经修饰的抗原结合多肽构建体及其用途制造技术

本发明专利技术提供可包含第一异源二聚体和第二异源二聚体的异源二聚体对，其中每个异源二聚体包含免疫球蛋白重链或其片段和免疫球蛋白轻链或其片段。所述异源二聚体中的至少一个可包含CH1和/或CL结构域中的一个或多个氨基酸修饰，VH和/或VL结构域中的一个或多个氨基酸修饰，或它们的组合。所述经修饰的氨基酸可以是所述轻链和重链之间的界面的一部分，并且通常修饰为在每个重链和所需的轻链之间产生优先配对，使得当所述异源二聚体对的所述两条重链和两条轻链在细胞中共表达时，所述第一异源二聚体的所述重链优先地与所述轻链中的一者而非另一者配对。同样，所述第二异源二聚体的所述重链通常优先地与第二轻链而非第一轻链配对。

Modified antigen binding polypeptide constructs and uses thereof

The present invention provides a heterologous two polymer pair comprising a first heterologous two polymer and a heterologous two polymer, each of which comprises a immunoglobulin heavy chain or a fragment thereof, and an immunoglobulin light chain or fragment thereof comprising the. At least one of the heterologous two polymers may comprise one or more amino acid modifications in the CH1 and / or CL domains, one or more amino acid modifications in the VH and / or VL domains, or combinations thereof. The modified amino acid can be a part of the light chain and heavy chain of the interface, and usually modified to produce preferential pairing between each heavy chain and light chain required, so that when the heterologous two monomer on the two heavy chains and two light chains in the cell the expression, one of the first two heterologous dimers of the heavy chain and the light chain preferentially in rather than another pair. Similarly, the second heterologous dimers with two of the heavy chain and light chain is usually preferred instead of the first pair of light chain.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关专利申请的交叉引用本专利申请要求提交于2014年5月28日的美国临时申请No.62/003,663和提交于2015年4月28日的美国临时申请No.62/154,055的优先权，这些专利申请以引用的方式整体并入本文用于所有目的。本专利申请涉及提交于2013年11月28日的PCT/CA2013/050914、提交于2012年11月28日的美国临时申请No.61/730,906、提交于2013年2月6日的美国临时申请No.61/761,641、提交于2013年5月2日的美国临时申请No.61/818,874和提交于2013年8月23日的美国临时申请No.61/869,200，这些专利申请中的每一个的全部公开内容据此以引用的方式整体并入用于所有目的。序列表本专利申请包含以ASCII格式的电子版本提交的序列表，并且据此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本创建于2015年5月29日，命名为97993-945204(000110PC)_SL.txt，大小为27,012字节。背景双特异性抗体能够结合至两个不同的表位。该表位可在相同的抗原上，或每个表位可在不同的抗原上。双特异性抗体的该特征使其成为用于各种治疗应用的引人注目的工具，其中该抗体具有在疾病治疗中靶向或募集超过一个分子的治疗有益效果。形成双特异性抗体的一种方法将涉及两条独特的抗体重链和两条独特的抗体轻链的同时表达。正确形成类似于野生型的双特异性抗体形式仍然是挑战，因为抗体重链涉及以相对混杂的方式结合抗体轻链。作为该混杂配对的结果，两条抗体重链和两条抗体轻链的同时表达自然地导致重链-轻链配对混杂。该错配仍然是制备双特异性治疗剂的主要挑战，其中均一配对是良好工艺和生物学效力的基本要求。多种双特异性抗体制备方法已有所描述，其中特定的抗体轻链或片段与特定的抗体重链或片段配对。解决该问题的各种方法的评述可见于Klein等，(2012)mAbs4：6，1-11。国际专利申请No.PCT/EP2011/056388(WO2011/131746)描述了用于制备异源二聚体蛋白的体外方法，其中将不对称突变引入两个单特异性起始蛋白的CH3区，以便在还原条件下孵育时驱动两个单特异性IgG4或IgG4样抗体之间的定向“Fab臂”或“半分子”交换。Schaefer等(RocheDiagnosticsGmbH)描述了在不使用人工接头的情况下将来源于两种现有抗体的两条重链和两条轻链组装到人二价双特异性IgG抗体的方法(PNAS(2011)108(27)：11187-11192)。该方法涉及交换双特异性抗体的一半的抗原结合片段(Fab)内的重链和轻链结构域。Strop等(Rinat-PfizerInc.)描述了通过单独表达和纯化两种所关注的抗体，然后在指定的氧化还原条件下将它们混合在一起来制备稳定双特异性抗体的方法(J.Mol.Biol.(2012)420：204-19)。Zhu等(Genentech)工程改造了双抗体构建体(由完全缺乏恒定结构域的可变结构域抗体片段构成)的VL/VH界面中的突变，并制备了异源二聚体双抗体(ProteinScience(1997)6：781-788)。相似地，Igawa等(Chugai)也工程改造了单链双抗体的VL/VH界面中的突变以有助于双抗体的选择性表达和抑制双抗体的构造异构化(ProteinEngineering，Design&Selection(2010)23：667-677)。美国专利公开No.2009/0182127(NovoNordisk，Inc.)描述了通过修饰轻链-重链对的Fc界面和CH1：CL界面处的氨基酸残基来制备双特异性抗体，该修饰降低了一对的轻链与另一对的重链相互作用的能力。美国专利公开No.2014/0370020(Chugai)描述了通过用带电氨基酸置换CH1和CL区之间的界面上存在的氨基酸来调节抗体这些区之间的缔合。概述本文描述了包含至少第一异源二聚体和第二异源二聚体的分离的抗原结合多肽构建体，该第一异源二聚体包含第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和第一免疫球蛋白轻链多肽序列(L1)；并且第二异源二聚体包含第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和第二免疫球蛋白轻链多肽序列(L2)，其中第一异源二聚体的H1或L1序列中的至少一个不同于第二异源二聚体的对应H2或L2序列，并且其中H1和H2各自包含至少重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域(CH1结构域)；L1和L2各自包含至少轻链可变结构域(VL结构域)和轻链恒定结构域(CL)；并且H1、H2、L1和L2中的至少一个包含至少一个恒定结构域和/或至少一个可变结构域的至少一个氨基酸修饰，其中与L2相比H1优先地与L1配对，且与L1相比H2优先地与L2配对。