一种CEA阳性肿瘤特异性树突状细胞疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫学领域,具体公开了一种腺病毒载体介导癌胚抗原CEA抗原肽基因转染制备树突状细胞肿瘤疫苗的方法，a.构建载有CEA抗原肽基因的穿梭载体质粒，并利用293细胞包装成载有CEA抗原肽基因的重组腺病毒AD-CEA,b.DC细胞的分离,培养和鉴定,c.利用重组腺病毒AD-CEA转染DC细胞，获得AdCEA-DC疫苗,c.AdCEA-DC疫苗的细胞学实验。本发明专利技术利用腺病毒作为基因载体，将CEA抗原肽基因高效转入DC细胞，通过内源性内持续刺激获得了具有高效呈递癌胚抗原CEA抗原肽能力的DC疫苗，并可以诱导特异性的CTL，解决了现有技术获得的DC疫苗呈递抗原能力较弱，特异性不强的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种CEA阳性肿瘤特异性树突状细胞疫苗的制备方法
本专利技术涉及免疫学领域。具体涉及了一种腺病毒载体介导癌胚抗原CEA抗原肽基因转染制备CEA阳性肿瘤特异性树突状细胞疫苗的方法。
技术介绍
胃癌和大肠癌是目前我国发病率很高的恶性肿瘤，胃癌占消化道恶性肿瘤的第一位，大肠癌发病率已经上升到第四位。目前大肠癌，胃癌首选的有效治疗方法仍是手术切除，但切除率较低，复发转移较高。术后综合治疗以放疗，化疗为主，但毒副作用大，患者往往难以接受。因此，胃癌和大肠癌预后欠佳，需要寻找新的更有效的治疗方法。随着科学的不断进展，肿瘤的生物治疗异军突起，已经成了继手术，放疗，化疗后的第四大肿瘤治疗技术，在改善患者生存质量，降低复发率方面的重要作用已经得到越来越多的认可和重视。树突细胞(dendritic cells, DC)是人体内功能最强大的专职抗原呈递细胞(antigen process cells, APC),能诱导出抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)反应,在人体抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用。DC细胞表面的MHC分子可以和肿瘤抗原结合，然后递呈给本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：a. 构建载有癌胚抗原CEA抗原肽基因的重组腺病毒AD‑CEA；b. 分离和培养DC细胞；c. 采用重组腺病毒AD‑CEA转染DC细胞，获得CEA阳性肿瘤特异性DC疫苗AdCEA‑DC。

【技术特征摘要】
1.一种CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤: a.构建载有癌胚抗原CEA抗原肽基因的重组腺病毒AD-CEA； b.分离和培养DC细胞； c.采用重组腺病毒AD-CEA转染DC细胞，获得CEA阳性肿瘤特异性DC疫苗AdCEA_DC。2.根据权利要求1所述的CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤(a)包括如下工艺步骤: al:将载有癌胚抗原CEA抗原肽基因的穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染293细胞，培养至出毒，得到原代毒种； a2:用原代毒种感染293细胞，待2-3天细胞病变后，进行浓缩纯化，获得扩增后的重组腺病毒AD-CEA 。3.根据权利要求1所述的CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤(b)中的DC细胞包括下列细胞:外周血单个核细胞培养的DC细胞，骨髓来源的DC细胞，脐带血来源的DC细胞。4.根据权利要求1所述的CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗的制备方法，其特征在于所述的步骤(c)包括如下工艺步骤: cl:采用步骤(a)中制备的重组腺病毒AD-CEA病毒液感染步骤(b)中制备的DC细胞； c2:采用含有GM-GSF和IL-4的完全培养液，于37°C，5%C02的培养箱中继续培养步骤(Cl)中感染后的DC细胞； c3:到第5天，在步骤(c2)中培养的DC细胞中加入TNF-α，继续培养3天，第8天获得的CEA阳性肿瘤特异性DC细胞疫苗AdCEA-DC，光镜下形态学鉴定，并用流式细胞仪检测细胞表型 CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：付建喜，叶永清，苏国新，
申请(专利权)人：上海柯莱逊生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31