一种丝素蛋白抗凝血材料及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。与现有技术相比，本发明专利技术提供的制备方法保护了与凝血酶结合区域的官能团不因被反应而影响与凝血酶结合的结构域、又能使水蛭素以较强结合力的离子键结合于聚乙二醇双胺阳离子化的丝素蛋白上，达到稳定发挥抗凝的作用，从而使得到的丝素蛋白抗凝血材料具有显著抑制凝血酶活性的功能，尤其可应用于防止如人工血管的新生内膜增生和术后血栓的形成。

Fibroin anticoagulant material and preparation method thereof

The invention provides a silk fibroin anticoagulant material preparation method comprises the following steps: S1) the silk fibroin solution, polyethylene glycol two amine mixed with a crosslinking agent, reaction after dialysis, drying, by polyethylene glycol two amine cation of Silk Fibroin Materials; S2) the two polyethylene glycol amine cation the silk fibroin materials impregnated with hirudin solution, obtained silk fibroin anticoagulant material. Compared with the prior art, the invention provides a preparation method of protection and thrombin binding region of the functional groups not because of reaction and influence domain, combined with thrombin can also enable the ionic bond to strong binding force of hirudin combined with polyethylene glycol amine cationic silk fibroin, stable play the role of anticoagulation thus, the silk fibroin anticoagulant material has significant inhibition of thrombin activity, especially can be used to prevent such as artificial vascular intimal hyperplasia and postoperative thrombosis.

【技术实现步骤摘要】
一种丝素蛋白抗凝血材料及其制备方法
本专利技术属于抗凝血材料
，尤其涉及一种丝素蛋白抗凝血材料及其制备方法。
技术介绍
我国每年心脑血管疾病死亡人数有数百万，并在逐年增加，因此，血液接触材料是目前临床上最为紧缺的生物材料(医疗器械)，尤其是人工血管移植，即便是得到临床应用的中、大口径人工血管，在我国产品也非常稀少，国产产品每年的使用比例只有20％左右，而小口径人工血管的移植还是临床空白，其最大的问题就是容易形成血栓，远期通畅率较差。目前医学上应用的人工血管产品主要是由涤纶、膨体聚四氟乙烯等合成材料制成的，在大中口径人工血管方面有临床应用，但这些合成材料细胞相容性差，不利于内皮化，容易形成血栓，影响组织愈合。家蚕蚕丝是由家蚕合成与分泌的天然动物蛋白，来源广泛，其丝素蛋白具有良好的生物相容性，由20种人体可吸收的氨基酸组成，最终降解产物为氨基酸或小肽，易被细胞吸收或吞噬，不会引起明显的免疫反应。已有大量的文献研究表明丝素蛋白材料能够支持多种细胞的生长，在组织工程材料研究方面越来越深入，并取得了突破性的进展，近来，应用于血管组织工程上也越来越受到关注。虽然丝素蛋白材料本身具有细胞相容性和组织相容性的优势，但作为外源材料，在与血液接触时都会刺激凝血系统，诱发溶血或凝血。为了提高丝素材料的抗凝血性能，国内外一些研究人员也关注到了改善丝素蛋白材料的抗凝血性能研究。目前，对丝素蛋白的抗凝血改性主要报导了接枝具有抗凝作用的高分子及硫酸化或肝素化方法。如She等将肝素在温和的条件下加入丝素/壳聚糖支架中，增强了抗凝性(PolymerInternational,2010,59(1):55-61)；Liu等利用静电纺丝技术将氯磺酸处理过的丝素蛋白制成丝素纳米支架，硫酸化纳米丝素支架的抗凝血性显著增强(Biomaterials,2011,32(15):3784-3793)；Wang等利用静电纺丝技术制备了肝素改性丝素纳米材料，体外凝血测试结果表明改性后丝素纳米材料的抗凝血性远高于纯丝素(InternationalJournalofBiologicalMacromolecules，2011，48(2):345-353)；用氯磺酸制备的硫酸化丝素蛋白的抗凝血活性要比硫酸制备的硫酸化丝素大大提高(Biomaterials,2004,25(3)：377-383)，但远远不及肝素。肝素改性丝素蛋白材料抗凝血性研究已存在知识产权(如抗凝血真皮支架的制备，申请号为CN200910223207.4的中国专利；纳米纤维人工血管及制备方法，申请号为CN200910228843.6的中国专利)，所以引入肝素是目前丝素材料抗凝血性改性的主要方法，但肝素属于一种凝血酶间接抑制剂，抗凝作用要依赖抗凝血酶和特定的辅因子，所以即使材料中共混或键合的肝素不一定能或都能发挥抗凝作用。水蛭素是一种凝血酶特异性抑制剂，可以直接抑制血栓形成，还可以对已形成的血栓有一定的溶栓作用。我们已经研究开发了一种水蛭素/丝素蛋白抗凝血材料(一种抗凝血丝素材料及其制备方法，申请号为ZL201310250951.X的中国专利；一种抗凝血丝素膜及其制备方法，申请号为ZL201310251819.0的中国专利；JournalofBiomedicalMaterialsResearchPartB,2015:103B:556–562)，但深入研究发现，将研究结果与水蛭素抑制凝血酶活性的机理结合起来分析，采用共价键结合的改性方法会降低水蛭素的活性。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种丝素蛋白抗凝血材料及其制备方法，该方法制备的丝素蛋白抗凝血材料可高效抑制凝血酶活性、持续具有抗凝血功能。本专利技术提供了一种丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。优选的，所述丝素蛋白溶液的质量浓度为3％～20％。优选的，所述聚乙二醇二胺的质量与丝素蛋白溶液中丝素蛋白的质量比为A，0＜A≤0.5。优选的，所述交联剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、2-吗啉乙磺酸、碳化二亚胺、京尼平与聚乙二醇甘油醚中的一种或多种。优选的，所述交联剂的质量为丝素蛋白溶液中丝素蛋白质量的B％，B≥20。优选的，所述步骤S1)中反应的时间为10～30min。优选的，所述透析的时间为12～48h。优选的，所述水蛭素溶液中水蛭素的浓度为CU/ml，0＜C≤500。优选的，所述步骤S2)中浸渍的时间为2～10h。优选的，包括经聚乙二醇二胺离子化的丝素蛋白与水蛭素。本专利技术提供了一种丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。与现有技术相比，本专利技术提供的制备方法保护了与凝血酶结合区域的官能团(-COOH、-NH2、-OH)不因被反应而影响与凝血酶结合的结构域、又能使水蛭素以较强结合力的离子键结合于聚乙二醇双胺阳离子化的丝素蛋白上，达到稳定发挥抗凝的作用，从而使得到的丝素蛋白抗凝血材料具有显著抑制凝血酶活性的功能，尤其可应用于防止如人工血管的新生内膜增生和术后血栓的形成。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种丝素蛋白抗凝血材料，包括经聚乙二醇二胺与交联剂阳离子化的丝素蛋白与水蛭素。其中，所述聚乙二醇二胺与丝素蛋白的质量比优选为A，0＜A≤0.5，更优选为0.01～0.5，再优选为0.01～0.2，最优选为0.05～0.1；在本专利技术提供的一些实施例中，所述聚乙二醇二胺与丝素蛋白的质量比优选为0.01；在本专利技术提供的一些实施例中，所述聚乙二醇二胺与丝素蛋白的质量比优选为0.05；在本专利技术提供的另一些实施例中，所述聚乙二醇二胺与丝素蛋白的质量比优选为0.1。所述交联剂为本领域技术人员熟知的交联剂即可，并无特殊的限制，本专利技术中优选为-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、2-吗啉乙磺酸、碳化二亚胺、京尼平与聚乙二醇甘油醚中的一种或多种；所述交联剂的质量优选为丝素蛋白质量的B％，B≥20，更优选为20％～50％。本专利技术还提供了一种上述丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。本专利技术对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售或自制均可。其中，所述丝素蛋白溶液中丝素蛋白的质量浓度优选为3％～20％；所述丝素蛋白为本领域技术人员熟知的丝素蛋白即可，并无特殊的限制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。

【技术特征摘要】
1.一种丝素蛋白抗凝血材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)将丝素蛋白溶液、聚乙二醇二胺与交联剂混合，反应后透析，干燥，得到聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料；S2)将所述聚乙二醇二胺阳离子化的丝素蛋白材料浸渍于水蛭素溶液中，得到丝素蛋白抗凝血材料。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述丝素蛋白溶液的质量浓度为3％～20％。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇二胺的质量与丝素蛋白溶液中丝素蛋白的质量比为A，0＜A≤0.5。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述交联剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、2-吗啉乙磺...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建南，石盼格，李荷蕾，裔洪根，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32