检测呋喃它酮代谢物的试剂盒制造技术

一种检测呋喃它酮代谢物的试剂盒，其特征在于试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。本实用新型专利技术灵敏度高，显示检测结果形象、直观准确，成本低，投资少。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种检测呋喃它酮代谢物的试剂盒，特别是检测动物组织中呋喃它酮代谢物的试剂盒。技术背景 硝基呋喃类药物常作为广谱类抗生素用于预防和治疗由沙门氏菌和埃希氏菌引起的猪、牛、家禽及蜜蜂的胃肠道疾病。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。由于硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，无法检测，但其代谢产物因和蛋白质结合而相当稳定，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。目前用来检测硝基呋喃类代谢物的最常用方法是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC-MS/MS )等，这些方法灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少，但样品前处理过程复杂，仪器化程度高价格昂贵，与之相比，免疫方法具有灵敏度高、样品预处理简单、短暂的检测时间、较大的检测样本量等特点，适合现场监控和大量样品的筛查。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的检测呋喃它酮代谢物的试剂盒。本技术的试剂盒，其包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，微孔试剂条有8个反应孔，反应孔上具有微孔塞，其中冻干有呋喃它酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物。试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有呋喃它酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物构成的检测线印迹“ I ”和包被羊抗鼠抗抗体构成的质控线印迹“ I ”。样品吸收垫位于底板始端，吸水垫位于底板末端，检测线和质控线平行，均呈与试纸条的长相垂直的条带状，质控线位于距离吸水垫始端与反应膜相连处5-8mm，检测线位于距离质控线5_6mm。试纸条样品吸收垫上检测端粘贴有保护膜，保护膜上有MAX标记线。本技术试剂盒中试纸条底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体为硬纸盒；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料。本技术试剂盒具有如下有益效果I.灵敏度高。呋喃它酮代谢物检测试剂盒以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。其中的呋喃它酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂条中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。本试剂盒对呋喃它酮代谢物的检测灵敏度为I U g/L。2.显示检测结果形象、直观准确。检测时试纸条以显示红色线“ I ”及“ Il ”印迹作为阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线“ I ”印迹表示在被检测样本液中呋喃它酮代谢物含量高于等于试剂盒对呋喃它酮代谢物的最低检测限，两条红线“ Il ”印迹表示在被检测样本中呋喃它酮代谢物含量低于试剂盒对呋喃它酮代谢物的最低检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。3.成本低，投资少。使用本技术试剂盒，不需另配仪器设备及其他试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。4.易于大范围推广应用。试剂盒操作简单，能较好满足动物组织检测的需求，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。 附图说明图I为本技术试纸条结构示意图；图2为本技术试纸条俯视图；图3为本技术微孔试剂图；图4为本技术试纸条检测结果判定图；图5为本技术试剂桶结构示意图；图6为本技术固定用具俯视图；图7为本技术盒体与固定用具侧视图。具体实施方式一、呋喃它酮代谢物检测试剂盒的组装制备I)试纸条样品吸收垫I、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫位于底板始端，吸水垫位于底板末端，样品吸收垫的末端与反应膜始端相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸样品吸收垫上检测端粘贴有保护膜，保护膜上印有MAX标记线，检测线4包被有呋喃它酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控线5包被有羊抗鼠抗抗体。底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。2)微孔试剂条微孔试剂条8具有微孔塞9，孔中冻干有呋喃它酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物。3)将I)试纸条和2)微孔试剂条装入具有密封盖的塑料试剂桶10，将塑料试剂桶放置于试剂盒盒体12内的固定用具11中。二、试剂盒的使用I、样品前处理称取5. 0g±0. 05g均质的样本至50ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml 10%三氯乙酸，再加入IOOiU衍生化试剂(向装有151mg 2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加入IOml甲醇溶解混匀)，充分振荡3min ;在60°C温箱中孵育I. 5h ;取出依次加入Iml 0. 5mol/L磷酸氢二钾溶液、I. 5ml 2mol/L氢氧化钠溶液和IOml乙酸乙酯，振荡10s，脂肪含量高的样本轻微振荡8-10下，以防样本乳化；3000g以上，室温(20-25°C)离心5min ;取8ml乙酸乙酯相至IOml干燥的玻璃试管中，于5(T60°C水浴氮气流下吹干；加入Iml正己烷，涡动30s，再加0. 8ml样品复溶液(0. 2mol/L磷酸盐缓冲液)，涡动IOs充分混匀；3000g以上，室温(20-25°C)离心5min ;除去上层有机相，取下层IOOiU用于分析。2、用试剂盒检测用微量移液器吸取IOOiU复溶的样本液，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀，将标记好的试纸条插入微孔中——印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中；室温(200C -25°C)孵育5min后，取出试纸条，判定结果。三、检测结果分析呋喃它酮代谢物在样品中的含量高于等于试剂盒对其的最低检测限时，呋喃它酮代谢物单克隆抗体-胶体金标记物与药物结合，金标抗体上的抗原结合位点被封闭，从而在检测区内因为竞争反应，不会与呋喃它酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。阴性样本在检测过程中由于缺少抗原抗体竞争反应，将会在检测线和质控线上出现红色条带。如图4所示。阳性当质控线(C)显示一条红色条带，而检测线(T)不显色，试纸条以显示红色线“ I ”，判为阳性，如图4. a图所示。阴性当质控线(C)显示一条红色条带，检测线(T)同时也显示出一条红色条带，试纸条以显示红色线为“ Il ”，判为阴性，如图4.b所示。无效当质控线(C)不显示出红色条带，则无论检测线(T)显示出红色条带与否，该试纸条判为无效，如图4. c、4. d所示。四、检测试剂盒中用到的材料制备方法I、呋喃它酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的合成与鉴定( I)呋喃它酮代谢物半抗原的制备a.取l.Og对羟基苯甲醛溶于乙腈中，加入0.32g碳酸钾，0. Ig碘化钠，搅拌。加入溴乙酸乙酯0. 44g，装上回流冷凝管，8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测呋喃它酮代谢物的试剂盒，其特征在于试剂盒包括试剂盒盒体、具有12个孔的固定用具及放置其中的12个具塞试剂桶，试剂桶中包括微孔试剂条和8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，冯才伟，冯才茂，赵正苗，冯静，陈炜玲，刘琳，杨秀贤，崔海峰，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
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