高亲和力HIV T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供了对SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的亲和力(KD)小于或等于1μM和/或解离速率(koff)为1×10-3S-1或更慢的TCR，前提是当所述TCR由细胞递呈并包含SEQ ID NO：1和2时，所述细胞不是天然T细胞。此类TCR可单独使用或与治疗剂联用，以靶向于递呈该复合物的HIV感染细胞。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利申请是第201210563915.4号中国专利技术专利申请的分案申请，该第201210563915.4号申请是国际申请号为PCT/GB2006/001147、国际申请日为2006年3月29日、进入中国国家阶段的申请号为“200680011470.1”、专利技术名称为“高亲和力HIVT细胞受体”的专利技术专利申请的分案申请。本专利技术涉及对HIVGag多肽衍生的SLYNTVATL-HLA-A*0201具有结合特性的T细胞受体(TCR)。该TCR包含至少一个TCRα链可变区和/或至少一个TCRβ链可变区，其对于所述SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的KD小于或等于1μM和/或对SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的解离速率(koff)为1x10-3S-1或更慢。专利技术背景人免疫缺陷病毒(HIV)是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的致病因子。该病毒是属于慢病毒群(group)中的一种被膜逆转录病毒。SLYNTVATL(SEQIDNO：16)肽衍生自Gag基因的g17基因产物，Gag基因是构成人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的九个基因中的一个。该肽由HLA-A*0201负载，并呈递到HIV感染细胞的表面。因此，SLYNTVATL-HLA-A2*0201复合物提供了一种TCR可靶向的HIV标记，例如为将细胞毒剂或免疫刺激剂递送到感染细胞的目的。然而，对于该目的，如果TCR对肽-HLA复合物具有高亲和力和/或慢的解离速率将是有利的。专利技术概述本专利技术首次提供了对SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的亲和力(KD)小于或等于1μM和/或解离速率(koff)为1x10-3S-1或更慢的TCR，前提是当所述TCR由细胞递呈且包含SEQIDNO：1和2时，所述细胞不是天然T细胞。此类TCR不论单用或是与治疗剂一起使用对于靶向递呈该复合物的HIV感染细胞都是很有利的。专利技术详述本专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其对SLYNTVATL-HLA-A*0201具有结合特性，并包含至少一个TCRα链可变区和/或至少一个TCRβ链可变区，它的特征在于所述TCR对于所述SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的KD小于或等于1μM和/或对于SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的解离速率(koff)为1x10-3S-1或更慢，前提是当所述TCR由细胞递呈且包含SEQIDNO：1和2时，该细胞不是天然T细胞。可采用任何已知的方法测定KD和/或(koff)。一种优选的方法是实施例4中的表面等离子共振(SurfacePlasmonResonance，Biacore)方法。为了比较，通过实施例4的基于Biacore方法测定亲本HIVgagTCR(TCRα链见SEQIDNO：9，TCRβ链见SEQIDNO：10)的二硫键连接的可溶性变体与SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物相互作用的KD约为85nM，解离速率(koff)为2.21×10-2S-1，半衰期为0.17分钟。SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物的特异性亲本HIVGagTCR具有以下的Vα链和Vβ链基因用途：α链-TRAV12.2β链-TRBV5.6可将亲本HIVGagTCR用作模板来产生本专利技术的其它TCR，所述其它TCR对于所述TCR与SLYNTVATL-HLA-A*0201复合物之间的相互作用的高亲和力高和/或解离速率慢。因此，相对于亲本HIVGagTCRα链可变区(参见图1a和SEQIDNo：1)和/或β链可变区(参见图1b和SEQIDNO：2)，本专利技术的TCR在其至少一个互补决定区(CDR)和/或可变区框架区发生突变。本专利技术也考虑了本专利技术TCR可变区中的其它超变区(例如超变4(HV4)区)可在高亲和力突变TCR中发生突变。噬菌体展示为产生TCR变体文库提供了一种手段。(Li等，(2005)NatureBiotech23(3)：349-354)和WO2004/04404详述了适于噬菌体展示和随后的TCR变体文库筛选的方法，所述TCR变体各含有非天然链间二硫键。天然TCR以异二聚化的αβ或γδ形式存在。然而，现已显示由单条TCRTCRα或TCRβ链组成的重组TCR可结合肽MHC分子。在一个实施方式中，本专利技术的TCR包括α链可变区和TCRβ链的可变区。TCRα链序列和/或TCRβ链序列中的突变可为一个或多个取代、缺失或插入，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。可用任何合适的方法来实现这些突变，这些方法包括但不限于：基于聚合链式反应(PCR)方法、基于限制性内切酶的克隆方法、或不依赖于连接反应的克隆(LIC)方法。这些方法在许多标准分子生物学教材中有所详述。关于聚合酶链式反应(PCR)诱变法和基于限制性内切酶的克隆法更为详尽的描述可参见(Sambrook&Russell，(2001)MolecularCloning–ALaboratoryManual(3rdEd.)《分子克隆实验室指南》第三版，CSHLPress)。关于LIC法的进一步描述可见于(Rashtchian，(1995)CurrOpinBiotechnol6(1)：30-6)。应注意到包含相似Vα和Vβ基因应用并由此氨基酸序列与HIVGag相似的任何αβTCR可用来制作便利的模板TCR。然后可能将产生本专利技术突变的高亲和力TCR所需的改变引入编码模板αβTCR的一个或两个可变区的DNA中。本领域技术人员显然知道可通过许多方法，例如定点诱变引入所需的突变。与图1a和SEQIDNo:1的亲本HIVGagTCRα链可变区序列中这些位置的氨基酸相比，本专利技术TCR包含那些在对应于以下所列的一个或多个TCRα链可变区的氨基酸发生突变的TCR。除非另有相反陈述，本文的TCR氨基酸序列一般含有N-末端甲硫氨酸(Met或M)残基。本领域技术人员可知该残基在重组蛋白产生过程中可以除去。本领域技术人员也显然知道，可将其C-末端和/或N-末端的序列截短1、2、3、4、5个或更多个残基，而基本不影响该TCR的pMHC结合性能，本专利技术包括所有这些不重要的变体。本文所用的术语“可变区”应理解为包括给定TCR的不包含在由TCRα链的TRAC基因或TCRβ链的TRBC1或TRBC2基因所编码的恒定区内的所有氨基酸(序列)。(《T细胞受体手册》(TcellreceptorFactsbook)，(2001)，LeFranc和LeFranc，科学出版社，ISBN0-12-441352-8)。本文所用的术语“可变域”应理解为包括给定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种异二聚化的α‑βT细胞受体(TCR)，其包含下表所示的α和β链可变区对，任选地包含一个或多个表型沉默取代：。

【技术特征摘要】
2005.04.01 GB 0506760.8;2005.08.10 GB 0516487.61.一种异二聚化的α-βT细胞受体(TCR)，其包含下表所示的α和β链可变区对，任选地包
含一个或多个表型沉默取代：
。
2.如权利要求1所述的TCR，其包括SEQIDNO:19所示的α链恒定区和/或SEQIDNO:20
和21所示的β链氨基酸恒定区序列之一，任选地包含一个或多个表型沉默取代。
3.如前述任一权利要求所述的TCR，其特征在于，所述TCR不含跨膜和胞质区域。
4.一种异二聚化的α-βT细胞受体(TCR)，其包含SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·K·雅各布森，李懿，S·M·邓恩，P·E·莫洛伊，
申请(专利权)人：英美偌科有限公司，艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB