一种唇癌特异性检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性检测唇癌的试剂盒。本发明专利技术提供的核酸适体，与人富含半脫氨酸分泌蛋白1具有较好的亲和能力。利用本发明专利技术的核酸适体，可以捕获唾液中的富含半脫氨酸分泌蛋白1蛋白，通过其含量的变化来检测唇癌，将其制备成为相应的试剂盒，将用于唇癌的筛查。利用本发明专利技术的试剂盒，具有高灵敏、成本低的好处。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测唇癌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
唇癌是指发生于上下口唇的恶性肿瘤为口腔常见恶性肿瘤之一，在口腔癌中占第立位，占全身恶性肿瘤的0.1％～0.5％，占口腔恶性肿瘤的7.1％～15.0％，欧美国家唇癌患者较多，占口腔癌的20％～30％。一般下唇比上唇易受累，约90％～95％发生在下唇红缘部，而且W下唇的外1/3处为多见。男性患者居多，男女之比为7:1。高发年龄为50～70岁。唇癌绝大多数为高分化之鱗状细胞癌，多在良性费生物的病变基础上发生，其生长速度较慢，预后较好，一般5年生存率为70％W上，本病的病因可能与局部长期受异物刺激，强烈的紫外线照射有关。口唇上皮角化、白斑、巧费、肉芽肿及裂口等长期不愈，亦可导致癌变。现有技术已知，唾液富含半脫氨酸分泌蛋白1浓度为10-40ng即可诊断为唇癌。因此，检测半脫氨酸分泌蛋白1的浓度变得极为重要。核酸适体(Aptamer,又称适配体,适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物革El标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1c Evolut1on of L1gands by Exponent1al enr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异结合CRISP1的核酸适体及其试剂盒。本专利技术提供的核酸适体，是序列表的序列1-15所示的单链DNA。所述核酸适体与CRISP1蛋白具有较好的亲和能力。还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。所述核酸适体可用于制备检测CRISP1的试剂盒。利用本专利技术的核酸适体，可以捕获中唾液中的中的CRISP1，从而用于相关口腔癌筛查。利用本专利技术的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本专利技术具有很高的应用价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1、CRISP1蛋白的获得将Genbank：EAX04350所示的CRISP1基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，获得了相应的目的多肽蛋白。实施例2核酸适体的筛选和制备设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括41个核苷酸的随机核酸文库如下：5‘-TGGCACCTACGATCTAAGGCA(N41)GGACTACCAATGCAACGTCAC-3’；N41代表41个随机核苷酸。将单链DNA文库扩增为双链DNA,产物经2％琼脂糖凝胶电泳并切胶回收纯化；以回收的双链DNA为模板，体外转录出单链RNA随机文库，转录产物经PAGE纯化。75μg RNA文库经硝酸纤维素膜反筛去除与膜结合的RNA分子，然后与2ug CRISP1蛋白，37℃孵育30min，反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜；然后将滤膜剪碎，置于洗脱缓冲液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸铵，l.5mmol/L EDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，离心，取上清，无水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1 DEPC水中；以RNA为模板RT-PCR扩增双链DNA，体外转录出RNA文库用于下一轮筛选；每轮筛选过程中RT-PCR得到双链DNA文库，以该双链DNA为模板体外转录出RNA适配子库，筛选共进行12轮。得到了15个适配子，其序列分别为SEQ ID NO:1-15所示。具体序列如下所示：CRISP1-1：TGGCACCTACGATCTAAGGCAATCCCATATATGTTCCACACACTCGCAACTTATCCGCTACAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-2：TGGCACCTACGATCTAAGGCATTCCGCCATAAATAAGATTCACATCACGACATCGATCACACGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-3：TGGCACCTACGATCTAAGGCACTTAATCAACATATCTCTTCTGTATTCTCTCCACGCATACAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-4：TGGCACCTACGATCTAAGGCAACGTCTCCAATCCGCACTTATAATTATGTTCTTACCTAAGAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-5：TGGCACCTACGATCTAAGGCACGCTCATCACCATCTCCTACCTATATACATCACCTTCGCCTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-6：TGGCACCTACGATCTAAGGCACATATCATCCTCCATACACGACCAACCACTCCGTCTTCACTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-7：TGGCACCTACGATCTAAGGCAAACAAACACTCTCGCACATTACCTTATTTATCAAGAATATAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-8：TGGCACCTACGATCTAAGGCACCGCTTATCTACACTAAATACAATTTCCTCCTCACCCTCCAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-9：TGGCACCTACGATCTAAGGCACACGCCTCCAATATCAACTTAATAATACACCACTAATTTCTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-10：TGGCACCTACGATCTAAGGCACACACGCCACTTATACAACAATCCAACCGCCTACCACTACTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-11：TGGCACCTACGATCTAAGGCATAGCATCACTACTCGCTATTTCCTATAATCCTAGCCTTATAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-12：TGGCACCTACGATCTAAGGCACTAGAAACTCCAACACATACACACACAGACCCGCTCCATA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于唇癌检测的试剂盒，其含有能特异性与CRISP1蛋白特异性结合的核酸适体。

【技术特征摘要】
1.一种用于唇癌检测的试剂盒，其含有能特异性与CRISP1蛋白特异性结合的核酸适体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈博，
申请(专利权)人：陈博，
类型：发明
国别省市：江西;36