本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一类用于治疗乳腺癌的双特异性抗体。一类用于治疗乳腺癌的抗ErbB2双特异性抗体，其抗原结合区是由Trastuzumab抗体和Pertuzumab抗体的抗原结合区组成，本发明专利技术利用生物工程技术构建一类靶向ErbB2分子不同表位的双特异性抗体。本发明专利技术还提供了编码这类抗体的DNA序列，含有这种DNA序列的表达载体和含有这种表达载体的宿主细胞。本发明专利技术提供的一类用于治疗乳腺癌的双特异性抗体，可特异性与ErbB2分子细胞外II区和IV区结合，并且具有显著体外和体内抗乳腺癌的作用。
【技术实现步骤摘要】
-种用于治疗乳腺癌的抗ErbB2双特异性抗体
本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术公开了一类抗人ErbB2分子不同表 位双特异性抗体、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
肿瘤尤其是恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，在各种疾病所致死亡 中高居第二位。而且近年来，其发病率呈明显上升趋势。恶性肿瘤治疗效果差，晚期转移率 高，预后多不佳。目前临床上所采用的常规治疗方法如放、化疗和手术治疗虽然在很大程 度上缓解了病痛，延长了生存时间，但这些方法均存在很大的局限性，其疗效难以进一步提 商。 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，20%_30%的原发性乳腺癌患者中存在 ErbB2 (HER2)基因的扩增和蛋白的过度表达。曲妥珠单抗（Trastuzumab，商品名 Herceptin)是美国Genentech公司研制的针对ErbB2受体的人源化单克隆抗体，已于1998 年获得美国FDA批准用于ErbB2高表达转移性乳腺癌的治疗。但Trastuzumab对ErbB2 低表达的转移性乳腺癌不能显示出抗肿瘤活性，即使对ErbB2高表达的转移性乳腺癌， Trastuzumab单药一线治疗的客观反应率在30%-50%。研制更为有效的ErbB2靶向治疗性 抗体是临床上的迫切需求。 帕妥珠单抗（Pertuzumab，商品名Perjeta)是美国Genentech公司研制的针对 ErbB2受体的人源化单克隆抗体，是一种HER二聚化抑制剂，通过结合ErbB2分子，阻滞 ErbB2分子与其它HER受体的杂二聚，从而减缓了肿瘤的生长。帕妥珠单抗在2012年通过 了美国FDA认证，用于治疗HER2阳性的转移性乳腺癌。Pertuzumab是罗氏集团研发出来针 对治疗对于激素疗法几乎无效的HER-2阳性乳腺癌的新药物。 Pertuzumab是与ErbB2分子的细胞外II区结合，而Trastuzumab所针对的抗原表 位位于ErbB2受体的细胞外IV区。 人类表皮生长因子受体（human epidermal growth factor receptor，HER/erbB) 家族有 4 个成员：EGFR/HER1、ErbB2/HER2、ErbB3/HER3 和 ErbB4/HER4。ErbB2 是具有酪氨 酸激酶活性的跨膜蛋白，它没有天然配体，在单体状态下无活性。ErbB2可与HER家族的其 他3个成员（EGFR、ErbB3、ErbB4)形成配体非依赖或配体依赖的异源二聚体而活化，导致下 游信号通路MPK和PI3K/Akt激活，最终导致肿瘤细胞增殖和存活。研究表明Trastuzumab 不能完全抑制ErbB2异源二聚体激活途径，这可能是Trastuzumab耐药产生的重要原因。
技术实现思路
为了解决以上问题，本专利技术的专利技术人进行了长期研究，经大量试验，利用基因工程 技术构建了一类靶向ErbB2分子不同表位的双特异性抗体，这类双特异性抗体同时含有 Trastuzumab (曲妥珠单抗）和Pertuzumab (帕妥珠单抗）的抗原表位结合区。 本专利技术公开了 ： 1. 一类双特异性抗体，为包含Trastuzumab和Pertuzumab的抗原结合区的抗体蛋白， 既可以结合人ErbB2受体的细胞外IV区，又可以结合ErbB2受体的细胞外II区。 2. -类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为TPp具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列。 3. -类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为TPs，具有SEQ ID NO: 14和SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。 4. 一类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为Ρ?Υ，具有SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。 5. -类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为PTs，具有SEQ ID NO: 22和SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列。 6. -种分离的核酸分子，编码上述1所述的双特异性抗体。 7. -种分离的核酸分子，编码上述2所述的双特异性抗体TPp具有SEQ ID NO: 9 和SEQ ID NO: 11所示的核苷酸序列。 