双特异性异二聚化双抗体及其用途制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求享有于2014年7月1日提交的美国临时申请号62/019,762和于2015年4月17日提交的美国临时申请62/148,920的权益，所述申请以其整体通过引用并入本文。序列表本申请经EFS-Web电子提交并且包括以.txt格式的电子提交的序列表。.txt文件包含创建于2015年6月12日标题为\PC72054A_Sequence_Listing.txt\且大小为248KB的序列表。该.txt文件中包含的序列表为说明书的一部分且以其整体通过引用并入本文。专利
本专利技术涉及双特异性异二聚化双抗体及其在治疗癌症中的用途。专利技术背景已经开发了各种策略来生成能够募集T细胞以介导肿瘤细胞杀伤的双特异性分子。然而，产生此类分子的大部分努力受限于无效产生和不良稳定性特性。为了解决这些问题，已经开发了基于共价连接的双特异性异二聚化双抗体结构（也称为双亲和力再靶向(DART®)蛋白）的Fv衍生化策略(美国专利申请公开号2007/0004909、2009/0060910和2010/0174053)。存在对于这样的双特异性异二聚化双抗体的需求，所述双抗体克服与生成双特异性抗体相关的挑战并提供高度特异性且有效的试剂，所述试剂能够结合表达靶抗原的肿瘤细胞并且募集T细胞和经CD3活化来使之活化，得到针对癌症的新型且有效的治疗。专利技术概述本专利技术提供双特异性异二聚化双抗体，其中所述双特异性异二聚化双抗体能够特异性结合P-钙黏着蛋白的表位和CD3的表位。本专利技术提供双特异性异二聚化双抗体，其中所述双特异性异二聚化双抗体能够特异性结合P-钙黏着蛋白的表位和CD...
【技术保护点】
双特异性异二聚化双抗体，其能够特异性结合P‑钙黏着蛋白的表位和CD3的表位，所述双特异性异二聚化双抗体包含第一多肽链和第二多肽链，其中：a. 所述第一多肽链在N末端至C末端方向包含：i. 结构域1，其包含亚结构域1A和亚结构域1B，以及ii. 第一促异二聚体结构域；并且b. 所述第二多肽链在N末端至C末端方向包含：i. 结构域2，其包含亚结构域2A和亚结构域2B，以及ii. 第二促异二聚体结构域，并且其中亚结构域1A和亚结构域2A形成包含抗P‑钙黏着蛋白抗体的可变重（VH）结构域（P‑CAD VH）和抗P‑钙黏着蛋白抗体的可变轻（VL）结构域（P‑CAD VL）的P‑钙黏着蛋白VL/VH结合域，而亚结构域1B和亚结构域2B形成包含抗CD3抗体的VL结构域（CD3 VL）和抗CD3抗体的VH结合域（CD3 VH）的CD3 VL/VH结合域；或者其中亚结构域1A和亚结构域2A形成包含CD3 VL和CD3 VH的CD3 VL/VH结合域，而亚结构域1B和亚结构域2B形成包含P‑CAD VH和P‑CAD VL的P‑钙黏着蛋白VL/VH结合域。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.01 US 62/019762;2015.04.17 US 62/1489201.双特异性异二聚化双抗体，其能够特异性结合P-钙黏着蛋白的表位和CD3的表位，所述双特异性异二聚化双抗体包含第一多肽链和第二多肽链，其中：a.所述第一多肽链在N末端至C末端方向包含：i.结构域1，其包含亚结构域1A和亚结构域1B，以及ii.第一促异二聚体结构域；并且b.所述第二多肽链在N末端至C末端方向包含：i.结构域2，其包含亚结构域2A和亚结构域2B，以及ii.第二促异二聚体结构域，并且其中亚结构域1A和亚结构域2A形成包含抗P-钙黏着蛋白抗体的可变重（VH）结构域（P-CADVH）和抗P-钙黏着蛋白抗体的可变轻（VL）结构域（P-CADVL）的P-钙黏着蛋白VL/VH结合域，而亚结构域1B和亚结构域2B形成包含抗CD3抗体的VL结构域（CD3VL）和抗CD3抗体的VH结合域（CD3VH）的CD3VL/VH结合域；或者其中亚结构域1A和亚结构域2A形成包含CD3VL和CD3VH的CD3VL/VH结合域，而亚结构域1B和亚结构域2B形成包含P-CADVH和P-CADVL的P-钙黏着蛋白VL/VH结合域。2.权利要求1的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含P-CADVL或CD3VL，且如果所述亚结构域1A包含CD3VL，则所述亚结构域1B包含P-CADVH，或如果所述亚结构域1A包含P-CADVL，则所述亚结构域1B包含CD3VH；且其中取决于亚结构域1A所选的VL结构域，所述亚结构域2B包含P-CADVL或CD3VL，且如果所述亚结构域2B包含CD3VL，则所述亚结构域2A包含P-CADVH，或如果所述亚结构域2B包含P-CADVL，则所述亚结构域2A包含CD3VH。3.权利要求1或2的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含P-CADVL且所述亚结构域1B包含CD3VH，且所述亚结构域2B包含CD3VL且所述亚结构域2A包含P-CADVH。4.权利要求1或2的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含CD3VL且所述亚结构域1B包含P-CADVH，且所述亚结构域2B包含P-CADVL且所述亚结构域2A包含CD3VH。5.