微生物ATP释放试剂及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种微生物ATP释放试剂及检测方法，所述微生物ATP释放试剂包括：Tris‑碱：20‑30mM；EDTA.2Na：0.1‑0.4g/L；TritonX‑100：0.9‑1.2％；溶菌酶：0.5‑1.5mg/mL；甘油：9‑12％；上述百分比是体积百分比。本发明专利技术具有稳定性好、高效、低干扰、应用广泛等优点。

Microbial ATP release reagent and detection method

The invention provides a microbial ATP releasing reagent and detection method, the microbial ATP release include: Tris alkali reagent: 20 30mM; EDTA.2Na:0.1 0.4g/L TritonX 100:0.9; 1.2%; lysozyme: 0.5 1.5mg/mL; glycerol: 9 12%; the percentage of volume percentage. The invention has the advantages of good stability, high efficiency, low interference and wide application.

【技术实现步骤摘要】
微生物ATP释放试剂及检测方法
本专利技术涉及微生物检测，特别涉及微生物ATP释放试剂及检测方法。
技术介绍
ATP生物发光法是一种用于分析待检测样品中有无微生物及其数量的方法。传统微生物培养耗时费力，在实际应用中有较大的限制。而该方法具有灵敏，快速，简便，稳定等优势，可将ATP数量化，用荧光强度把光定量，广泛应用于食品工业，医药，生物学等领域。ATP生物发光法采用的反应体系是虫荧光素-荧光素酶体系，微生物体内的ATP经过破裂释放而出，在虫荧光素酶的催化作用下，与体系中的虫荧光素在有氧环境及二价镁离子的共同作用下，反应释放荧光。当虫荧光素及荧光素酶在过量的情况下，释放的荧光与ATP在一定范围内成线性关系，我们可以通过监测荧光光强，判断出检测样品中的ATP含量，进而表征出其中的细菌总数。因此，微生物中ATP的释放量会直接影响到测试结果，选择合适的ATP释放试剂至关重要，若ATP释放不完全，则会使测试结果偏低。并且ATP是一种易降解的能量物质，若释放试剂会破坏ATP，也会导致测试结果偏低。同时，若释放试剂影响到反应体系的活性，也会造成结果的不准确。目前，众多研究中涉及到的ATP释放试剂包括酸(如TCA)，以及季铵盐内表面活性剂等。针对酸类，适用范围较广，但若浓度小了，细菌裂解不完全，若浓度大了，则会严重影响到发光试剂的活性，使测试结果不准确。而季铵盐类表面活性剂，同样适用范围较广，对发光试剂的活性影响较小，但是该类试剂振荡时容易起泡，并且低温情况下有晶体析出，严重影响发光测试，不利于广泛使用。
技术实现思路
为解决上述现有技术方案中的不足，本专利技术提供了一种稳定性好、高效、干扰地、应用广泛的微生物ATP释放试剂。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种微生物ATP释放试剂；所述微生物ATP释放试剂包括：Tris-碱：20-30mM；EDTA.2Na：0.1-0.4g/L；TritonX-100：0.9-1.2％；溶菌酶：0.5-1.5mg/mL；甘油：9-12％；上述百分比是体积百分比。本专利技术的目的还在于提供了一种应用上述微生物ATP释放试剂的微生物检测方法，该专利技术目的通过以下技术方案得以实现：微生物检测方法，所述微生物检测方法包括以下步骤：(A1)向待检测样中加入上述的微生物ATP释放试剂，并混合，得到ATP裂解液；(A2)ATP裂解液加入到生物发光反应体系中，并混合；(A3)采集荧光，获得ATP的量，从而得出微生物的量。与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果为：1.应用广泛：环境中微生物种类繁多，该试剂能够尽可能的将所有种类的微生物裂解；2.ATP释放高效：能在短时间内破坏微生物，并充分释放ATP；3.低干扰：该试剂不会破坏ATP，并且不会影响到发光试剂的活性；4.稳定性好：该试剂不易受到环境的影响，在低温条件下保存，稳定性可持续半年以上。具体实施方式以下说明描述了本专利技术的可选实施方式以教导本领域技术人员如何实施和再现本专利技术。为了教导本专利技术技术方案，已简化或省略了一些常规方面。本领域技术人员应该理解源自这些实施方式的变型或替换将在本专利技术的范围内。本领域技术人员应该理解下述特征能够以各种方式组合以形成本专利技术的多个变型。由此，本专利技术并不局限于下述可选实施方式，而仅由权利要求和它们的等同物限定。实施例1：本专利技术实施例的微生物的检测方法，所述微生物的检测方法包括以下步骤：(A0)在无菌环境中，配置生物发光反应体系，包括：虫荧光素-荧光素酶、Mg2+；(A1)以体积比1:1的比例向待检测样中加入微生物ATP释放试剂，并混合，得到ATP裂解液；所述微生物ATP释放试剂包括：Tris-碱：25mM；EDTA.2Na：0.3g/L；TritonX-100：1.0％；溶菌酶：1.0mg/mL；甘油：10％；上述百分比是体积百分比；微生物ATP释放试剂的PH值为7.8；(A2)ATP裂解液加入到生物发光反应体系中，并混合；(A3)采集荧光，获得ATP的量，从而得出微生物的量。实施例2：本专利技术实施例的微生物的检测方法，所述微生物的检测方法包括以下步骤：(A0)在无菌环境中，配置生物发光反应体系，包括：虫荧光素-荧光素酶、Mg2+；(A1)以体积比1:1的比例向待检测样中加入微生物ATP释放试剂，并混合，得到ATP裂解液；所述微生物ATP释放试剂包括：Tris-碱：20mM；EDTA.2Na：0.4g/L；TritonX-100：1.2％；溶菌酶：1.5mg/mL；甘油：12％；上述百分比是体积百分比；(A2)ATP裂解液加入到生物发光反应体系中，并混合；(A3)采集荧光，获得ATP的量，从而得出微生物的量。实施例3：本专利技术实施例的微生物的检测方法，所述微生物的检测方法包括以下步骤：(A0)在无菌环境中，配置生物发光反应体系，包括：虫荧光素-荧光素酶、Mg2+；(A1)以体积比1:1的比例向待检测样中加入微生物ATP释放试剂，并混合，得到ATP裂解液；所述微生物ATP释放试剂包括：Tris-碱：30mM；EDTA.2Na：0.1g/L；TritonX-100：0.9％；溶菌酶：0.5mg/mL；甘油：9％；上述百分比是体积百分比；(A2)ATP裂解液加入到生物发光反应体系中，并混合；(A3)采集荧光，获得ATP的量，从而得出微生物的量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物ATP释放试剂；其特征在于：所述微生物ATP释放试剂包括：Tris‑碱：20‑30mM；EDTA.2Na：0.1‑0.4g/L；TritonX‑100：0.9‑1.2％；溶菌酶：0.5‑1.5mg/mL；甘油：9‑12％；上述百分比是体积百分比。

【技术特征摘要】
1.一种微生物ATP释放试剂；其特征在于：所述微生物ATP释放试剂包括：Tris-碱：20-30mM；EDTA.2Na：0.1-0.4g/L；TritonX-100：0.9-1.2％；溶菌酶：0.5-1.5mg/mL；甘油：9-12％；上述百分比是体积百分比。2.根据权利要求1所述的微生物ATP释放试剂，其特征在于：所述微生物ATP释放试剂的pH值为6.5-8.0。3.根据权利要求1或2所述的微生物ATP释放试剂的微生物检测方法，所述微生物检测方法包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：张思相，王强，闻卫红，颜高锋，
申请(专利权)人：杭州路弘科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33