用于测量糖化血红蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及用于测量糖化血红蛋白的方法。本发明专利技术的方法包括：用红细胞溶解液(heemolysate)使血液样品溶血的溶血步骤；将经溶血的血液样品与珠缀合物(其中珠与糖化血红蛋白结合材料相缀合)反应的反应步骤；测量血液中总血红蛋白量的第一测量步骤；将正常血红蛋白与缀合有珠缀合物的糖化血红蛋白分离开的分离步骤；测量血液中糖化血红蛋白量的第二测量步骤；以及基于测得的血液样品中总血红蛋白和糖化血红蛋白的量来计算血液样品中糖化血红蛋白浓度的计算步骤。本发明专利技术用于测量糖化血红蛋白的方法能够简化测量步骤，其通过在来自含有正常血红蛋白和缀合有珠缀合物之糖化血红蛋白(其中珠与糖化血红蛋白相缀合)的血液样品的血液中测量血红蛋白的总量来实现。此外，由于不需要用于信号放大的单独染料，本发明专利技术使得可以更容易地测量血液样品中的糖化血红蛋白浓度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于糖尿病测试的测量糖化血红蛋白的方法，更特别地涉及以更简化的步骤测量糖化血红蛋白的方法。
技术介绍
在医学诊断或药物治疗的领域中，麻醉剂或有害化学品之分析物的浓度测量最近已被用于医学或环境领域。尤其是，随着人类日益期望摆脱各种疾病的困扰，对于医学诊断和治疗领域中使用的生物样品浓度的测量愈发引起关注。特别地，对于糖尿病而言，能够测量血糖的糖化血红蛋白测试允许通过一次测量而获得相对长期的血糖平均值，因而日益引起关注。已知糖尿病(其为成人肾脏疾病的一个原因)可使预期平均寿命值降低15年。将血糖控制在较低值被认为能够预防由糖尿病所引起的慢性并发症。血红蛋白Ale(HbAlc)称为“糖化血红蛋白”，其作为一部分血红蛋白存在于红细胞中。当血液中的血糖(葡萄糖)浓度升高时，葡萄糖部分缀合至血红蛋白。这种与葡萄糖缀合的血红蛋白称为“糖化血红蛋白，，或"HbA1。”。糖化血红蛋白的值与近2 3个月中血糖的值相平衡，因此，可以将糖化血红蛋白值认定为近2 3个月的血糖值。检查糖化血红蛋白值并将其用作糖尿控制和未来药物控制的指标。因此，测量糖化血红蛋白是很重要的。糖化血红蛋白具有这样的结构，其中葡萄糖缀合至血液中β-链血红蛋白的N端缬氨酸，因此，必须特异性地仅检测和测量葡萄糖部分才能将其与血红蛋白相区分。可通过多种方法测量该部分，其中广泛使用的是应用抗体和硼酸亲和层析的方法。为了定量地测量糖化血红蛋白值，给出糖化血红蛋白量基于总血红蛋白量的分数，这是因为每个人的总血红蛋白量是不同的。此时，同时测量总血红蛋白的量。对于成年男性来说，总血红蛋白的量一般为13. 0 17. Og/dl ；对于成年女性来说，为12. 0 15. Og/ dl ；对于婴儿来说，为11. 0 14. Og/dl。当糖化血红蛋白值为6. 0%时，其可表示为三个月的血糖平均维持在120g/dl。美国糖尿病协会(AmericanDiabetes Association, ADA)推荐糖化血红蛋白值维持在7. 0%或更少，且其正常范围为4. 0 6. 5%。同时，在美国专利No. 5，242，842、6，399，293和6，300，142中，额外地需要信号产生材料(例如染料)，因而测量步骤变得麻烦。在JP3340129中，额外地需要稀释步骤。因此，也必须进行额外的步骤。也就是说，该操作需要测量者直接参与多个步骤，这对于测量者来说是麻烦的。此外，测量者的参与可使测量过程复杂化，因而拖延测量时间。因此，需要以更简化的步骤容易地测量全血样品中糖化血红蛋白浓度的方法。公开内容技术问题本专利技术涉及使用比相关领域更简化的步骤容易地测量糖化血红蛋白浓度的方法。技术方案本专利技术一个方面提供了，该方法包括用红细胞溶解液(hemolysate)使血液样品溶血的溶血步骤；将经溶血的血液样品与珠缀合物(其中珠与糖化血红蛋白结合材料相缀合)反应的反应步骤；测量血液中总血红蛋白量的第一测量步骤；将正常血红蛋白与缀合有珠缀合物的糖化血红蛋白分离开的分离步骤；测量血液中糖化血红蛋白量的第二测量步骤；以及基于测得的血液样品中总血红蛋白和糖化血红蛋白的量来计算血液样品中糖化血红蛋白浓度的计算步骤。