液，涡动IOs充分混匀；3000g以上，室温(20 25°C )离心5min，除去上层有机相，取下层100 μ I用于分析。(2)用试剂盒检测用微量移液器吸取100 μ I待检样品溶液到微孔试剂中，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀，将试纸标有MAX标记线的一端向下插入微孔中，室温(20 25°C )孵育5min后观察結果。三、检测结果分析呋喃唑酮代谢物在样本中的含量高于或等于试剂盒对其的最低检测限吋，呋喃唑酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物与呋喃唑酮代谢物结合，金标抗体上的抗原结合位点被封闭，从而在检测区内因为竞争反应，不会与呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条帯。阴性样本在检测过程中由于缺少抗原抗体竞争反应，将会在检测线和质控线上出现红色条带。如图4所示。阳性当质控线(C)显示一条红色条带，而检测线(T)不显色，试纸条以显示红色线“I”，判为阳性，如图4. a图所示。阴性当质控线(C)显示一条红色条帯，检测线(T)同时也显示出一条红色条帯，试纸条以显示红色线“本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒，其特征在于试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，罗晓琴，赵正苗，陈炜玲，崔海峰，汪善良，扶胜，杨秀贤，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：