癌抗原辅助肽制造技术

本发明专利技术涉及WT1肽和包含WT1肽的药物组合物等，所述WT1肽具有由来源于WT1蛋白的连续氨基酸组成的氨基酸序列，并通过与MHC II类分子结合而诱导WT1特异性辅助性T细胞。

【技术实现步骤摘要】
本申请是以下申请的分案申请：申请日：2010年4月22日；申请号：201080028991.4；专利技术名称：同上。
本专利技术涉及WT1辅助肽、编码所述肽的多核苷酸、由所述肽诱导的WT1特异性辅助性T细胞、包含它们的用于治疗/预防癌症的药物组合物。本申请要求2009年4月23日申请的日本专利申请号2009-105286的优先权，日本专利申请号2009-105286的公开内容通过引用结合到本文中。
技术介绍
WT1基因(维尔姆斯瘤(Wilms’tumor)1基因)是一种被鉴定为儿童期肾癌维尔姆斯瘤诱发基因的基因(非专利文献1和2)，并且是具有锌指结构的转录因子。WT1基因最初被认为是癌症抑制基因。然而，随后的研究表明，上述基因更合适充当造血器官肿瘤和实体癌的癌基因(非专利文献3-6)。由于WT1基因在许多恶性肿瘤中高表达，因此已经证实作为没有突变的自身蛋白的WT1基因产物是否存在体内免疫原性。结果表明，来源于在肿瘤细胞中高表达的WT1基因的蛋白质被胞内加工成片段，所得到的肽与展示在细胞表面上的MHCI类分子形成复合物，通过WT1肽疫苗接种可诱导识别这类复合物的细胞毒性T细胞(下文亦称CTL)(非专利文献7-9)。研究还表明，用WT1肽或WT1cDNA免疫的小鼠以高比率排斥植入的表达WT1基因的肿瘤细胞(非专利文献7和10)，但内源性表达WT1基因的正常组织不被诱导的CTL破坏(非专利文献7)。在此之前，有研究强有力的表明，不仅仅在小鼠中而且还在人中可诱导WT1特异性CTL，而且这类CTL具有针对高表达WT1基因的肿瘤细胞的细胞毒活性，但对于内源性表达WT1基因的正常细胞没有细胞毒活性(非专利文献7和10-14)。另一方面，据报道，为了有效地诱导CTL，对癌抗原有特异性的辅助性T细胞的存在十分重要(非专利文献15)。辅助性T细胞(CD4阳性T细胞)通过识别MHCII类分子与抗原呈递细胞上的抗原肽的复合物被诱导、增殖和激活。活化的辅助性T细胞产生IL-2、IL-4、IL-5、IL-6或干扰素(IFN)等细胞因子并促进B细胞和其它T细胞亚群的增殖、分化和成熟。因此，有研究认为，与MHCII类分子结合的抗原肽通过诱导辅助性T细胞，有效地激活CTL等，并提高免疫功能(非专利文献16)。在此之前，有关WT1仅报道了与MHCII类分子的HLA-DRB1*0401和HLA-DRB1*0405结合的抗原肽(非专利文献17和专利文献1)，有必要寻找针对其它亚型的抗原肽。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开号WO2005/045027非专利文献：非专利文献1：DanielA.Haber等,Cell.1990年6月29日;61(7)：1257-69。非专利文献2：CallKM等,Cell.1990年2月9日;60(3):509-20。非专利文献3：MenkeAL等,IntRevCytol.1998;181:151-212。综述。非专利文献4：YamagamiT等,Blood.1996年4月1日;87(7)：2878-84。非专利文献5：InoueK等,Blood.1998年4月15日;91(8):2969-76。非专利文献6：TsuboiA等,LeukRes.1999年5月;23(5):499-505。非专利文献7：OkaY等,JImmunol.2000年2月15日;164(4):1873-80。非专利文献8：MeliefCJ等,ImmunolRev.1995年6月;145:167-77。非专利文献9：RitzJ,JClinOncol.1994年2月;12(2):237-8。非专利文献10：TsuboiA等,JClinImmunol.2000年5月;20(3):195-202。非专利文献11：OkaY等,Immunogenetics.2000年2月;51(2)：99-107。非专利文献12：OhminamiH等,Blood.2000年1月1日;95(1):286-93。非专利文献13：GaoL等,Blood.2000年4月1日;95(7):2198-203。非专利文献14：OhminamiH等,Blood.2000年1月1日;95(1):286-93。非专利文献15：Cancer.Res.62:6438,2002。非专利文献16：J.Immunol.Immunother.,24:195,2001。非专利文献17：Cancer.Immunol.Immunother.51:271,2002。