权利要求1的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含P-CADVH或CD3VH，且如果所述亚结构域1A包含CD3VH，则所述亚结构域1B包含P-CADVL，或如果所述亚结构域1A包含P-CADVH，则所述亚结构域1B包含CD3VL；且其中取决于亚结构域1A所选的VH结构域，所述亚结构域2B包含P-CADVH或CD3VH，且如果所述亚结构域2B包含CD3VH，则所述亚结构域2A包含P-CADVL，或如果所述亚结构域2B包含P-CADVH，则所述亚结构域2A包含CD3VL。6.权利要求1或5的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含P-CADVH且所述亚结构域1B包含CD3VL，且所述亚结构域2B包含CD3VH且所述亚结构域2A包含P-CADVL。7.权利要求1或5的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A包含CD3VH且所述亚结构域1B包含P-CADVL，且所述亚结构域2B包含P-CADVH且所述亚结构域2A包含CD3VL。8.权利要求1-7中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域和所述第二促异二聚体结构域包含含有CH2和CH3结构域的IgGFc区，其中所述CH2结构域和/或所述CH3结构域的氨基酸序列相比于野生型IgGFc区包含至少一个氨基酸修饰，以形成钮或扣。9.权利要求8的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域和所述第二促异二聚体结构域不同时为钮或不同时为扣；并且/或者其中所述第一促异二聚体结构域与所述第二促异二聚体结构域形成IgG免疫球蛋白Fc区。10.权利要求8或9中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中形成所述钮的所述IgGFc区包含SEQIDNO:63的序列，而形成所述扣的所述IgGFc区包含SEQIDNO:64的序列。11.权利要求1-7中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域和所述第二促异二聚体结构域包含含有谷氨酸和带负电荷的α螺旋卷曲的E卷曲区或含有赖氨酸和带正电荷的螺旋卷曲的K卷曲区；且其中所述第一促异二聚体结构域和所述第二促异二聚体结构域不同时为E卷曲区或不同时为K卷曲区。12.权利要求11的双特异性异二聚化双抗体，其中所述E卷曲区包含SEQIDNO:61的序列，而所述K卷曲区包含SEQIDNO:62的序列。13.权利要求1-12中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A和所述亚结构域1B通过甘氨酸-丝氨酸接头（接头1）连接，并且所述亚结构域2B和所述亚结构域2A通过甘氨酸-丝氨酸接头（接头1）连接。14.权利要求13的双特异性异二聚化双抗体，其中所述甘氨酸-丝氨酸接头（接头1）包含SEQIDNO:68或SEQIDNO:69的序列。15.权利要求1-14中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述亚结构域1A和所述亚结构域1B不缔合以形成VL/VH表位结合域，并且所述亚结构域2B和所述亚结构域2A不缔合以形成VL/VH表位结合域。16.权利要求1-15中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域在亚结构域1B上包含半胱氨酸接头（接头2）并且/或者所述第二促异二聚体结构域在亚结构域2A上包含半胱氨酸接头（接头2）。17.权利要求16的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域和/或所述第二促异二聚体结构域的接头2还包含至少一个甘氨酸残基。18.权利要求17的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域和/或所述第二促异二聚体结构域的接头2包含以下的序列：GFNRGEC(SEQIDNO:70)、GVEPKSC(SEQIDNO:71)、GGCGGG(SEQIDNO:72)、GCPPCP(SEQIDNO:73)、GGTGGCPPCP(SEQIDNO:74)、GEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:75)或GGTGGGEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:76)。19.权利要求18的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域的接头2包含以下的序列：GCPPCP(SEQIDNO:73)、GGTGGCPPCP(SEQIDNO:74)、GEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:75)或GGTGGGEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:76)，而所述第二促异二聚体结构域的接头2包含以下的序列：GCPPCP(SEQIDNO:73)、GGTGGCPPCP(SEQIDNO:74)、GEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:75)或GGTGGGEPKSSDKTHTCPPCP(SEQIDNO:76)。20.