肽癌抗原-特异性T细胞的受体基因制造技术

本发明专利技术提供了针对WT1蛋白的WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)基因的CDR3结构域的核苷酸序列和氨基酸序列。也提供的是使用所述核苷酸序列和氨基酸序列来测试和治疗癌症的方法；和用于检测含有所述核苷酸序列和氨基酸序列的癌症的芯片、引物组、试剂盒和装置。

【技术实现步骤摘要】
本申请是原案申请日为2012年6月20日、原案申请号为201280042412.0 (国际申请号为PCT/JP2012/065707)、专利技术名称为“肽癌抗原-特异性T细胞的受体基因”的专利申请的分案申请。技术背景本专利技术涉及癌抗原特异性T细胞的受体基因中所含的多核苷酸和由该多核苷酸编码的肽，以及使用它们的例如诊断、预后或治疗监测等癌症检查和癌症治疗等。
技术介绍
癌症治疗包括用手术摘除癌症、放射治疗、用抗癌药治疗和免疫疗法。在这些治疗中，免疫疗法在近年来特别引人注意，因为其对癌症更具选择性和特异性且几乎没有副作用。其中，大力进行了通过将大量存在于多种种类的癌细胞和白血病细胞中的WT1蛋白作为靶标来治疗癌症和白血病的探索。为了研究靶向WT1的抗癌治疗的机理并进一步提高治疗效果，有必要鉴定WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)基因的核苷酸序列和由该核苷酸序列编码的受体肽的氨基酸序列。然而，截至目前为止，虽然进行了一些研究(参见例如专利文献1和非专利文献1-5)，但对那些受体基因和受体肽的序列及其使用都知之甚少。现有技术文献专利文献专利文献 1: WO 2008/108257 A1非专利文献非专利文献 1: Valmori D.等人, J. Immunol. 168: 4231-4240, 2002非专利文献 2: Dietrich PY.等人, Cancer Res. 61: 2047-2054, 2001非专利文献 3: Coulie PG.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98: 10290-10295, 2001非专利文献 4: Godelaine D.等人. J. Immunol. 171: 4893-4897, 2003非专利文献 5: Mandruzzato S.等人, J. Immunol. 169: 4017-4024, 2002。专利技术概述专利技术要解决的问题本专利技术的目的是揭示针对WT1蛋白的WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的氨基酸序列以及编码它们的基因的核苷酸序列，特别是其CDR3区的氨基酸序列和核苷酸序列，以及在癌症检查(诊断、预后、治疗监测等)和癌症治疗中使用这些信息。解决问题的手段为了实现上述目的，本专利技术人进行了广泛的研究并首次确定了健康个体和HLA-A*0201阳性患者的WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的核苷酸序列和氨基酸序列，并因而完成了本专利技术。具体地讲，本专利技术人首次鉴定了识别WT1癌抗原肽(WT1蛋白的第126-134个氨基酸；RMFPNAPYL (SEQ ID No.: 1543))的WT1特异性细胞毒性T细胞的T细胞受体(TCR)基因的碱基序列。因此，本专利技术提供了以下内容：(1) 多核苷酸，其具有编码WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的核苷酸序列，其中所述多核苷酸具有下述的DNA、与该DNA互补的RNA、或其互补序列，所述DNA具有SEQ ID No: 1-756所示的任何CDR3核苷酸序列；(2) 上述(1)的多核苷酸，其中所述多核苷酸由下述的DNA、与其互补的RNA、或其互补序列组成，所述DNA由SEQ ID No: 1-756所示的任何CDR3核苷酸序列组成；(3) 肽，其具有WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的氨基酸序列，其中所述肽具有SEQ ID No: 757-1512所示的任何CDR3氨基酸序列；(4) 上述(3)的肽，其由SEQ ID No: 757-1512所示的任何CDR3氨基酸序列组成；(5) (1)或(2)的多核苷酸、或(3)或(4)的肽作为癌标志物的用途；(6) 在HLA-A*0201-阳性患者中诊断癌症的方法，包括评估在治疗前得自所述患者的样品中的WT1特异性CTL的克隆性(clonality)，所述WT1特异性CTL具有(1)或(2)的任何多核苷酸或者(3)或(4)的任何肽，其中在具有多重克隆性的WT1特异性CTL存在的情况下，当具有多重克隆性的WT1特异性CTL的种类更多，或当具有多重克隆性的WT1特异性CTL的克隆性更高时，判定治疗前该患者患癌症的可能性更高；(7) 上述(6)的方法，其中当具有任何CDR3多核苷酸或任何CDR3肽且具有3种以上的克隆性的WT1特异性CTL的克隆性更高，或当具有3种以上克隆性的WT1特异性CTL的种类更多时，判定治疗前该患者患癌症的可能性更高；(8) 检测HLA-A*0201-阳性患者对WT1肽免疫疗法的敏感性的方法，其包括评估在治疗前得自所述患者的样品中的WT1特异性CTL的种类数量和克隆性，所述WT1特异性CTL具有(I)或(2)的任何多核苷酸或者(3)或(4)的任何肽，其中，当所述患者中具有多重克隆性的WT1特异性CTL的种类比对所述免疫疗法无反应的受试者中更多时，判定该患者对WT1肽免疫疗法具有敏感性；(9) 上述(8)的方法，其中在治疗前患者中当具有多重克隆性的WT1特异性CTL克隆的种类越多或者克隆性越大时，判定该患者对WT1肽免疫疗法的敏感性越高；(10) 在HLA-A*2402-阳性患者中监测WT1肽免疫疗法的方法，其包括评估在免疫疗法前后得自所述患者的样品中的WT1特异性CTL克隆的克隆性，所述WT1特异性CTL克隆具有(1)或(2)的任何多核苷酸或者(3)或(4)的任何肽，其中当任何WT1特异性CTL克隆的克隆性在免疫疗法后比免疫疗法前增加时，判定该患者对WT1肽免疫疗法有反应；(11) 上述(10)的方法，其中在WT1肽免疫疗法之后，当克隆性的增加率越大、或者具有增加的克隆性的克隆的种类越多时，判定患者对WT1肽免疫疗法的反应性越高；(12) 针对上述(3)或(4)的肽的抗体；(13) 芯片，其含有(1)或(2)的多核苷酸、(3)或(4)的肽、或者(12)的抗体；(14) CDR3多肽扩增用引物，其具有选自SEQ ID No: 1513-1538所示序列的序列；(15) 用于诊断癌症的试剂盒、用于检测患者对WT1肽免疫疗法的敏感性的试剂盒、或用于监测WT1肽免疫疗法的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测具有(1)或(2)的多核苷酸或者(3)或(4)的肽的WT1特异性CTL的工具(means)；(16) 用于诊断癌症的装置、用于检测患者对WT1肽免疫疗法的敏感性的装置、或用于监测WT1肽免疫疗法的装置，所述装置包括用于检测具有(1)或(2)的多核苷酸或者(3)或(4)的肽的WT1特异性CTL的工具；(17) 上述(15)的试剂盒，其包含(13)的芯片或(14)的引物；(18) 上述(16)的装置，其中在所述装置中使用(13)的芯片或(14)的引物；(19) HLA-A*0201-阳性癌症患者的淋巴细胞，所述淋巴细胞中引入了含有(1)或(2)的多核苷酸序列的T细胞受体基因。本专利技术还提供使用来自HLA-A*0201-阳性患者的淋巴细胞的癌症治疗，其中将包含CDR3多核苷酸的T细胞受体基因引入到所述淋巴细胞中。此外，本专利技术还提供针对CDR3多肽的抗体及其用途。专利技术的效果根据本专利技术，已本文档来自技高网...

【技术保护点】
多核苷酸，其具有编码WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的核苷酸序列，其中所述多核苷酸具有下述的DNA、与该DNA互补的RNA、或其互补序列，所述DNA具有SEQ ID No: 1‑756所示的任何CDR3核苷酸序列。

【技术特征摘要】
2011.06.28 JP 2011-1432731.多核苷酸，其具有编码WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的核苷酸序列，其中所述多核苷酸具有下述的DNA、与该DNA互补的RNA、或其互补序列，所述DNA具有SEQ ID No: 1-756所示的任何CDR3核苷酸序列。2.权利要求1的多核苷酸，其中所述多核苷酸由下述的DNA、与其互补的RNA、或其互补序列组成，所述DNA由SEQ ID No: 1-756所示的任何CDR3核苷酸序列组成。3.肽，其具有WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)的Vβ链的CDR3的氨基酸序列，其中所述肽具有SEQ ID No: 757-1512所示的任何CDR3氨基酸序列。4.权利要求3的肽，其由SEQ ID No: 757-1512所示的任何CDR3的氨基酸序列组成。5.用于检测具有权利要求1或2的多核苷酸或权利要求3或4的肽的WT1特异性CTL的工具在制备以下试剂盒或装置中的用途：用于诊断HLA-A*0201-阳性癌症的试剂盒、用于检测HLA-A*0201-阳性患者对WT1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，
申请(专利权)人：株式会社癌免疫研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP