一种口腔癌特异性检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于口腔癌检测的试剂盒。本发明专利技术提供的核酸适体，与人BPIFB2蛋白具有较好的亲和能力。利用本发明专利技术的核酸适体，可以捕获唾液中的BPIFB2蛋白，通过其含量的变化来检测口腔癌，将其制备成为相应的试剂盒，将用于口腔癌的筛查。利用本发明专利技术的试剂盒，具有高灵敏、成本低的好处。

Reagent kit for specific detection of oral cancer

The invention discloses a kit for oral cancer detection. The nucleic acid aptamer provided by the invention has good affinity with human BPIFB2 protein. By using the nucleic acid aptamer of the invention, the BPIFB2 protein in saliva can be captured, the oral cavity cancer can be detected by the change of the content of the protein, and the preparation method can be prepared into the corresponding reagent kit. The kit of the invention has the advantages of high sensitivity and low cost.

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2015年11月15日、申请号为201510775735.6、专利技术名称为“一种口腔癌特异性检测的试剂盒”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种用于检测口腔癌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
口腔癌(OralSquarmousCellCarcinomas,0SCC)是人体常见的肿瘤之一，尤其是在发展中国家印度、斯里兰卡、巴西等其发病率可以达到全部肿瘤的25％。近年来口腔癌的发病率在欧美等发达国家有明显的上升趋势，特别是发病年龄趋向年轻化。口腔鳞癌不仅发病率高，且恶性程度较高；往往造成语音、咀嚼、吞咽、面容等功能障碍和严重的面容毁损，并威胁到患者的生命；五年生存率只有60％左右。尽管近来口腔癌手术方法的不断改进和放疗、化疗的广泛应用，但口腔癌的五年生存率并没有明显的提高。导致这一状况的主要原因在于：口腔癌的发病机制不清，侵袭转移机制不明，缺乏有效的早期预防和预后判断手段。因此研究口腔癌发生和发展的分子机制，从中找到口腔癌早期预防、预后判断和治疗方法是口腔癌研究中急待解决的重大问题。现有技术已知BPIFB2基因与口腔癌的关系：BPIFB2与口腔癌具有很好的相关性，可用于制备口腔癌辅助诊断或者预后制剂，具有重要的临床应用价值。其中BPIFB2在癌旁组织中的表达水平明显低于口腔癌瘤组织和对照质粒OOcopies，而在口腔癌组织中的BPIFB2高表达，即生物信息学筛选得到的BPIFB2基因与口腔癌具有很好的相关性，可用于制备口腔癌辅助诊断或者预后制剂。因此检测BPIFB2的表达变得尤为重要。核酸适体(Aptamer,又称适配体,适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物革El标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1cEvolut1onofL1gandsbyExponent1alenr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异结合BPIFB2的核酸适体及其试剂盒。本专利技术提供的核酸适体，是序列表的序列1-15所示的单链DNA。所述核酸适体与BPIFB2蛋白具有较好的亲和能力。还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。所述核酸适体可用于制备检测BPIFB2的试剂盒。利用本专利技术的核酸适体，可以捕获中唾液中的中的BPIFB2，从而用于相关口腔癌筛查。利用本专利技术的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本专利技术具有很高的应用价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1BPIFB2蛋白的获得将NP_079503所示的BPIFB2基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，获得了相应的目的多肽蛋白。实施例2核酸适体的筛选和制备设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括41个核苷酸的随机核酸文库如下：5‘-ACCTGATGCCATGCATCGCA(N41)CTAGCCAGCCTTTGACATCA-3’；N41代表41个随机核苷酸。将单链DNA文库扩增为双链DNA,产物经2％琼脂糖凝胶电泳并切胶回收纯化；以回收的双链DNA为模板，体外转录出单链RNA随机文库，转录产物经PAGE纯化。75μgRNA文库经硝酸纤维素膜反筛去除与膜结合的RNA分子，然后与2ugBPIFB2蛋白，37℃孵育30min，反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜；然后将滤膜剪碎，置于洗脱缓冲液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸铵，l.5mmol/LEDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，离心，取上清，无水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1DEPC水中；以RNA为模板RT-PCR扩增双链DNA，体外转录出RNA文库用于下一轮筛选；每轮筛选过程中RT-PCR得到双链DNA文库，以该双链DNA为模板体外转录出RNA适配子库，筛选共进行11轮。得到了16个适配子，其序列分别为SEQIDNO:1-16所示。具体序列如下所示：BPIFB2-1：ACCTGATGCCATGCATCGCATCACACGATCATCACACCGCTCCGCCTTCCAACTACCGCTCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-2：ACCTGATGCCATGCATCGCACACCTCCACCCTTCGCAACTACCTCTCTTCCTGTAACTATTCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-3：ACCTGATGCCATGCATCGCATCTCATAACAAATCTTCATAATCTTCTATAACACTGTCAATCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-4：ACCTGATGCCATGCATCGCACATCTATATAGAATATATTCAATCCTCTCTCTTATATGCATCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-5：ACCTGATGCCATGCATCGCACTATCAACGACTCTCACGCAACGCTCTTCTTACTACATATACTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-6：ACCTGATGCCATGCATCGCACCATTCATATCACGAACACCCATTTATACTATATACTACCACTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-7：ACCTGATGCCATGCATCGCACGCACTAATATCCTTCATCCCTACTAATAACTCTTTTAACCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-8：ACCTGATGCCATGCATCGCACACACTCATATTTATACACCAATATCATCTCACTCTATCTCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-9：ACCTGATGCCATGCATCGCAAACCAAGAATGTCTTACGACATCTCGCCTACTATCCTATATCTAGCCAGCCTTTGACAT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于口腔癌检测的试剂盒，其含有能特异性与BPIFB2蛋白结合的核酸适体。

【技术特征摘要】
1.一种用于口腔癌检测的试剂盒，其含有能特异性与BPIFB2蛋白结合的核酸适体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈博，
申请(专利权)人：陈博，
类型：发明
国别省市：江西;36