权利要求18的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域的接头2包含序列GGCGGG(SEQIDNO:72)，且所述第二促异二聚体结构域的接头2包含序列GGCGGG(SEQIDNO:72)。21.权利要求18的双特异性异二聚化双抗体，其中所述第一促异二聚体结构域的接头2包含序列GFNRGEC(SEQIDNO:70)且所述第二促异二聚体结构域的接头2包含序列GVEPKSC(SEQIDNO:71)，或所述第一促异二聚体结构域的接头2包含序列GVEPKSC(SEQIDNO:71)且所述第二促异二聚体结构域的接头2包含序列GFNRGEC(SEQIDNO:70)。22.权利要求1-21中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其中所述双特异性异二聚化双抗体：a.结合人P-钙黏着蛋白的胞外结构域3（ECD3），b.结合P-钙黏着蛋白的表位但不结合E-钙黏着蛋白或VE-钙黏着蛋白的表位，或者c.结合人P-钙黏着蛋白的表位但不结合小鼠P-钙黏着蛋白的表位，d.具有延长的血清和肿瘤半衰期，或者e.在存在增加的P-钙黏着蛋白表达水平或增加的受体密度水平的情况下具有更低的EC50。23.权利要求1-22中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其包含：a.含有XL1.1-XL1.2-XL1.3-XL1.4-XL1.5-XL1.6-XL1.7-XL1.8-XL1.9-XL1.10-XL1.11-XL1.2-XL1.13的P-CADVLCDR1序列，b.含有XL2.1-XL2.2-XL2.3-XL2.4-XL2.5-XL2.6-XL2.7的P-CADVLCDR2序列，c.P-CADVLCDR3XL3.1-XL3.2-XL3.3-XL3.4-XL3.5-XL3.6-XL3.7-XL3.8-XL3.9-XL3.10-XL3.11，d.含有XH1.1-XH1.2-XH1.3-XH1.4-XH1.5、XH1.6-XH1.7-XH1.8-XH1.9-XH1.10或XH1.5、XH1.6-XH1.7-XH1.8-XH1.9-XH1.10的P-CADVHCDR1序列，e.含有XH2.1-XH2.2-XH2.3-XH2.4-XH2.5-XH2.6-XH2.7-XH2.8-XH2.9-XH2.10或XH2.1-XH2.2-XH2.3-XH2.4-XH2.5-XH2.6-XH2.7-XH2.8-XH2.9-XH2.10-XH2.11-XH2.12-XH2.13-XH2.14-XH2.15-XH2.16-XH2.17的P-CADVHCDR2序列，和f.含有XH3.1-XH3.2-XH3.3-XH3.4-XH3.5-XH3.6-XH3.7-XH3.8-XH3.9的P-CADVHCDR3序列，其中XL3.3为W，XH1.8为G，XH2.5为Y，XH3.1为I且XH3.7为F。24.权利要求23的双特异性异二聚化双抗体，其中XL1.8为G，XL2.2为N，XL2.3为N，XL3.2为T，XH2.6为N，XH2.16为Q，XH3.5为N且XH3.9为I。25.权利要求1-24中任一项的双特异性异二聚化双抗体，其包含：a.含有SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23的序列的P-CADVL的P-CADVLCDR1、P-CADVLCDR2和P-CADVLCDR3；b.含有SEQIDNO:45或46的序列的CD3VH的CD3VHCDR1、CD3VHCDR2和CD3VHCDR3；c.含有SEQIDNO:47的序列的CD3VL的CD3VLCDR1、CD3VLCDR2和CD3VLCDR3；和/或d.含有SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24的序列的P-CADVH的P-CADVHCDR1、P-CADVHCDR2和P-CADVHCDR3。26.权利要求25的双特异性异二聚化双抗体，其中：a.所述P-CADVLCDR1包含SEQIDNO:35或36的序列，所述P-CADVLCDR2包含SEQIDNO:37或38的序列，且所述P-CADVLCDR3包含SEQIDNO:39、40、41、42、43或44的序列；b.所述CD3VHCDR1包含SEQIDNO:48的序列，所述CD3VHCDR2包含SEQIDNO:49或50的序列，且所述CD3VHCDR3包含SEQIDNO:51的序列；c.所述CD3VLCDR1包含SEQIDNO:55的序列，所述CD3VLCDR2包含SEQIDNO:56的序列，且所述CD3VLCDR3包含SEQIDNO:57的序列；和/或d.所述P-CADVHCDR1包含SEQIDNO:25或33的序列，所述P-CADVHCDR2包含SEQIDNO:26或34的序列，且所述P-CADVHCDR3包含SEQIDNO:27、28、29、30、31或32的序列。27.权利要求25或26的双特异性异二聚化双抗体，其中所述P-CADVLCDR1包含SEQIDNO:35的序列，所述P-CADVLCDR2包含SEQIDNO:37的序列，所述P-CADVLCDR3包含SEQIDNO:41的序列，所述P-CADVHCDR1包含SEQIDNO:...
【专利技术属性】
技术研发人员：CM梅，AR鲁特，WA布拉迪，LG茨斯蒂亚科瓦，L莫斯亚克，L布卢姆，PA摩尔，LS约翰逊，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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