本发明专利技术公开了一种用于口腔癌检测的试剂盒。本发明专利技术提供的核酸适体，与人BPIFB2蛋白具有较好的亲和能力。利用本发明专利技术的核酸适体，可以捕获唾液中的BPIFB2蛋白，通过其含量的变化来检测口腔癌，将其制备成为相应的试剂盒，将用于口腔癌的筛查。利用本发明专利技术的试剂盒，具有高灵敏、成本低的好处。
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2015年11月15日、申请号为201510775735.6、专利技术名称为“一种口腔癌特异性检测的试剂盒”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种用于检测口腔癌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
口腔癌(Oral Squarmous Cell Carcinomas,0SCC)是人体常见的肿瘤之一，尤其是在发展中国家印度、斯里兰卡、巴西等其发病率可以达到全部肿瘤的25％。近年来口腔癌的发病率在欧美等发达国家有明显的上升趋势，特别是发病年龄趋向年轻化。口腔鳞癌不仅发病率高，且恶性程度较高；往往造成语音、咀嚼、吞咽、面容等功能障碍和严重的面容毁损，并威胁到患者的生命；五年生存率只有60％左右。尽管近来口腔癌手术方法的不断改进和放疗、化疗的广泛应用，但口腔癌的五年生存率并没有明显的提高。导致这一状况的主要原因在于：口腔癌的发病机制不清，侵袭转移机制不明，缺乏有效的早期预防和预后判断手段。因此研究口腔癌发生和发展的分子机制，从中找到口腔癌早期预防、预后判断和治疗方法是口腔癌研究中急待解决的重大问题。现有技术已知BPIFB2基因与口腔癌的关系：BPIFB2与口腔癌具有很好的相关性，可用于制备口腔癌辅助诊断或者预后制剂，具有重要的临床应用价值。其中BPIFB2在癌旁组织中的表达水平明显低于口腔癌瘤组织和对照质粒OOcopies，而在口腔癌组织中的BPIFB2高表达，即生物信息学筛选得到的BPIFB2基因与口腔癌具有很好的相关性，可用于制备口腔癌辅助诊断或者预后制剂。因此检测BPIFB2的表达变得尤为重要。核酸适体(Aptamer,又称适配体,适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物革El标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systematlc Evolutlon of Llgands by Exponentlal enrlchment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与
抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异结合BPIFB2的核酸适体及其试剂盒。本专利技术提供的核酸适体，是序列表的序列1-15所示的单链DNA。所述核酸适体与BPIFB2蛋白具有较好的亲和能力。还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。所述核酸适体可用于制备检测BPIFB2的试剂盒。利用本专利技术的核酸适体，可以捕获中唾液中的中的BPIFB2，从而用于相关口腔癌筛查。利用本专利技术的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本专利技术具有很高的应用价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1 BPIFB2蛋白的获得将NP_079503所示的BPIFB2基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，
获得了相应的目的多肽蛋白。实施例2核酸适体的筛选和制备设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括41个核苷酸的随机核酸文库如下：5‘-ACCTGATGCCATGCATCGCA(N41)CTAGCCAGCCTTTGACATCA-3’；N41代表41个随机核苷酸。将单链DNA文库扩增为双链DNA,产物经2％琼脂糖凝胶电泳并切胶回收纯化；以回收的双链DNA为模板，体外转录出单链RNA随机文库，转录产物经PAGE纯化。75μg RNA文库经硝酸纤维素膜反筛去除与膜结合的RNA分子，然后与2ug BPIFB2蛋白，37℃孵育30min，反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜；然后将滤膜剪碎，置于洗脱缓冲液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸铵，l.5mmol/L EDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，离心，取上清，无水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1 DEPC水中；以RNA为模板RT-PCR扩增双链DNA，体外转录出RNA文库用于下一轮筛选；每轮筛选过程中RT-PCR得到双链DNA文库，以该双链DNA为模板体外转录出RNA适配子库，筛选共进行11轮。得到了16个适配子，其序列分别为SEQ ID NO:1-16所示。具体序列如下所示：BPIFB2-1：ACCTGATGCCATGCATCGCATCACACGATCATCACACCGCTCCGCCTTCCAACTACCGCTCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-2：ACCTGATGCCATGCATCGCACACCTCCACCCTTCGCAACTACCTCTCTTCCTGTAACTATTCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-3：ACCTGATGCCATGCATCGCATCTCATAACAAATCTTCATAATCTTCTATAACACTGTCAATCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-4：ACCTGATGCCATGCATCGCACATCTATATAGAATATATTCAATCCTCTCTCTTATATGCATCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-5：ACCTGATGCCATGCATCGCACTATCAACGACTCTCACGCAACGCTCTTCTTACTACATATA
CTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-6：ACCTGATGCCATGCATCGCACCATTCATATCACGAACACCCATTTATACTATATACTACCACTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-7：ACCTGATGCCATGCATCGCACGCACTAATATCCTTCATCCCTACTAATAACTCTTTTAACCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-8：ACCTGATGCCATGCATCGCACACACTCATATTTATACACCAATATCATCTCACTCTATCTCCTAGCCAGCCTTTGACATCABPIFB2-9：ACCTGATGCCATGCATCGCAAACCAAGAATGTCTTACGACATCTCGCCTACTATCCTATATCTAGCCAG本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于口腔癌检测的试剂盒，其含有能特异性与BPIFB2蛋白结合的核酸适体。
【技术特征摘要】
1.一种用于口腔癌检测的试剂盒，其含有能特异性与BPIFB2蛋白结合的核酸适体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈博，
申请(专利权)人：陈博，
类型：发明
国别省市：江西;36
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