一种子宫内膜癌特异性检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种特异检测子宫内膜癌的试剂盒。本发明专利技术提供的核酸适体，与人Cyclophilin A 蛋白具有较好的亲和能力。利用本发明专利技术的核酸适体，可以捕获血液中的Cyclophilin A 蛋白，通过其含量的变化来检测子宫内膜癌，将其制备成为相应的试剂盒，将用于子宫内膜癌的筛查。利用本发明专利技术的试剂盒，具有高灵敏、成本低的好处。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测子宫内膜癌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
子宫内膜癌作为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性生殖道恶性肿瘤的20-30％，在某些欧美国家已居女性生殖道恶性肿瘤首位，严重威胁妇女健康。随着社会发展和人类平均寿命的延长，内膜癌发病率逐年上升并伴有年轻化趋势。子宫内膜癌如果能做到早期诊断，合理治疗，其预后一般较好。子宫内膜癌的主要临床表现为不规则阴道流血，与卵巢癌等其他肿瘤不同，临床诊断主要依靠诊断性刮宫，但哺乳期或浸润型子宫内膜癌的患者，其子宫壁薄弱，刮宫时可能会造成穿孔，给患者造成伤害。Cyclophilin A蛋白(CYPA)又称亲环素A(Gene Bank No.NP_066953)，位于胞质及胞核，具有肽酰脯氨酰顺反式异构酶活性，参与蛋白质折叠、装配与运输；在细胞内与环孢素A结合，抑制T细胞活化途径，表现出免疫抑制作用，此外还参与氧化应激诱导及胆固醇代谢过程，并发挥细胞因子的功能。现有技术已经报道，通过检测人亲环素A表达水平来早期诊断子宫内膜癌。因此，检测人亲环素A变得尤为重要。核酸适体(Aptamer,又称适配体,适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物质的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1c Evolut1on of L1gands by Exponent1al enr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异结合CYPA的核酸适体及其试剂盒。本专利技术提供的核酸适体，是序列表的序列1-14所示的单链DNA。所述核酸适体与CYPA蛋白具有较好的亲和能力。还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。所述核酸适体可用于制备检测CYPA的试剂盒。利用本专利技术的核酸适体，可以捕获中唾液中的中的CYPA，从而用于相关子宫内膜癌筛查。利用本专利技术的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本专利技术具有很高的应用价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1CYPA蛋白的获得将Genbank：NP_066953所示的CYPA基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，获得了相应的目的多肽蛋白。实施例2核酸适体的筛选和制备设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括个核苷酸的随机核酸文库如下：5‘-ATCGTCACCATGGATACATG(N39)TTGCACAATTGGACAGTTAC-3’；N39代表39个随机核苷酸。将单链DNA文库扩增为双链DNA,产物经2％琼脂糖凝胶电泳并切胶回收纯化；以回收的双链DNA为模板，体外转录出单链RNA随机文库，转录产物经PAGE纯化。75μg RNA文库经硝酸纤维素膜反筛去除与膜结合的RNA分子，然后与2ug
CYPA蛋白，37℃孵育30min，反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜；然后将滤膜剪碎，置于洗脱缓冲液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸铵，l.5mmol/L EDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，离心，取上清，无水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1DEPC水中；以RNA为模板RT-PCR扩增双链DNA，体外转录出RNA文库用于下一轮筛选；每轮筛选过程中RT-PCR得到双链DNA文库，以该双链DNA为模板体外转录出RNA适配子库，筛选共进行11轮。得到了14个适配子，其序列分别为SEQ ID NO:1-14所示。具体序列如下所示：CYPA-1:ATCGTCACCATGGATACATGACTTAACCACGCTCCATTCTATCAATTAACCCGCACTA ATTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-2:ATCGTCACCATGGATACATGATATATTAACCCTCACTAATCTCCTCATCCTACTATAA GTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-3:ATCGTCACCATGGATACATGCACTATATTCACGCTAAACCTTTCTTCCTCGCATACCT ATTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-4:ATCGTCACCATGGATACATGCTATTCCCTTTCCGCTACAATCCAATAATCACGCAACA CTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-5:ATCGTCACCATGGATACATGTTATTCCTGTCTTCACACCGACTTCACATATATCTTCA ATTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-6:ATCGTCACCATGGATACATGCTACCGCTTCCACTCTCCTTATCCATCTTACATTCCCT C TTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-7:ATCGTCACCATGGATACATGCATACTACAAACCTCCTATAATCTGTTATCAACACTAA TTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-8:ATCGTCACCATGGATACATGTATTTTCTTCCACTCCCATACTTAGAATAAGAATCCAC TTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-9:ATCGTCACCATGGATACATGTATGACAATTATTGCCCACTAGATACTTCCACGCAAAT CTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-10:ATCGTCACCATGGATACATGACTTATCATATCCACCTTATCACATCATCCCCACTTC CT TTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-11:ATCGTCACCATGGATACATGTCGTTCTCACGAATTCACACACTAACTCCCACACATA CATTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-12:ATCGTCACCATGGATACATGCACTATATCTTACTATCATTTAATCCTTTCACTCCCA ACTTGCACAATTGGACAGTTACCYPA-13:ATCGTCACCATGGATACATGTCACTCCGCCGCACCACTAATTCACGCTAAACTTATC TTTTGCACAATTGGACAGTTACC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于子宫内膜癌检测的试剂盒，其含有能特异性与CYPA蛋白特异性结合的核酸适体。

【技术特征摘要】
1.一种用于子宫内膜癌检测的试剂盒，其含有能特异性与CYPA蛋白特异性结合的核酸适体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李静，
申请(专利权)人：李静，
类型：发明
国别省市：河南;41