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题因此，本专利技术要达到的目的是提供通过与各种MHCII类分子结合而诱导WT1特异性辅助性T细胞的肽、编码所述肽的多核苷酸、由所述肽诱导的WT1辅助性T细胞以及包含它们的用于治疗/预防癌症的药物组合物。解决技术问题的技术手段本专利技术人进行了深入研究以达到上述目的。结果发现，具有编码WT1蛋白的连续氨基酸序列的一部分的肽起癌抗原辅助肽的作用，换句话说，所述肽通过与MHCII类分子结合而展示在抗原呈递细胞上，并且诱导WT1特异性辅助性T细胞，且显示该肽可用于治疗/预防癌症的药物组合物。因此，本专利技术提供：(1)一种肽，其具有由来源于WT1蛋白的连续氨基酸组成的氨基酸序列，并通过与MHCII类分子结合诱导WT1特异性辅助性T细胞，其中氨基酸序列选自：(a)SEQIDNO:3所述氨基酸序列；(b)SEQIDNO:4所述氨基酸序列；(c)SEQIDNO:5所述氨基酸序列；和(d)一种氨基酸序列，其中(a)-(c)所述氨基酸序列中一个或几个氨基酸被取代、缺失或添加；(2)(1)中的肽，其中氨基酸序列是SEQIDNO:3所述氨基酸序列；(3)(1)或(2)中的肽，其中MHCII类分子选自DRB1*0101、DRB1*0405、DRB1*0802、DRB1*0803、DRB1*0901、DRB1*1201、DRB1*1403、DRB1*1501、DRB1*1502、DPB1*0201、DPB1*0202、DPB1*0402、DPB1*0501、DPB1*0901、DQB1*0301、DQB1*0302、DQB1*0401、DQB1*0501、DQB1*0601、DQB1*0602和DRB5*0102；(4)(1)或(2)中的肽，其中MHCII类分子选自DRB1*0101、DRB1*0405、DRB1*1502、DPB1*0201、DPB1*0202和DQB1*0601；(5)编码(1)-(4)中任一项的肽的多核苷酸；(6)包含(5)中的多核苷酸的表达载体；(7)抗(1)-(4)中任一项的肽或(5)的多核苷酸的抗体；(8)一种用于治疗或预防癌症的药物组合物，其包含(1)-(4)中任一项的肽、(5)中的多核苷酸或(6)中的载体；(9)一种用于治疗或预防癌症的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽，其具有由来源于WT1蛋白的连续氨基酸组成的氨基酸序列并且通过与MHC II类分子结合诱导WT1特异性辅助性T细胞，其中所述氨基酸序列选自：(a) SEQ ID NO:3所述氨基酸序列；(b) SEQ ID NO:4所述氨基酸序列；(c) SEQ ID NO:5所述氨基酸序列；和(d) 其中在(a)‑(c)所述氨基酸序列中一个或几个氨基酸被取代、缺失或添加的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2009.04.23 JP 2009-1052861.一种肽，其具有由来源于WT1蛋白的连续氨基酸组成的氨基酸序列并且通过与MHCII类分子结合诱导WT1特异性辅助性T细胞，其中所述氨基酸序列选自：
(a)SEQIDNO:3所述氨基酸序列；
(b)SEQIDNO:4所述氨基酸序列；
(c)SEQIDNO:5所述氨基酸序列；和
(d)其中在(a)-(c)所述氨基酸序列中一个或几个氨基酸被取代、缺失或添加的氨基酸序列。
2.权利要求1的肽，其中所述氨基酸序列是SEQIDNO:4所述氨基酸序列。
3.权利要求1的肽，其中所述氨基酸序列是SEQIDNO:5所述氨基酸序列。
4.权利要求1-3中任一项的肽，其中所述MHCII类分子选自DRB1*0101、DRB1*0405、DRB1*0802、DRB1*0803、DRB1*0901、DRB1*1201、DRB1*1403、DRB1*1501、DRB1*1502、DPB1*0201、DPB1*0202、DPB1*0402、DPB1*0501、DPB1*0901、DQB1*0301、DQB1*0302、DQB1*0401、DQB1*0501、DQB1*0601、DQB1*0602和DRB5*0102。
5.权利要求1-3中任一项的肽，其中所述MHCII类分子选自DRB1*0101、DRB1*0405、DRB1*1502、DPB1*0201、DPB1*0202和DQB1*0601。
6.一种编码权利要求1-5中任一项的肽的多核苷酸。
7.一种包含权利要求6的多核苷酸的表达载体。
8.一种抗体，其为针对权利要求1-5中任一项的肽或权利要求6的多核苷酸的抗体。
9.权利要求8的抗体，其中所述肽具有选自以下的氨基酸序列：
(a)SEQIDNO:3所述氨基酸序列；和
(b)其中在(a)所述氨基酸序列中一个或几个氨基酸被取代、缺失...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，
申请(专利权)人：株式会社癌免疫研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP