一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL及其制备方法技术

本发明专利技术采用具有定向靶向的纳米脂质体负载肿瘤相关性抗原WT1制备抗原特异性T淋巴细胞。本发明专利技术制备肿瘤相关性抗原特异性T淋巴细胞技术不仅采用新型纳米脂质体负载肿瘤相关性抗原，以肿瘤相关性为治疗的靶目标，能够诱导更有效的靶向杀伤肿瘤相关性的特异性细胞毒性T淋巴细胞，直接针对肿瘤发生和复发的根源，使肿瘤治疗更具有“治本”性；采用72小时快速成熟树突状细胞，大大缩短肿瘤患者最佳治疗的时间窗口；同时采用工程细胞放大扩增抗原特异性T淋巴细胞，能产生高比例的杀伤能力更强的Tcm。本发明专利技术肿瘤相关性抗原WT1特异性T淋巴细胞制备方法简便易行，免疫靶点针对肿瘤相关性，抗原性强且稳定性良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生命科学
，尤其涉及一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL及其制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤是威胁人类生命健康的第二大致死因素。据统计，2008年全球新发恶性肿瘤患者1270万例，死亡760万例。恶性肿瘤的发生和侵袭转移过程受多层次、多因素调控，癌基因与抑癌基因作用的失衡是其中的关键环节之一。因此，寻找新的或进一步揭示已有癌基因或抑癌基因的功能，对阐明恶性肿瘤发生和演进机理、研发潜在治疗靶点具有重要意义。Wilms瘤基因1(Wilms’tumorgene1，WT1)首先在肾母细胞瘤(又称Wilms瘤)中作为抑癌基因被克隆鉴定，位于人11号染色体短臂1区3带，长约50kb，有10个外显子，富含“GC”同源序列。WT1基因编码产物为长约52-54kD的蛋白质。正常生理情况下，WT1主要在胚胎发生过程中表达，参与心脏、肾脏和脾脏等器官的形成。WT1在正常成体组织中表达部位局限且表达强度极低。WT1在成体组织中的异常表达与多种恶性肿瘤的发生密切相关，但根据细胞特征不同，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，制备包裹有肿瘤相关抗原WT1的靶向树突状细胞C‑型凝集素受体的阳离子脂质体载体；步骤二，利用所述步骤一得到的阳离子脂质体载体将肿瘤相关抗原WT1负载于成熟DC细胞；步骤三，利用所述步骤二得到的成熟DC细胞诱导得到WT1特异性T淋巴细胞和中枢性记忆性T淋巴细胞。

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤相关抗原WT1特异性CTL的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，制备包裹有肿瘤相关抗原WT1的靶向树突状细胞C-型凝集素受体的阳离子脂
质体载体；
步骤二，利用所述步骤一得到的阳离子脂质体载体将肿瘤相关抗原WT1负载于成熟DC
细胞；
步骤三，利用所述步骤二得到的成熟DC细胞诱导得到WT1特异性T淋巴细胞和中枢性记
忆性T淋巴细胞。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中具体包括以下步骤：
步骤1，提供聚乙二醇衍生化乙醇胺磷脂，将C-型凝集素类型的糖连接在聚乙二醇衍生
化乙醇胺磷脂，得到C-型凝集素类型的糖修饰的聚乙二醇衍生化乙醇胺磷脂；
步骤2，将阳离子脂和步骤1中得到的C-型凝集素类型的糖修饰的聚乙二醇衍生化乙醇
胺磷脂分别溶解于氯仿和甲醇的混合溶剂中，得到混合液；
步骤3，用旋转蒸发仪将步骤2中得到的混合液旋转蒸干，使之形成一层均匀的薄膜，真
空干燥后加入含有肿瘤相关抗原WT1的PBS缓冲液或纯水放置4℃超声水化，挤压过膜后得
到包裹有肿瘤相关抗原WT1的靶向树突状细胞C-型凝集素受体的阳离子脂质体载体。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中具体包括以下步骤：
步骤1，将外周血单个核细胞悬于基础培养基并加入DC细胞诱导培养基，种于细胞培养
板，在37℃，5％CO2，饱和湿度下培养进行DC细胞诱导；
步骤2，向DC细胞中加入适量的所述步骤一得到负载有肿瘤相关抗原WT1的阳离子脂质
体载体，共孵育培养6小时；然后加入DC促成熟培养基，继续培养24-48小时，即得到负载肿
瘤相关抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈尚，刘根桃，李晓祥，
申请(专利权)人：深圳市中美康士生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44