本发明专利技术公开了一种检测狗毛过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法，试剂盒包括校准品、质控品、生物素标记的狗毛过敏原溶液、碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液，利用所述试剂盒对狗毛过敏原特异性IgE抗体进行检测。通过上述方式，本发明专利技术试剂盒中各试剂组分稳定性良好，有效期可至一年以上，检测灵敏度高、特异性能好、变异小，经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量控制规程进行生产，用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，在临床研究中与国外进口试剂的符合相关性高达90％以上，且费用仅为其1/2。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，特别是涉及一种检测狗毛过敏原 特异性IgE抗体的试剂盒及方法。
技术介绍
IgE抗体介导的I型过敏反应性疾病相当普遍，世界各国变态反应疾病的总发病 率约为15%_30%，我国大约有5-10%的人受过敏原的袭扰，是当前世界性的重大卫生学问 题，被世界卫生组织（WHO)列为二十一世纪重点防治的三大疾病之一。 过敏性疾病是患者吸入、摄食入或者注入含有致敏成分的物质（称为过敏原或变 应原，Allergen)后触发机体的B细胞产生特异性免疫球蛋白E(Immunoglobulin E, IgE)， 从而引发过敏反应(或称变态反应，Allergy)的疾病及相关症状，如过敏性哮喘、枯草热、荨 麻疹、过敏性鼻炎、湿疹、结膜炎及胃肠道I型过敏性疾病及严重过敏反应等。上述过敏性 疾病的发生，IgE抗体起关键作用。 动物的毛发中存在有能使人类产生机体免疫反应的过敏原，引起咳嗽、流涕、打喷 嚏、过敏性鼻炎、皮疹、哮喘等不同程度的过敏反应。 在国内，狗毛（E5)过敏原特异性IgE抗体检测临床上主要以国外进口试剂和免疫 组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基 层普及。具有自主知识产权的国产狗毛（E5)过敏原特异性IgE抗体免疫化学发光检测试 剂盒目前还没有上市。 因此，有待开发对狗毛（E5)过敏原特异性IgE抗体检测灵敏度高与可靠性并能降 低检测成本的检测技术。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种检测狗毛过敏原特异性IgE抗体的试剂 盒及方法，该试剂盒性能可靠，灵敏度高，线性范围宽，可配合全自动仪器使用，能提高检测 灵敏度及可靠性，并降低成本，延长有效期。 为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供一种检测狗毛过敏原 特异性IgE抗体的试剂盒，包括的试剂有：校准品、质控品、生物素标记的狗毛过敏原溶液、 碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述生物素标记的狗毛过敏原溶液的浓度为 0. 1~1. 0 ug/ml，所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0. 1~1. 0 mg/ml，所述 碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的浓度为0. 1~2. 0 ug/ml。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述校准品的浓度为：0 IU/ml、0. 35 IU/ml、0. 7 IU/ml、3.5 IU/ml、17.5 IU/ml、50 IU/ml、100 IU/ml，所述校准品是 IgE 蛋白与 0·1Μ、ρΗ值 为7. 4的Tris-HCl缓冲液配制得到的；所述质控品的浓度为：0. 7 IU/ml、17. 5 IU/ml，所述 质控品是IgE蛋白与0. 1M、pH值为7. 4的Tris-HCl缓冲液配制得到的。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述狗毛过敏原为能与人体内狗毛特异性IgE蛋白 结合的抗原，所述生物素标记的狗毛过敏原溶液的制备过程为：将狗毛过敏原按1:20摩尔 比加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，再用0. 1Μ、ρΗ值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析得到。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述标记的鼠抗人IgE二抗为能与人体内IgE蛋 白特异结合的抗体，所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的制备方法为：将浓度为 1. 0-5. Omg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人IgE二抗按摩尔比为2-10 :1进行混合后并纯 化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平 衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用〇. 05M、pH值为6. 0的MES缓冲液对碱性磷酸 酶标记的鼠抗人IgE抗体稀释。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备过 程为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀，再用0. 01M、pH值为7. 4的磷酸盐 缓冲液重悬，混匀磁分离沉淀，并重复清洗，清洗后的纳米磁微粒分散于〇. 〇1Μ、ρΗ值为7. 4 的磷酸盐缓冲液。 提供一种纳米磁微粒化学发光法定量检测血清狗毛过敏原特异性IgE抗体的方 法，包括步骤为： (1) 将磁微粒试剂、生物素标记的狗毛过敏原和待检样本混匀并反应，反应后置于磁场 中静置并去上清，得到第一溶液； (2) 向所述第一溶液中加入碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗混匀并反应，反应后置 于磁场中静置并去上清，得到第二溶液； (3) 向所述第二溶液中加入发光底物并反应，测发光强度； (4) 利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤（3)得到的发光强度对照 所述标准曲线，计算得出待测血清样本中狗毛特异性IgE的含量。 在本专利技术一个较佳实施例中，步骤（1)中所述反应的条件为37°C下反应15分钟， 所述静置的时间为3分钟；步骤（1)中还包括对所述第一溶液用清洗液进行清洗，置于磁场 中静置并去上清，清洗重复2次；步骤（2)中所述反应的条件为37°C下反应15分钟，所述静 置的时间为3分钟；步骤（2)中还包括对所述第二溶液用清洗液进行清洗，置于磁场中静置 并去上清，清洗重复2次；步骤（3)中所述反应的条件为37°C下反应5分钟，在化学发光分 析/测定仪中测定发光强度。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述方法在全自动化学发光仪Lumiray系列上进 行，所述 Lumiray 系列为 Lumiray 1200、Lumiray 1220、Lumiray 1260 或 Lumiray 1280。 在本专利技术一个较佳实施例中，所述方法包括步骤为： (1) 将所述试剂盒放入全自动化学发光仪的试剂仓里并进行识别； (2) 将校准品置于所述全自动化学发光仪的仪器样本仓，识别校准品信息，分配校准品 位置； (3) 将质控物或待测样本置于仪器样本仓，编辑检测信息； (4) 启动运行程序，所有校准品/质控物/待测样本自动进行处理得到结果。 本专利技术的有益效果是：本专利技术的检测狗毛过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方 法，试剂盒中各试剂组分稳定性良好，有效期可至一年以上，检测灵敏度高、特异性能好、变 异小，经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量 控制规程进行生产，用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，在临床研 究中与国外进口试剂的符合相关性高达90%以上，且费用仅为其1/2。【附图说明】 为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使 用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于 本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它 的附图，其中： 图1是本专利技术的实施例一中检测狗毛（E5)过敏原特异性IgE抗体的试剂盒的标准曲 线图； 图2是本专利技术的狗毛（E5)过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒与进口试剂的性能对比 图。【具体实施方式】 下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测狗毛过敏原特异性IgE抗体的试剂盒，其特征在于，包括的试剂有：校准品、质控品、生物素标记的狗毛过敏原溶液、碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何晓静，钱林，宋孟杰，韩霜，罗薇，丁俊荣，李庆春，
申请(专利权)人：苏州浩欧博生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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