在一些方面，该构建体还包含异源二聚体Fc，该Fc包含至少两个CH3序列，其中该Fc通过或不通过一个或多个接头偶联到第一异源二聚体和第二异源二聚体，其中二聚化CH3序列具有约68℃或更高的熔融温度(Tm)(如差示扫描量热法(DSC)所测定)，并且其中该构建体是双特异性的。在一些方面，至少一个氨基酸修饰选自表格或实施例所示的至少一个氨基酸修饰。在一些方面，当H1、H2、L1和L2在细胞或哺乳动物细胞中共表达时，或当H1、H2、L1和L2在无细胞表达系统中共表达时，或当H1、H2、L1和L2共生成时，或当H1、H2、L1和L2经由氧化还原生成方法共生成时，与L2相比H1优先地与L1配对，且与L1相比H2优先地与L2配对。在一些方面，H1、H2、L1和L2中的至少一个包含VH和/或VL结构域的至少一个氨基酸修饰和CH1和/或CL结构域的至少一个氨基酸修饰，使得与L2相比H1优先地与L1配对，和/或与L1相比H2优先地与L2配对。在一些方面，如果H1包含CH1结构域中的至少一个氨基酸修饰，则L1和L2中的至少一个包含CL结构域中的至少一个氨基酸修饰；和/或如果H1包含VH结构域中的至少一个氨基酸修饰，则L1和L2中的至少一个包含VL结构域中的至少一个氨基酸修饰。在一些方面，H1、L1、H2和/或L2包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变。在一些方面，H1、H2、L1和L2中的至少一个包含至少一个恒定结构域和/或至少一个可变结构域的至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸修饰。在一些方面，当L1和L2二者与H1和H2中的至少一个共表达时，H1-L1和H2-L2异源二聚体对中的至少一个的相对配对与各自对应的H1-L2或H2-L1异源二聚体对之比大于50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，并且其中经修饰的H1-L1或H2-L2异源二聚体对的相对配对大于无至少一个氨基酸修饰的对应的H1-L1或H本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含至少第一异源二聚体和第二异源二聚体的分离的抗原结合多肽构建体，所述第一异源二聚体包含第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和第一免疫球蛋白轻链多肽序列(L1)；并且所述第二异源二聚体包含第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和第二免疫球蛋白轻链多肽序列(L2)，其中所述第一异源二聚体的所述H1或L1序列中的至少一个不同于所述第二异源二聚体的所述对应的H2或L2序列，并且其中H1和H2各自包含至少重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域(CH1结构域)；L1和L2各自包含至少轻链可变结构域(VL结构域)和轻链恒定结构域(CL结构域)；并且H1、H2、L1和L2中的至少一个包含至少一个氨基酸修饰，其中与L2相比H1优先地与L1配对，并且与L1相比H2优先地与L2配对；或H1、H2、L1和L2包含一组氨基酸修饰，其中与L2相比H1优先地与L1配对，并且与L1相比H2优先地与L2配对；其中所述Fab区的热稳定性通过所述第一和第二异源二聚体中的至少一个的熔融温度(Tm)测定，所述熔融温度在无所述至少一个氨基酸修饰或氨基酸修饰组的所述对应的异源二聚体的所述Tm的约0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10℃之内。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.28 US 62/154,0551.一种包含至少第一异源二聚体和第二异源二聚体的分离的抗原结合多肽构建体，所述第一异源二聚体包含第一免疫球蛋白重链多肽序列(H1)和第一免疫球蛋白轻链多肽序列(L1)；并且所述第二异源二聚体包含第二免疫球蛋白重链多肽序列(H2)和第二免疫球蛋白轻链多肽序列(L2)，其中所述第一异源二聚体的所述H1或L1序列中的至少一个不同于所述第二异源二聚体的所述对应的H2或L2序列，并且其中H1和H2各自包含至少重链可变结构域(VH结构域)和重链恒定结构域(CH1结构域)；L1和L2各自包含至少轻链可变结构域(VL结构域)和轻链恒定结构域(CL结构域)；并且H1、H2、L1和L2中的至少一个包含至少一个氨基酸修饰，其中与L2相比H1优先地与L1配对，并且与L1相比H2优先地与L2配对；或H1、H2、L1和L2包含一组氨基酸修饰，其中与L2相比H1优先地与L1配对，并且与L1相比H2优先地与L2配对；其中所述Fab区的热稳定性通过所述第一和第二异源二聚体中的至少一个的熔融温度(Tm)测定，所述熔融温度在无所述至少一个氨基酸修饰或氨基酸修饰组的所述对应的异源二聚体的所述Tm的约0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10℃之内。2.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L124、K145、D146、Q179和S186处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q124、S131、V133、Q160、S176、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。3.根据权利要求2所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L124R、L124E、K145M、K145T、D146N、Q179E、Q179K、S186R和S186K的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含选自Q124E、S131R、S131K、V133G、Q160E、S176R、S176D、T178D、T178E和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。4.根据权利要求3所述的构建体，其中：H1包含选自L124E、K145M、K145T和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自S131R、S131K、V133G和S176R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L124R、D146N、Q179K、S186R和S186K或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q124E、V133G、Q160E、S176D、T178D、T178E和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。5.根据权利要求4所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰S131K、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和S186R；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178D。6.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L124、L143、K145、D146、Q179和S186处的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含Q124、V133、Q160、S176、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。7.