糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法制造技术

本发明专利技术公开了一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法，采用阳离子交换层析的方法分析HbA1c在临床样本中所占比例，是利用三种特定离子浓度的洗脱液依次将吸附在阳离子交换树脂上的糖化血红蛋白亚组分HbA1a+b（即HbA1a和HbA1b）和HbA1c以及非糖化血红蛋白HbA0洗脱分离出来，通过对分离后的样本实时、持续的比色测量得到三梯度浓度和洗脱色谱合成图，计算HbA1c波形面积在上述三种组分波形总面积中所占比例即可得到其在血红蛋白中的占比。本发明专利技术进一步简化了洗脱的操作环节和耗材种类，提高了设备的可靠性和检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用离子交换及色谱法来分析材料成分的检测方法，具体涉及一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法。
技术介绍
人体血液中糖化血红蛋白的浓度是糖尿病诊断的重要临床指标。正常血红蛋白（Hb）被糖化后会形成多种亚组分，但最主要的亚组分为HbA1c，其形成后结构稳定，有90～120天的生命周期。通过检测该指标，可反映糖尿病人三个月的平均血糖水平。因此，临床上一般以该指标作为糖尿病人的筛查、诊断、治疗的重要依据。目前对糖化血红蛋白的测定主要采用离子交换层析法，其原理基于血红蛋白糖化后分子表面的阳离子的丢失。当含有糖化血红蛋白的样本经过阳离子交换层析柱时，糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白均被阳离子交换树脂所吸附。临床上将离子交换高效液相色谱分析法（HPLC）作为糖化血红蛋白HbA1c国际公认的金标准分析方法，能分离出多种糖化血红蛋白亚组分。如EP2703808A1所示，只采用两种离子浓度的洗脱液，即一种高离子浓度洗脱液和一种低离子浓度洗脱液，通过机内的一种配比混合装置来配比生成多种不同离子浓度的洗脱液，以对样本进行洗脱。理论上讲，在一定压力条件下，配比出的离子浓度种类越多，能洗脱分离的血红蛋白亚组分种类也越多（如HbF）。高压液相层析法由于采用能耐受近180个大气压的离子交换层析柱，一般可以层析出多达十几种糖化血红蛋白的亚组分。其由于采用机内配比不同浓度洗脱液，必然带来仪器的复杂程度增高、故障率相对增加，而且洗脱液的交叉污染严重，仪器的制造、维修、使用的成本也高。在临床实践中，真正具有指导意义的糖化血红蛋白指标只有HbA1c。申请人此前在CN102226788 A中提出过一种利用四种特定浓度洗脱液对HbA1c进行洗脱的方法，本申请就是对上述申请的进一步修改和完善，通过对洗脱液组分的优化以及洗脱方法的改进来进一步提高梯度洗脱法的性价比。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法。技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供的糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法，采用阳离子交换层析的方法分析HbA1c在临床样本中所占比例，利用三种特定离子浓度的洗脱液依次对吸附了血红蛋白的阳离子交换树脂进行洗脱，洗脱顺序如下：a)糖化血红蛋白中的两种亚组分HbA1a+b(即HbA1a和HbA1b)；b)糖化血红蛋白HbA1c；c)非糖化血红蛋白HbA0；洗脱过程中对洗脱后的样本做实时、持续的比色测量，以时间为横轴，浓度为纵轴，得到实时的三梯度浓度和洗脱色谱合成图，最后将HbA1c波形面积在色谱合成图波形总面积中所占比例作为HbA1c在血红蛋白中的占比；所述洗脱液包括：A洗脱液：用于洗脱糖化血红蛋白HbA1a+b亚组分和阳离子交换树脂的清洗、平衡及再生；B洗脱液: 用于洗脱糖化血红蛋白HbA1c亚组分；C洗脱液: 用于洗脱非糖化血红蛋白HbA0。具体地，上述三种洗脱液中各组分的质量百分比如下：本专利技术依据临床检测要求的重点，配比从低到高逐步梯度递增的三种不同离子浓度的洗脱液，即专门用于洗脱糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b）和用于样本洗脱后的阳离子交换树脂清洗、再平衡的A洗脱液、专门用于洗脱糖化血红蛋白（HbA1c）亚组分的B洗脱液和专门用于洗脱非糖化血红蛋白的C洗脱液。采用这三种专用洗脱液即可实现清洗、平衡、洗脱以及阳离子交换树脂的再生等所需的全部功能。采用该方法的仪器也只需采用普通的电磁阀和简单的流路系统，在常压的条件下就能实现只有高效液相层析法在高压条件下才能实现的糖化血红蛋白HbA1c的分离精度，也避免了为配比多种离子浓度洗脱液而必须采用的结构复杂的配比混合装置，消除了不同浓度洗脱液之间的交叉污染影响，可使洗脱液的离子浓度更精确可靠，糖化血红蛋白HbA1c亚组分的分离精度更高,并且完全满足临床诊断的需要。