一种用于肝硬化的检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术创造提供一种用于肝硬化的检测试剂盒及其检测方法，属于生物技术领域。本发明专利技术的检测方法，应用抗人壳多糖酶3蛋白1(CHI3L1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，使用时往包被抗体的微孔板中加入待检样本，若样本中含有被测物，便可结合于固相抗体上，从而形成抗原-抗体复合物；然后加入生物素标记的抗人CHI3L1抗体，形成抗体-抗原-生物素标记抗体复合物；再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素，形成抗体-抗原-生物素标记抗体-酶标亲和素复合物；最后加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺底物系统，发生显色反应。显色反应结束后用酶标仪进行检测。具有快速、简便、准确的确定检测结果的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术创造设及生物
，尤其设及一种用于肝硬化的检测试剂盒及其检测 方法。
技术介绍
肝脏是人体内蛋白质合成的主要场所，各种肝病均可影响蛋白质的合成功能，弓I 起多种血清蛋白浓度变化。肝硬化是一种常见的有不同病因引起的慢性、进行性、弥漫性肝 病，在肝细胞广泛变形和坏死基础上产生肝脏纤维组织弥漫性增生，肝脏硬化可W出现肝 细胞的合成功能障碍。肝硬化转换为肝癌几率的报道不尽相同，多数研究仍将肝硬化作为 肝癌发生的最大风险因素。因此对肝硬化的早发现、早诊断、早治疗十分重要，在肝硬化阶 段即进行介入预防，将有效降低肝硬化转向肝癌的发生率及死亡率。 对于肝硬化的诊断方法现有技术中主要包括病理学、影像学和血清学诊断3种。 其中，肝组织穿刺病理检查仍是诊断肝纤维化及肝硬化的金标准，但在我国存在活检率低， 抽样误差，患者依存性差的缺陷，单次病理检查结果不能反应肝纤维化发展的动态过程，多 次复查缺乏可行性。由于早期肝硬化起病隐匿，临床表现往往缺乏特异性，因而敏感性很 差，此方法具有很大的滞后性。其中，影像学检查在临床一般采用B超及彩色多普勒超声检 查，CT、MR、内镜检查及X光食道胃底领餐造影。影像学对肝硬化晚期的诊断效果较好，对晚 期肝硬化消化道出血评估有积极的意义，但其区分轻度肝纤维化的效果则不理想。 其中，血清学诊断根据酶联免疫法。血清多肤与蛋白质标志物在在化ISA检测方 法上仍存在诸多不足，尤其是多肤与蛋白标志物的联合检测尚处于简单的"混合型"模式。 ELISA检测方法中，最常使用双抗体夹屯、化ISA，该方法在血清多肤和蛋白进行联合检测 的研究中，一般将几种相关的，甚至无关联的蛋白或者多肤标志物分别检测，使可靠性大打 折扣。 壳多糖酶3样1蛋白（CHI3L1)是一种含383个氨基酸的单体糖基化蛋白。目前 研究发现，在肝硬化患者的血清中，CHI3L1的浓度可显著性升高。因此，可根据人血清样本 中的CHI3L1含量用于肝硬化的诊断，设计一种相关检测试剂盒十分必要。
技术实现思路
本专利技术创造要解决的问题是提供一种用于肝硬化的检测试剂盒，本专利技术提供的试 剂盒根据双抗体夹屯、法原理，可定量检测人体血清样本中CHI3L1的含量，快速、简便、准确 的确定检测结果。 本专利技术的第一个目的在于提供一种用于肝硬化的检测试剂，包括W下试剂： CHI3L1微孔酶标板、CHI3L1检测抗体、HRP标记亲和素、HRP标记亲和素稀释液、CHI3L1样 本稀释液、显色剂A、显色剂B、洗漆液、终止液、校准品和质控品。[000引进一步，所述显色剂A为含有双氧水的缓冲溶液，显色剂B为含有3, 3'，5, 5' -四 甲基联苯胺的缓冲溶液。 进一步，所述CHI3L1微孔酶标板的微孔内包被有大鼠抗CHI3L1单克隆抗体，所述 CHI3L1微孔酶标板上设有8个微孔。 进一步，所述CHI3L1检测抗体为生物素标记山羊抗CHI3L1多克隆抗体。 本专利技术的第二个目的在于提供一种用于肝硬化的检测试剂盒，包括上述所有试 剂。 进一步，还包括不干胶片。 本专利技术的第S个目的在于提供一种用于肝硬化的检测试剂盒的检测方法，使用上 述的试剂盒，包括W下步骤： (1)配置工作浓度的洗漆液，溶解校准品和质控品； (2)稀释样本：待CHI3L1检测的血清样本用所述CHI3L1样本稀释液稀释，得稀释 样本； 做依次将步骤（1)和似中的所述校准品、质控品、稀释样本加入到所述CHI3L1 微孔酶标板的微孔中，所述校准品和质控品进行复孔，混匀，得混匀后的酶标板； (4)将步骤（3)中所述酶标板用所述不干胶片覆盖，置于37°C解育60分钟；[001引 妨将步骤（4)中解育后的所述酶标板，弃不干胶片和酶标板的微孔内液体，采用 步骤（1)配置的所述工作浓度的洗漆液对酶标板的微孔进行洗漆，洗漆4次，或者采用洗板 机对所述酶标板的微孔进行洗漆，洗漆5次，拍干酶标板； 做将步骤妨得到的干的酶标板加入所述CHI3L1检测抗体，用所述不干胶片覆 盖所述酶标板，置于37°C解育60分钟； (7)利用步骤做得到的解育后的所述酶标板重复步骤妨中的洗漆操作，得拍干 的酶标板； (8)使用HRP标记亲和素稀释液与HRP标记亲和素配置工作浓度HRP标记亲和素， 所述工作浓度HRP标记亲和素加入到步骤（7)得到的所述酶标板的微孔中，用所述不干胶 片覆盖所述酶标板，置于37°C解育30分钟；[002引 （9)将步骤做得到的解育后的所述酶标板重复操作步骤妨中的洗漆操作，得拍 干的酶标板；[002引 （10)配置显色剂；所述显色剂A;所述显色剂B按体积比1 ;1混合，得显色剂； (11)将步骤（10)得到的所述显色剂加入到步骤（9)得到的所述酶标板的微孔中， 室温避光反应15分钟； (12)将所述终止液加入到步骤（11)得到的所述酶标板的微孔内，混匀； (13)将步骤（12)得到的所述酶标板采用酶标仪读取OD值。 进一步，所述步骤（1)中所述洗漆液使用超纯水稀释，所述校准品和质控品使用 去离子水溶解，溶解后的所述校准品和质控品，于室温15分钟W上。[002引进一步，步骤巧）中每次洗漆加入所述工作浓度的洗漆液需静置30~60秒，拍干 后再重新加所述工作浓度的洗漆液进行洗漆。 本专利技术创造具有的优点和积极效果是： 本专利技术创造的试剂盒应用抗人CHI3L1抗体包被微孔板，制成固相抗体，使用时往 包被抗体的微孔板中加入待检样本，若样本中含有被测物，便可结合于固相抗体上，从而当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于肝硬化的检测试剂，其特征在于：包括以下试剂：CHI3L1微孔酶标板、CHI3L1检测抗体、HRP标记亲和素、HRP标记亲和素稀释液、CHI3L1样本稀释液、显色剂A、显色剂B、洗涤液、终止液、校准品和质控品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳玉岭，
申请(专利权)人：天益康天津医院管理有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12