根据权利要求6所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L124E、L124R、L143E、L143D、K145T、K145M、D146N、Q179K、S186R和S186K的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q124K、Q124E、V133G、Q160K、S176R、S176D、T178E、T178K、T178R、T178D和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。8.根据权利要求7所述的构建体，其中：H1包含选自L124E、L143E、L143D、K145T和K145M或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自Q124K、V133G、Q160K、S176R、T178K和T178R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L124R、D146N、Q179K、S186R和S186K或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q124E、V133G、S176D、T178E、T178D和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。9.根据权利要求8所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E、L143E和K145T；L1包含氨基酸修饰Q124K、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和Q179K；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178E。10.根据权利要求8所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E、L143E和K145T；L1包含氨基酸修饰Q124K、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和S186R；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178D。11.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含Q39、L45、L124、L143、F122和H172处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q38、P44、Q124、S131、V133、N137、S174、S176和T178处的至少一个或一组氨基酸修饰。12.根据权利要求11所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自Q39E、Q39R、L45P、F122C、L124E、L124R、L143F、H172T和H172R的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q38R、Q38E、P44F、Q124C、S131T、S131E、V133G、N137K、S174R、S176R、S176K、S176D、T178Y和T178D的至少一个或一组氨基酸修饰。13.根据权利要求12所述的构建体，其中H1包含选自Q39E、L45P、F122C、L124E、L143F、H172T和H172R或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自Q38R、P44F、Q124C、S131T、V133G、N137K、S174R、S176R、S176K和T178Y或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自Q39R、L124R和H172R或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q38E、S131E、V133G、S176D和T178D或它们的组合的氨基酸修饰。14.根据权利要求13所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰Q39E和L124E；L1包含氨基酸修饰Q38R、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰Q39R和L124R；并且L2包含氨基酸修饰Q38E、V133G和S176D。15.根据权利要求13所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L45P和L124E；L1包含氨基酸修饰P44F、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178D。16.根据权利要求13所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E和L143F；L1包含氨基酸修饰V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178D。17.根据权利要求13所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰F122C和L124E；L1包含氨基酸修饰Q124C、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R；并且L2包含氨基酸修饰V133G和S176D。18.根据权利要求13所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E和H172T；L1包含氨基酸修饰V133G、N137K、S174R和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和H172R；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S176D和T178D。19.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L124、A125、H172和K228处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含S121、V133、N137、S174、S176和T178处的至少一个或一组氨基酸修饰。20.根据权利要求19所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L124E、L124R、A125S、A125R、H172R、H172T和K228D至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自S121K、V133G、N137K、S174R、S176K、S176R、S176D和T178D的至少一个或一组氨基酸修饰。21.根据权利要求20所述的构建体，其中H1包含选自L124E、A125S、H172R和K228D或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自S121K、V133G和S176R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L124R、A125R和H172T或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自V133G、N137K、S174R、S176D和T178D或它们的组合的氨基酸修饰。22.根据权利要求21所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E和K228D；L1包含氨基酸修饰S121K、V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和A125R；并且L2包含氨基酸修饰V133G和S176D。23.根据权利要求21所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E和H172R；L1包含氨基酸修饰V133G和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R和H172T；并且L2包含氨基酸修饰V133G、S174R和S176D。