有益效果：1、可获得精确的洗脱液浓度，实现糖化血红蛋白HbA1c亚组分的精准分离；2、减少了洗脱液的种类，降低了制造和使用成本；3、可有效降低不同离子浓度洗脱液间的交叉污染；4、采用常压条件，使仪器结构简化，成本下降,故障率低；5、检测结果（层析图谱）在检测的过程中实时生成，由无数个点累积形成波形，杜绝了检测结束后才出结果可能存在的软件校正等问题。除了上面所述的本专利技术解决的技术问题、构成技术方案的技术特征以及由这些技术方案的技术特征所带来的优点外，本专利技术的糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法所能解决的其他技术问题、技术方案中包含的其他技术特征以及这些技术特征带来的优点，将结合附图做出进一步详细的说明。附图说明图1是本专利技术的三梯度洗脱法实施例中洗脱机构的结构图；图2是本专利技术的三梯度浓度和洗脱色谱合成图；图中：C洗脱液1，B洗脱液2，A洗脱液3，蠕动泵4，供液口5，层析柱6，比色池7。具体实施方式实施例：在图1所示的洗脱机构中，设置三种独立的特定离子浓度洗脱液，即：3为A洗脱液、2为B洗脱液、1为C洗脱液，三种洗脱液容器的出口管路分别由各自的电磁阀控制，并可分别在蠕动泵4的作用下，经供液口5，依次循环输送到吸附了待测样本的由阳离子交换树脂制成的层析柱6内，对样本进行洗脱，洗脱后液体输入比色池7进行色谱分析。整个过程首先由A洗脱液3洗脱临床全血样本中的糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b），然后B洗脱液2洗脱临床全血样本中的糖化血红蛋白（HbA1c），接着C洗脱液1则洗脱临床全血样本中的非糖化血红蛋白（HbA0），最后再由A洗脱液3对阳离子交换树脂的层析柱6进行清洗、平衡和再生，以达到可以再次洗脱分离新的临床全血样本。三梯度洗脱的原理为：三种不同离子强度的洗脱液可以依次将与阳离子交换树脂结合强度从弱到强的三种特定的组分洗脱下来。在色谱分析的过程中，吸附了临床全血样本的层析柱，离子强度最低的A洗脱液在流经过程中，与阳离子交换树脂结合能力最弱的糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b）被首先洗脱下来，混合有糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b）的洗脱液流至比色池内进行比色分析，随着时间的推移，被洗脱的糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b）由少渐多再逐渐变少，因此，比色分析得到的吸光度值也会由低到高再逐渐变低，形成第一个吸光度峰值。在一定的时间后，A洗脱液停止吸出，B洗脱液被吸入层析柱并流入比色池。离子强度稍强的B洗脱液在流经过程中，与阳离子交换树脂结合能力相稍强一些的糖化血红蛋白（HbA1c）被洗脱下来，混有糖化血红蛋白（HbA1c）的洗脱液在比色池内进行比色分析，随着时间的推移，被洗脱的糖化血红蛋白亚组分（HbA1c）也由少渐多再逐渐变少，比色分析得到的吸光度值则也由低到高再逐渐变低，形成第二个吸光度峰值。一定时间后，B洗脱液也停止吸出，C洗脱液被吸入层析柱并流入比色池。离子强度最强的C洗脱液在流经过程中，与阳离子交换树脂结合能力最强的非糖化血红蛋白（HbA0）被全部洗脱下来并在比色池内被比色分析，随着时间的推移本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法，采用阳离子交换层析的方法分析HbA1c在临床样本中所占比例，其特征在于：利用三种特定离子浓度的洗脱液依次对吸附了血红蛋白的阳离子交换树脂进行洗脱，洗脱顺序如下：a)糖化血红蛋白中的两种亚组分HbA1a和HbA1b；b)糖化血红蛋白HbA1c；c)非糖化血红蛋白HbA0；洗脱过程中对洗脱后的样本做实时、持续的比色测量，以时间为横轴，浓度为纵轴，得到实时的三梯度浓度和洗脱色谱合成图，最后将HbA1c波形面积在色谱合成图波形总面积中所占比例作为HbA1c在血红蛋白中的占比；所述洗脱液包括：A洗脱液：用于洗脱糖化血红蛋白HbA1a、HbA1b亚组分和阳离子交换树脂的清洗、平衡及再生；B洗脱液：用于洗脱糖化血红蛋白HbA1c亚组分；C洗脱液：用于洗脱非糖化血红蛋白HbA0。

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法，采用阳离子交换层析的方法分析HbA1c在临床样本中所占比例，其特征在于：利用三种特定离子浓度的洗脱液依次对吸附了血红蛋白的阳离子交换树脂进行洗脱，洗脱顺序如下：
a)糖化血红蛋白中的两种亚组分HbA1a和HbA1b；
b)糖化血红蛋白HbA1c；
c)非糖化血红蛋白HbA0；
洗脱过程中对洗脱后的样本做实时、持续的比色测量，以时间为横轴，浓度为纵轴，得到实时的三梯度浓度和洗脱色谱合成图...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄东宁，
申请(专利权)人：江苏奥迪康医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32