本发明专利技术实质上涉及一种用于测定包含可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB或实质上由可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB组成的组合物的稳定性例如放置稳定性、时间稳定性、保质期的体外方法，所述方法包括以下步骤：使包含人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的表面与设置量的聚集人IgG接触；使包含人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的所述表面与设置量的所述可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的组合物接触；测定结合至包含所述人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的所述表面的聚集人IgG的量，和将如在步骤(c)测得的结合至所述表面的聚集人IgG的量与参考值比较，并且(由此)测定所述包含可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB或实质上由可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB组成的组合物的稳定性(放置稳定性、时间稳定性、保质期)。本发明专利技术还涉及可通过如本文限定的方法获得的聚集人IgG，以及在本发明专利技术的方法中提到的聚集人IgG的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术实质上涉及一种用于测定组合物的稳定性的体外方法，所述组合物包含可 溶性人Fc γ受体ΙΙΑ、ΙΙΒ、ΙΙΙΑ和/或ΙΙΙΒ或实质上由可溶性人Fc γ受体ΙΙΑ、ΙΙΒ、ΙΙΙΑ和/ 或IIIB组成，所述方法包括以下步骤:使包含人Fc γ受体ΙΙΑ、ΙΙΒ、IIΙΑ和/或IIIB的表面与 设置量的聚集人IgG接触;使包含人Fc γ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的所述表面与设置量 的所述可溶性人Fc γ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的组合物接触；测定结合至包含所述人 Fey受体ΙΙΑ、ΙΙΒ、ΙΙΙΑ和/或ΙΙΙΒ的所述表面的聚集人IgG的量，和将如在步骤(c)中测得 的结合至所述表面的聚集人IgG的量与参考值比较，并且（由此)测定所述包含可溶性人Fc γ受体ΠΑ、ΠΒ、ΙΙΙΑ和/或IIIB或实质上由可溶性人Fey受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB组 成的组合物的稳定性。本专利技术还涉及可通过如本文限定的方法获得的聚集人IgG，以及在本 专利技术的方法中提到的聚集人IgG的用途。
技术介绍
Fc受体(FeR)在免疫系统中具有重要作用，在免疫系统中它们控制免疫应答的程 度和强度。在病原体进入血液循环后，它们被免疫球蛋白（Ig)调理。产生的免疫复合物(1C) 由于它们的多价性以高亲合力结合至带有FeR的细胞，从而导致FeR的簇集，所述簇集触发 若干效应功能(Metzger，H.，J. Immunol · 1992,149:1477-1487)。取决于表达的FeR类型及相 关蛋白，所述效应功能包括后续为病原体中和和抗原递呈的内吞、抗体依赖性的细胞毒性 (ADCC)、介质分泌或抗体产生的调节(Fridman等人，Immunol Rev. 1992，125:49-76; van de Winkel和Capel，Immunol.Today 1993,14:215-221)〇 免疫复合物作为适应性免疫的一部分源自抗体、抗原、补体和各种受体之间的复 杂的相互作用。在免疫复合物中结合至抗体的抗原一般会被多种细胞机制清除，所述细胞 机制在生理上甚至能够消除少量的来自循环的"外源抗原"。免疫复合物能够在人暴露于外 源物质如蛋白质(感染、疫苗、药物等)或者需要蛋白质载体来激活级联反应的非蛋白物质 (半抗原）时形成。当（致病的）免疫复合物病理性沉积于不同器官时形成自身免疫性障碍， 从而引发导致器官损伤/疾病的炎症性级联反应。当调节障碍在一个或多个这些部件中发 生时，免疫复合物疾病能够以各种各样的方式出现。 特异性Fey R存在于所有免疫球蛋白（Ig)类别中。由于IgG是在人体循环中发现的 丰度最大的抗体同种型，可见对于IgG的FeR，Fc γ受体(Fc γ R)，是丰度最大的并具有广泛 的多样性。在其它哺乳动物物种中发现了与人FeyR相对应的正源蛋白质，所述其它哺乳动 物物种包括其它灵长类动物例如猴子和小鼠。如同人，其它物种也拥有若干种与其相应IgG 亚类有不同亲和力的Fc γ LFc γ R包含激活性和抑制性受体二者，这种阳性和阴性信号的 整合对于高效的免疫应答是必要的。 人中存在三种类型的Fc γ R:高亲和力受体Fc γ RI和低亲和力受体Fc γ RII与Fc γ RIILFc γ RI(CD64)、Fc γ RII(CD32)和Fc γ RIIIA(CD16)作为I型跨膜蛋白或者以可溶形式 (sFc γ R)存在，但是还存在Fc γ RIII(Fc γ RIIIB)的糖基化磷脂酰肌醇锚定形式。此外，Fc yR 以多种同工型（Fc yRIA、Bl、B2、C;Fc yRIIAl-2、Bl-3、C)和等位基因（卩。丫1?1131-冊、-LR;FcyRIIIb-NAl、-NA2)(van de Winkel和Capel，Immunol.Today 1993,14:215-221)存 在。如上所述，这些Fey R对于IgG具有不同的亲和力，尤其对于不同IgG亚类具有不同的结 合亲和力。人中存在4种IgG亚类，按照它们在血清中的丰度命名（IgGl(66%)、2(23%)、3 (7% )、和4(4% ) ;Hashira等人，Pediatr. Int. 1993,42(4): 337-221)。 Fc γ RII是免疫活性细胞上分布最为广泛的受体，并与Fc γ RIIIA-起主要参与免 疫复合物内吞作用。Fc γ RII存在三种同工型Fc γ RIIA、Fc γ RIIB和Fc γ RIIC，然而，Fc γ RIIB和Fc γ RIIC的胞外区相同，而Fc γ RIIA在其胞外区中只有7%的氨基酸残基不同。虽然 如此，两种形式均能够通过它们与人和小鼠 IgG亚类的结合特点（van de Winkel和Cape 1， Immunol · Today 1993，14:215-221)以及它们对于人IgGs不同的亲和力(Bruhns等人，Blood 2009,113:3716-3725)被区分开。Fey RIIIA是诱导ADCC的关键受体，而抑制性Fey RIIB代 表唯一的FcR在B细胞上表达。就这一点上，Fc γ RIIB的表达对于B细胞向下调节而导致抗体 产生减少是必不可少的。 以sFcyRIIB为基础，本专利技术人正在开发用于治疗自身免疫性疾病的新型手段和 方法。最先进的产品是SM101，它与在免疫细胞上表达的Fc γ R竞争致病性免疫复合物的结 合。SM101目前正在参与美国和欧洲用于治疗自身免疫性障碍例如红斑狼疮和免疫性血小 板减少症的临床试验。 假定蛋白质性药物，例如包含SM101的药剂或药物组合物，可能在储存过程中降 解，因而特别想要开发可再现的体外测试，所述测试反映此类蛋白质或包含此类蛋白质的 组合物的剩余活力。
技术实现思路
因此本专利技术的技术问题是开发一种用于测定包含可溶性人Fc γ R的组合物的稳定 性的体外方法。 本专利技术的专利技术人观察到从"正常"或"健康"人群获得的人IgG制备物(例如市售静 脉内免疫球蛋白（IVIG)制备物)包含迄今为止未鉴定的聚集人IgG级分，该级分可以以标准 化且可靠的方式提供。这是让人惊奇的，因为之前并不清楚这样的致病性免疫复合物的类 似物能够来源于其它"正常"或"健康"的人群。所述聚集人IgG结合至Fc γ R受体，由此模仿 体内情形（即，其模仿前面提及的致病性免疫复合物)并因此可以被用于旨在检测、测定或 验证包含水溶性人Fc γ受体ΙΙΑ、ΙΙΒ、IIΙΑ和/或IIΙΒ的组合物的稳定性的方法中。尤其是， 聚集人IgG是非热聚集的，例如如Engelhard,等人，（1990)，Eur.J. Immunol .20,1367-1377、 Bruhns等人·（2009)，Blood J. 113(16) ,3716-3725或者US2008/008700中所描述的。Bruhns 等人描述了通过人IgG在pH 8.0和63°C下在硼酸盐缓冲盐水溶液中孵育30分钟且不经任何 后续处理产生的热聚集人IgG(第3718页，免疫球蛋白结合测定），以及源自与抗NIP mAb复 合的化学改性BSA(NIP12-BSA-生物素)的人工免疫复合物，所述抗NI本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于测定组合物的稳定性的体外方法，所述组合物包含可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB或实质上由可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB组成，所述方法包括以下步骤：(a)使包含人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的表面与设置量的聚集人IgG接触；(b)使包含人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的所述表面与设置量的所述可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的组合物接触；和(c)测定结合至包含所述人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB的所述表面的聚集人IgG的量，(d)以及将如在步骤(c)中测得的结合至所述表面的聚集人IgG的量与参考值比较，并且(由此)测定所述包含可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB或实质上由可溶性人Fcγ受体IIA、IIB、IIIA和/或IIIB组成的组合物的稳定性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·松德尔曼，T·波尔，D·特米尔，
申请(专利权)人：苏伯利莫尔公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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