一种适用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体制造技术

本发明专利技术提供了一种适用于免疫组化检测的重组抗PD‑L1单克隆抗体，本发明专利技术所提供的抗PD‑L1抗体，用于免疫组化检测中，与现有的商业化的用于免疫组化的抗PD‑L1单克隆抗体相比，本发明专利技术提供的抗体在相对低的工作浓度下对PD‑L1阳性组织切片染色效果信号更加强烈，从而可提高检测的灵敏度、分辨率，并且可减少抗体用量、降低检测成本。

【技术实现步骤摘要】
一种适用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体
本专利技术涉及生物医药
，更具体地，本专利技术公开了一种适用于免疫组化检测的重组抗PD-L1单克隆抗体。
技术介绍
PD-L1（Programmedcelldeath1ligand1，细胞程序性死亡配体1）也称为表面抗原分化簇274（clusterofdifferentiation274，CD274）或B7同源体1（B7homolog1，B7-H1），是大小为40kDa的跨膜蛋白，是PD-1（ProgrammedCellDeathProtein1，细胞程序性死亡蛋白）的2个配体之一。在小鼠上，PD-L1广泛表达于心、肺、胸腺、脾、肾等多种器官上，以及几乎所有的小鼠肿瘤细胞系，并在多种人类肿瘤细胞上高表达。PD-L1与PD-1结合后可以传导免疫抑制性信号、降低T细胞的增生。PD-1与PD-L1构成的“免疫检查点”（Immunecheckpoints）机制可被癌细胞利用实现免疫逃逸，因此PD-1和PD-L1成为癌症免疫治疗的靶标，并有多个抗PD-1或和抗PD-L1单克隆抗体被美国食药监局（FDA）、欧洲药品管理局（EMA）批准用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、肾细胞癌、胃癌等恶性实体瘤，如抗PD-1抗体Nivolumab、Pembrolizumab，以及抗PD-L1抗体Atezolizumab、Avelumab、Durvalumab等。在临床上，需要使用PD-1或PD-L1免疫治疗药物的恶性实体瘤患者要预先接受肿瘤组织的免疫组化（ImmunoHistoChemistry，IHC）检测，以确定肿瘤组织是否表达PD-L1分子，以及表达PD-L1的细胞比例，从而更有针对性的使用抗PD-1/PD-L1药物，辅助医生和患者合理选择治疗方式。免疫组化是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织切片内抗原（或抗体）的分布进行原位检测的技术。免疫组化所使用的组织切片包括石蜡切片和冰冻切片两种。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究。石蜡切片制作过程对组织内抗原的构象及抗原表位的暴露有一定影响，抗原在组织切片中暴露的抗原表位可能与天然状态下不同。单克隆抗体仅针对特定的抗原表位，因此，为了提高免疫组化的检测效率和一致性，需要筛选出特异性结合石蜡切片中抗原暴露表位的单克隆抗体。在免疫组化检测方法的开发过程中，因为石蜡包埋对抗原表位的影响难以预测，以及人体各种类型的正常组织和肿瘤组织中可能存在与检测抗体的非特异性结合，所以需要用大量的试验在诸多候选抗体中筛选适宜的抗体，评估候选抗体在不同组织石蜡切片的免疫组化检测中的灵敏度、特异性、准确度等指标。目前国际上临床应用的商业化PD-L1免疫组化检测方法均使用石蜡切片，这些试剂盒包括DakoPD-L1IHC22C3pharmDx、DakoPD-L1IHC28-8pharmDx、VentanaPD-L1(SP263)Assay、VentanaPD-L1(SP142)Assay，有报道称28-8、22C3和SP263检测到的PD-L1在肿瘤细胞膜表达有较高的一致性，而SP142得到的PD-L1表达水平较低（ProgrammedDeath-Ligand1ImmunohistochemistryTesting:AReviewofAnalyticalAssaysandClinicalImplementationinNon–Small-CellLungCancer.JournalofClinicalOncology35,no.34,December12017,3867-3876.）。目前还没有国产的临床用的商业化PD-L1免疫组化试剂盒。抗体（Antibody）是免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig），可分为多种类型，如IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等，其中IgG是生物医药领域常用的抗体类型。人和小鼠的IgG均由4条肽链组成，包括2条相同的重链（H链）和2条相同轻链（L链），肽链之间通过二硫键链接，根据重链结构的微小差异又可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等亚型，轻链也可分为Lamda（λ）、Kappa（κ）等亚型。每条肽链均包括可变区（V区）和恒定区（C区），轻链和重链的可变区分别称为VL和VH，恒定区分别称为CL和CH，重链的恒定区可分为三部分，分别为CH1、CH2、CH3。