本发明专利技术公开了一种血清中间接胆红素的双试剂测定方法，属于利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法。本发明专利技术的技术方案是：重氮试剂在试剂I中，试剂II仅有加速剂有效成分，其测定方法为：使用前试剂A与试剂B按20∶1体积比混合成试剂I，血清先与试剂I于37℃温浴3～5分钟，血清中直接胆红素与反应液中氯化重氮苯磺酸反应生成偶氮胆红素，再加入试剂II后于37℃温浴4～7分钟，间接胆红素在加速剂的作用下，使间接胆红素氢键破坏后与氯化重氮苯磺酸反应生成偶氮胆红素。仪器在540～550nm波长处检测，以试剂I反应产生的偶氮胆红素为空白，由试剂II反应产生的偶氮胆红素计算出间接胆红素的含量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定血清、血浆或者尿液中胆红素的试剂盒；或是利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法，特别是涉及一种用生化分析仪检测血清中间接胆红素的双试剂测定方法。
技术介绍
间接胆红素(英文缩写IBIL)主要是由红细胞破坏而来，未在肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做间接胆红素。间接胆红素经过肝脏代谢又可变为直接胆红素，随胆汁排入胆道，最后经大便排出。临床意义间接胆红素参考值1. O 20.0 μ mol/L。间接胆红素偏高的原因1、肝脏疾患一些恶性疾病也会导致血中的间接胆红素偏高，如急性黄疸型肝炎、急性肝坏死、慢性活动性肝炎、肝硬化等。2、溶血性贫血人体内红细胞大量破坏，释放出间接胆红素，当·血中间接胆红素过多时，超过了肝脏的转化能力，使间接胆红素在血中滞留，从而引起血中间接胆红素偏高，这种情况也被称之为溶血性黄疸，患者通常会有皮肤发黄、巩膜发黄、尿色发黄症状。3、血型不合输血当输入血型不合的血液，会导致溶血，使体内红细胞大量破坏，从而导致血液中的间接胆红素偏高。4、新生儿黄疸当新生儿出生以后，48 72小时出现黄疸，精神不好，且2周内没有消退，这主要是因为母子血型或者新生儿先天性胆道畸形等引起的，这种情况也会导致血液中的间接胆红素偏高。目前胆红素测定方法有改良J-G法、胆红素氧化酶法、高效液相色谱法、经皮测定胆红素法、钒酸盐氧化法等测定方法，其中，改良J-G法为世界卫生组织和我国卫生部临床检验中心推荐的实验室测定方法，这些方法用于测定总胆红素和直接胆红素。以二甲亚砜法为例总胆红素(TBIL)测定反应式为对氨基苯磺酸+HCl+NaN02 —氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸一偶氮胆红素 二甲亚砜 间接胆红素—— 破坏氢键后+氯化重氮苯磺酸- 偶氮胆红素直接胆红素测定采用的是在总胆红素中不加入二甲亚砜，测定的即为直接胆红素，目前实验室测定间接胆红素方法均为先测定总胆红素，然后在测定直接胆红素，两者结果相减即为间接胆红素的值，但此法工作量及试剂成本加倍，而且同时受两个实验误差的影响，因此，本专利技术创造了应用双试剂法一次测得间接胆红素的方法。在同一反应体系中，直接胆红素先与氯化重氮苯磺酸生成偶氮胆红素反应完成后，加入二甲亚砜，间接胆红素在二甲亚砜作用下，与氯化重氮苯磺酸生成偶氮胆红素，仪器以第一步反应生成的偶氮胆红素为空白，以第二步反应生成的偶氮胆红素为测定反应计算出间接胆红素的值，不受直接胆红素的干扰，因此，测定结果为间接胆红素的值。
技术实现思路
为了解决现有技术无法直接测定血清中间接胆红素，本专利技术提供一种经济方便易行，准确性更高、能够直接测定血清间接胆红素的双试剂测定方法。解决该技术问题采用的技术方案是对氨基苯磺酸、盐酸及亚硝酸钠同在试剂I中，直接胆红素先与氯化重氮苯磺酸生成偶氮胆红素反应完成后，加入试剂II，间接胆红素在二甲亚砜作用下，与氯化重氮苯磺酸生成偶氮胆红素，仪器在540nm波长处检测，以第一步反应生成的偶氮胆红素为空白，由试剂II反应产生的偶氮胆红素计算出间接胆红素的含量。反应式第一步反应 对氨基苯磺酸+HCl+NaN02 —氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸一偶氮胆红素第二步反应权利要求1.