此时，可通过将红细胞溶解液和珠缀合物同时放入血液样品中而将所述溶血和反应步骤作为一个步骤来实施。所述红细胞溶解液可选自TRIS、HEPES, TES和PIPES。所述珠可以是琼脂糖(許至agarose)珠、纤维素珠、琼脂糖凝胶(剩至3，sepharose)珠、聚苯乙烯珠、聚甲基丙烯酸甲酯珠、聚乙烯基甲苯珠和玻璃珠中的至少一种。所述糖化血红蛋白结合材料可以是硼酸、伴刀豆球蛋白A和抗体中的至少一种。所述第一和第二测量步骤可基于使用光学传感器的光反射测量来进行。所述分离步骤可通过提供清洗溶液来进行。所述清洗溶液可选自在pH7 8. 5范围内反应的TRIS、HEPES、TES和PIPES。可通过使用吸收垫吸收正常血红蛋白来实施分离步骤。所述吸收垫可为多孔的垫。所述多孔垫之孔的尺寸可大于血红蛋白的尺寸且小于所述珠的尺寸。有益效果根据，从全血样品中测量总血红蛋白的量，所述全血样品包含经珠缀合物缀合的糖化血红蛋白和正常血红蛋白，其中所述珠与糖化血红蛋白结合材料相缀合。因而，测量步骤得到进一步地简化。由于不需要用于信号放大的单独染料，本专利技术使得可以更容易地测量血液样品中的糖化血红蛋白浓度。附图说明图1显示糖化血红蛋白与珠缀合物反应的化学结构，所述珠缀合物使用硼酸作为糖化血红蛋白结合材料。图2示意本专利技术的反应步骤(图2(a))；反应步骤之后正常血红蛋白和与珠缀合物缀合之糖化血红蛋白共存于样品中的状态(图2(b))；以及正常血红蛋白被除去的状态 (图 2(c))。图3显示测量血红蛋白浓度的示例步骤。图4示意正常血红蛋白被吸收进吸收垫中的状态，同时与珠缀合物缀合的糖化血红蛋白被单独分离出来。图5显示珠的存在对血红蛋白浓度测量值没有影响。最佳方式本专利技术旨在解决现有技术中的上述问题，并且本专利技术的一个目的是提供能够更容易地测量血液样品中糖化血红蛋白的方法。更具体地，根据本专利技术的一个方面，提供了，其包括用红细胞溶解液使血液样品溶血的溶血步骤；将经溶血的血液样品与珠缀合物(其中珠与糖化血红蛋白结合材料相缀合)反应的反应步骤；测量血液中总血红蛋白量的第一测量步骤；将正常血红蛋白与缀合有珠缀合物的糖化血红蛋白分离开的分离步骤；测量血液中糖化血红蛋白量的第二测量步骤；以及基于测得的血液样品中总血红蛋白和糖化血红蛋白的量来计算血液样品中糖化血红蛋白浓度的计算步骤。下文会详细地描述本专利技术。相对于血液中总血红蛋白的量来测量血液样品中糖化血红蛋白的浓度。因此，为了测量糖化血红蛋白的浓度，进行了使血液样品溶血以暴露包含在血液中的正常血红蛋白和糖化血红蛋白的溶血步骤。此时，可使用的红细胞溶解液具有一定渗透压的缓冲液浓度(在该渗透压下能够发生溶血)且pH为7 8. 5，优选地选自TRIS、HEPES, TES和PIPES。更优选地，所述红细胞溶解液是含有表面活性剂的缓冲溶液，例如20mM HEPES缓冲溶液(N-2-羟乙基哌嗪-N，-2-乙磺酸，HEPES ；pH 8. 1)。然而，红细胞溶解液不限于这些溶液，可使用本领域中广为人知的任何合适的溶液。血红蛋白和糖化血红蛋白共存于溶血的血液样品中。随后进行将经溶血的血液样品与珠缀合物(其中珠与糖化血红蛋白结合材料相缀合)反应的反应步骤。本文中使用的术语“珠缀合物”是指与结合材料相缀合的珠，所述结合材料可缀合至糖化血红蛋白。所述珠缀合物通过糖化血红蛋白结合材料与糖化血红蛋白相连接。本文中使用的术语“糖化血红蛋白结合材料”是指可特异性地缀合至糖化血红蛋白的材料。例如，硼酸、伴刀豆球蛋白A和抗体中的至少一种(优选硼酸)可用作糖化血红蛋白结合材料。图1示意糖化血红蛋白与珠缀合物反应的化学结构，所述珠缀合物使用硼酸作为糖化血红蛋白结合材料。如图1所示，硼酸的OH官能团与连接至糖化血红蛋白末端之糖的顺式-二醇相互反应，形成五元环结构。利用这一特性，硼酸特异性地仅结合至总血红蛋白中的糖化血红蛋白。因此，当将标记物连接至糖化血红蛋白结合材料时，只有糖化血红蛋白可被选择性地标记。在相关领域中，将染本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：裴柄宇，李星东，金炯秀，
申请(专利权)人：因福皮亚有限公司，
类型：发明
国别省市：