VL和VH各含有3个氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域，称为高变区（HVR）或互补决定区（CDR），记作HVRl（或CDRl）、HVR2（或CDR2）和HVR3（或CDR3），这几个区域决定抗体的特异性，是抗体识别及结合抗原的部位。在V区中，CDR之外的区域在氨基酸组成和排列顺序上相对保守，称为骨架区（FR）。CH1与CH2之间有铰链区，富含脯氨酸、易伸展弯曲，也是2条重链通过二硫键连接的区域，对木瓜蛋白酶和胃蛋白酶敏感。IgG经木瓜蛋白酶水解后可形成2个Fab片段和1个Fc片段，Fab片段为单价，可与抗原结合但不产生凝集反应或沉淀反应；Fc片段由CH2和CH3组成，是IgG与效应分子或细胞相互作用的部位。IgG经胃蛋白酶水解后可形成1个F(ab')2片段和多个小片段pFc'，F(ab’)2片段为双价，可同时结合两个抗原表位，与抗原结合可发生凝集反应和沉淀反应，F(ab’)2片段进一步水解可形成2个Fab'片段。Fv片段是IgG型抗体通过酶法分析后产物中最小的片段，仅包括抗原结合区，由VH和VC区域组成。
技术实现思路
本专利技术提供了一种适用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，本专利技术所提供的抗PD-L1抗体是经过优选实施例制备方法制备获得，所述抗PD-L1抗体具有较高的与PD-L1结合能力。本专利技术所提供的抗PD-L1抗体，用于免疫组化检测中，与现有的商业化的用于免疫组化的抗PD-L1单克隆抗体相比，本专利技术提供的抗体在相对低的工作浓度下对PD-L1阳性组织切片染色效果信号更加强烈，从而可提高检测的灵敏度、分辨率，并且可减少抗体用量、降低检测成本。一个优选实施例，本专利技术所提供的抗PD-L1抗体用于人体组织石蜡切片的免疫组化检测，使用0.1ug/mL的抗PD-L1抗体进行免疫组化检测，其检测结果显示，本专利技术的0.1ug/mL的抗PD-L1抗体染色结果，明显优于商业化抗PD-L1抗体在其工作浓度3ug/mL的染色结果，本专利技术所提供的抗PD-L1抗体在免疫组化检测中，灵敏度明显优于现有产品。为了提高肿瘤组织石蜡切片中PD-L1免疫组化检测的信号强度，提高检出的灵敏度、降低检测成本，本专利技术提供了一种适用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，技术方案如下：一种适用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体（编号mAPDL107），其重链CDR1、CDR2、CDR3分别具有SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10的序列；轻链CDR1、CDR2、CDR3分别具有SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQID本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗PD-L1抗体重链CDR1、CDR2、CDR3的序列分别为SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10；轻链CDR1、CDR2、CDR3的序列分别为SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗PD-L1抗体重链CDR1、CDR2、CDR3的序列分别为SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10；轻链CDR1、CDR2、CDR3的序列分别为SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7。


2.根据权利要求1所述的一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗PD-L1抗体重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:2；轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:1。


3.根据权利要求1所述的一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗PD-L1抗体重链氨基酸序列为SEQIDNO:14，轻链氨基酸序列为SEQIDNO:13。


4.根据权利要求1所述的一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗体是抗体的Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段或Fab'-SH片段，或是单链抗体、单域抗体、双特异性抗体、多特异性抗体。


5.权利要求1、4所述的一种用于免疫组化检测的抗PD-L1抗体，在检测人组织中PD-L1表达的免疫组化方法中的应用。

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【专利技术属性】
技术研发人员：侯盛，郭怀祖，徐进，
申请(专利权)人：上海张江生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31