24.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L124、A139和V190处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含F116、V133、L135和S176处的至少一个或一组氨基酸修饰。25.根据权利要求24所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L124E、L124R、A139W、A139G和V190A的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自F116A、V133G、L135V、L135W、S176R和S176D的至少一个或一组氨基酸修饰。26.根据权利要求25所述的构建体，其中H1包含选自L124E和A139W或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自F116A、V133G、L135V和S176R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L124R、A139G和V190A或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自V133G、L135W和S176D或它们的组合的氨基酸修饰。27.根据权利要求26所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124E和A139W；L1包含氨基酸修饰F116A、V133G、L135V和S176R；H2包含氨基酸修饰L124R、A139G和V190A；并且L2包含氨基酸修饰V133G、L135W和S176D。28.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含Q39、L45、K145、H172、Q179和S186处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q38、P44、Q124、S131、Q160、T180和C214处的至少一个或一组氨基酸修饰。29.根据权利要求28所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自Q39E、Q39R、L45P、K145T、H172R、Q179E和S186R的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q38R、Q38E、P44F、Q124E、S131K、Q160E、T180E和C214S的至少一个或一组氨基酸修饰。30.根据权利要求29所述的构建体，其中H1包含选自Q39E、L45P、K145T、H172R和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自Q38R、P44F和S131K或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自Q39R、H172R和S186R或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q38E、Q124E、Q160E、T180E和C214S或它们的组合的氨基酸修饰。31.根据权利要求30所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰Q39E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰Q38R和S131K；H2包含氨基酸修饰Q39R和S186R；并且L2包含氨基酸修饰Q38E、Q124E、Q160E和T180E。32.根据权利要求30所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L45P、K145T、H172R和Q179E；L1包含氨基酸修饰P44F和S131K；H2包含氨基酸修饰H172R和S186R；并且L2包含氨基酸修饰Q124E、Q160E和T180E。33.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含A139、L143、K145、Q179和V190处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含F116、Q124、L135、Q160、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。34.根据权利要求33所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自A139W、A139G、L143E、K145T、Q179E、Q179K和V190A的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自F116A、Q124R、Q124E、L135V、L135W、Q160E、T178R和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。35.根据权利要求34所述的构建体，其中H1包含选自A139W、L143E、K145T和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自F116A、Q124R、L135V和T178R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自A139G、Q179K和V190A或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q124E、L135W、Q160E和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。36.根据权利要求35所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰A139W、L143E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V和T178R；H2包含氨基酸修饰Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q124E、L135W、Q160E和T180E。37.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含Q39、L143、K145、D146、H172和Q179处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q38、Q124、Q160、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。38.根据权利要求37所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自Q39E、Q39R、L143E、K145T、D146G、H172R、Q179E和Q179K的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q38R、Q38E、Q124R、Q124E、Q160K、Q160E、T178R和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。39.根据权利要求38所述的构建体，其中H1包含选自Q39E、L143E、K145T、H172R和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自Q38R、Q124R、Q160K和T178R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自Q39R、H172R和Q179K或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q38E、Q124E、D146G、Q160E和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。