一种血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于重氮试剂在试剂I中，试剂II仅含有加速剂有效成分，其测定方法为血清先与试剂I于37°c温浴3 5分钟，血清中直接胆红素与试剂I的反应生成偶氮胆红素，再加入试剂II后于37°C温浴4 7分钟，间接胆红素在加速剂的作用下，间接胆红素氢键被破坏，与重氮试剂反应生成偶氮胆红素，仪器在540nm波长处检测，以试剂I反应产生的偶氮胆红素为空白，由试剂II反应产生的偶氮胆红素计算出间接胆红素的含量，计算公式为0DIBiL = OD27-OD10X 间接胆红素浓度=F X ODibil 其中0D·是间接胆红素产生的吸光度，OD10是样品加入试剂I反应后测得的吸光度，OD27是样品加入试剂II反应后测得的吸光度，SV是血清样品的体积，R1V1是试剂I的体积，R11V11是试剂II的体积，F是校正因数。2.根据权利要求I所述的血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于试剂I中含有盐酸、对氨基苯磺酸、亚硝酸钠及防腐剂。3.根据权利要求I所述的血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于试剂II中仅含有二甲亚砜或者葡萄糖醛酸基转移酶、或者咖啡因和苯甲酸钠。4.根据权利要求I所述的血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于试剂I中各组成成分为对氨基苯磺酸40 80mmol/L、盐酸240 320mmol/L、亚硝酸钠40 80mmol/L、Proclin 300 防腐剂 100μ I 300μ I。5.根据权利要求I所述的血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于试剂II中仅有二甲亚砜(DMSO) 20 28mmol/L、Proclin 300 防腐剂 100μ I 300μ I。6.根据权利要求I所述的血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于测定的体积比为样品试剂I :试剂II = 3 7 120 180 30 70。全文摘要本专利技术公开了一种血清中间接胆红素的双试剂测定方法，属于利用可见光，通过测试反应的结果产生颜色变化来测试材料的方法。本专利技术的技术方案是重氮试剂在试剂I中，试剂II仅有加速剂有效成分，其测定方法为使用前试剂A与试剂B按20∶1体积比混合成试剂I，血清先与试剂I于37℃温浴3～5分钟，血清中直接胆红素与反应液中氯化重氮苯磺酸反应生成偶氮胆红素，再加入试剂II后于37℃温浴4～7分钟，间接胆红素在加速剂的作用下，使间接胆红素氢键破坏后与氯化重氮苯磺酸反应生成偶氮胆红素。仪器在540～550nm波长处检测，以试剂I反应产生的偶氮胆红素为空白，由试剂II反应产生的偶氮胆红素计算出间接胆红素的含量。文档编号G01N21/31GK102944683SQ20121046003公开日2013年2月27日 申请日期2012年11月16日 优先权日2012年11月16日专利技术者李立和 申请人:李立和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血清中间接胆红素的双试剂测定方法，其特征在于重氮试剂在试剂I中，试剂II仅含有加速剂有效成分，其测定方法为：血清先与试剂I于37℃温浴3～5分钟，血清中直接胆红素与试剂I的反应生成偶氮胆红素，再加入试剂II后于37℃温浴4～7分钟，间接胆红素在加速剂的作用下，间接胆红素氢键被破坏，与重氮试剂反应生成偶氮胆红素，仪器在540nm波长处检测，以试剂I反应产生的偶氮胆红素为空白，由试剂II反应产生的偶氮胆红素计算出间接胆红素的含量，计算公式为：ODIBiL＝OD27?OD10×[(SV+RIVI)/(SV+RIVI+RIIVII)]间接胆红素浓度＝F×ODIBiL其中ODIBiL是间接胆红素产生的吸光度，OD10是样品加入试剂I反应后测得的吸光度，OD27是样品加入试剂II反应后测得的吸光度，SV是血清样品的体积，RIVI是试剂I的体积，RIIVII是试剂II的体积，F是校正因数。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李立和，
申请(专利权)人：李立和，
类型：发明
国别省市：
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