8. -种分离的核酸分子，编码上述3所述的双特异性抗体TPs，具有SEQ ID NO: 13 和SEQ ID NO: 15所示的核苷酸序列。 9. 一种分离的核酸分子，编码上述4所述的双特异性抗体Ρ?Υ，具有SEQ ID NO: 17 和SEQ ID NO: 19所示的核苷酸序列。 10. -种分离的核酸分子，编码上述5所述的双特异性抗体PTs，具有SEQ ID N0:21 和SEQ ID N0:23所示的核苷酸序列。 11. 一种载体，含有上述6-10任一所述的核酸分子和所述核酸分子的序列操作性 相连的表达调控序列，其中载体可以为pDRl，pcDNA3. 1 ( + )，pcDNA3. 1/ZE0 ( + )，pDHFR 之一。 12.上述 11 所述的载体，为 pcDNA3. 1 ( + )或 pcDNA3. 1/ZE0 ( + )。 13. -种宿主细胞，含有上述12所述的载体，为真核细胞。 14.上述13所述的宿主细胞，为哺乳动物细胞。 15.上述14所述的宿主细胞，为CHO细胞。 16. -种制备上述1-5任一所述的双特异性抗体的方法，该方法包括： a) 将Trastuzumab轻重链可变区基因以长度不同的连接序列连接到Pertuzumab抗体 轻重链基因上，分别构建出TPs和TP^的轻重链基因，将Pertuzumab轻重链可变区基因以 长度不同的连接序列连接到Trastuzumab抗体轻重链基因上，分别构建出PTs和PT li的轻 重链基因， b) 将双特异性抗体TPs、TPp PTs和Ρ?Υ的轻重链基因分别克隆到真核表达载体 pcDNA3. 1 ( + )，转染权利要求13-15任一所述的宿主细胞，筛选高表达克隆， c) 在表达条件下，培养上述13-15任一所述的宿主细胞，表达双特异性抗体TPs、TPp PTs 和 PTL， d) 分离或纯化所述的双特异性抗体。 17. -种组合物，含有上述1-5任一所述的双特异性抗体和药学上可接受的载体。 18.上述1、2、3、4、5、17任一所述的双特异性抗体或制剂在制备抗乳腺癌的药物 中的用途。 19.上述18所述的用途，还包括和其它的抗肿瘤药物联合使用。 本专利技术中，任何合适的载体都可以使用，可以为pDRl，pcDNA3. 1 ( + )，pcDNA3. 1/ ZEO ( + )，pDHFR之一，表达载体中包括连接有合适的转录和翻译调节序列的融合DNA序列。 哺乳动物或昆虫宿主细胞培养系统可用于本专利技术的双特异性抗体的表达，COS， CHO, NSO, sf9及sf21等细胞均可适用于本专利技术。 可用的宿主细胞为含有上述载体的原核细胞，可以为DH5a，BL21 (DE3)，TGl之一。 本专利技术中公开的用于治疗乳腺癌的抗EebB2双特异性抗体的制备方法为在表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一类双特异性抗体,为包含Trastuzumab和Pertuzumab的抗原结合区的抗体蛋白，既可以结合人ErbB2受体的细胞外IV区，又可以结合ErbB2受体的细胞外II区。
【技术特征摘要】
1. 一类双特异性抗体，为包含Trastuzumab和Pertuzumab的抗原结合区的抗体蛋白， 既可以结合人ErbB2受体的细胞外IV区，又可以结合ErbB2受体的细胞外II区。2. 权利要求1所述一类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为TPp具有SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列。3. 权利要求1所述一类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为TPS，具有SEQ ID NO: 14和SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。4. 权利要求1所述一类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为PIY，具有SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。5. 权利要求1所述一类抗人ErbB2分子不同表位双特异性抗体，为PTS，具有SEQ ID NO: 22和SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列。6. -种分离的核酸分子，编码权利要求1所述的双特异性抗体。7. -种分离的核酸分子，编码权利要求2所述的双特异性抗体TPy具有SEQ ID NO: 9 和SEQ ID NO: 11所示的核苷酸序列。8. -种分离的核酸分子，编码权利要求3所述的双特异性抗体TPS，具有SEQ ID NO: 13 和SEQ ID NO: 15所示的核苷酸序列。9. 一种分离的核酸分子，编码权利要求4所述的双特异性抗体PIY，具有SEQ ID NO: 17 和SEQ ID NO: 19所示的核苷酸序列。10. -种分离的核酸分子，编码权利要求5所述的双特异性抗体PTS，具有SEQ ID N0:21 和SEQ ID N0:23所示的核苷酸序列。11. 一种载体，含...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱卫珠，
申请(专利权)人：上海张江生物技术有限公司，上海海思太科药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。