40.根据权利要求39所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰Q39E、L143E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰Q38R、Q124R、Q160K和T178R；H2包含氨基酸修饰Q39R、H172R和Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q38E、Q124E、Q160E和T180E。41.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L45、L143、K145、D146、H172和Q179处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q38、P44、Q124、N137、Q160、S174、T178、T180和C214处的至少一个或一组氨基酸修饰。42.根据权利要求41所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L45P、L143E、K145T、D146G、H172R、H172T、Q179E和Q179K的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q38E、P44F、Q124R、Q124E、N137K、Q160K、Q160E、S174R、T178R、T180E和C214S的至少一个或一组氨基酸修饰。43.根据权利要求42所述的构建体，其中H1包含选自L45P、L143E、K145T、H172R和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自P44F、Q124R、Q160K和T178R或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自D146G、H172R、H172T和Q179K或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q38E、Q124E、N137K、Q160E、S174R、T180E和C214S或它们的组合的氨基酸修饰。44.根据权利要求43所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L45P、L143E和K145T；L1包含氨基酸修饰P44F、Q124R、Q160K和T178R；H2包含氨基酸修饰D146G和Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q38E、Q124E、Q160E和T180E。45.根据权利要求43所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L143E、K145T和H172R；L1包含氨基酸修饰Q124R、Q160K和T178R；H2包含氨基酸修饰H172T和Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q124E、Q160E、N137K、S174R和T180E。46.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含L124、L143、K145和Q179处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含Q124、S131、V133、S176、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。47.根据权利要求46所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自L124W、L124A、L143E、L143F、K145T、Q179E和Q179K的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自Q124R、Q124K、Q124E、S131K、V133A、V133W、S176T、T178R、T178L、T178E和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。48.根据权利要求47所述的构建体，其中H1包含选自L124W、L143E、K145T和Q179E或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自Q124R、Q124K、S131K、V133A、S176T、T178R和T178L或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L124A、L143F和Q179K或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q124E、V133W、S176T、T178L、T178E和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。49.根据权利要求48所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L124W、L143E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰Q124R、V133A、S176T和T178R；H2包含氨基酸修饰L124A、L143F和Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q124E、V133W、S176T、T178L和T180E。50.根据权利要求1所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含A139、L143、K145、Q179和S186处的至少一个或一组氨基酸修饰，并且(ii)L1和/或L2包含F116、Q124、V133、Q160、T178和T180处的至少一个或一组氨基酸修饰。51.根据权利要求50所述的构建体，其中(i)H1和/或H2包含选自A139C、L143E、L143D、L143R、L143K、K145T、Q179E、Q179D、Q179R、Q179K、S186K、S186R的至少一个或一组氨基酸修饰；并且(ii)L1和/或L2包含选自F116C、Q124R、Q124K、Q124E、V133E、V133D、Q160K、Q160E、T178R、T178K、T178E和T180E的至少一个或一组氨基酸修饰。52.根据权利要求51所述的构建体，其中H1包含选自A139C、L143E、L143D、K145T、Q179E和Q179D或它们的组合的氨基酸修饰；L1包含选自F116C、Q124R、Q124K、Q160K、T178R和T178K或它们的组合的氨基酸修饰；H2包含选自L143R、L143K、Q179R、Q179K、S186K和S186R或它们的组合的氨基酸修饰；并且L2包含选自Q124E、V133E、V133D、Q160E、T178E和T180E或它们的组合的氨基酸修饰。53.根据权利要求52所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰A139C、L143E、K145T和Q179E；L1包含氨基酸修饰F116C、Q124R和T178R；H2包含氨基酸修饰Q179K；并且L2包含氨基酸修饰Q124E、Q160E和T180E。54.根据权利要求52所述的构建体，其中：H1包含氨基酸修饰L143E、K145...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·桑彻斯，T·斯普雷特冯克罗登斯泰恩，D·厄洛塞夫，S·A·L·汤姆耶，A·L·科珀，I·E·P·德安杰罗，YC·周，S·B·迪克西特，
申请(专利权)人：酵活有限公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA