本发明专利技术公开了一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒及检测方法。该试剂盒内有预包被抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体的96孔板，以及瓶装的以下试剂：磷酸盐漂洗液，封闭液，样品稀释液，细胞间粘附分子-1标准液，辣根过氧化物酶标记的抗细胞间粘附分子-1多克隆抗体IgG，发光底物鲁米那发光液和质控血清。本发明专利技术检测的人血清可溶性细胞间粘附分子-1的测定结果精确、客观、方法简便，易于推广应用。可反映自身免疫性甲状腺患者体内的自身免疫状态，可作为自身免疫性甲状腺疾病的诊断的一个参考指标，这对于了解其自身免疫活动程度，预测格雷夫斯眼病的发生和格雷夫斯甲亢的复发，确定合理的疗程和停药时机等方面具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学发光免疫测定法，具体是一种以多孔酶标板做载体制备固相抗体，用于定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1 (SlCAM-1)的化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒及检测方法。
技术介绍
自身免疫性甲状腺病(autoimmune thyroid disease, AITD)是一组发病机制复杂的器官特异性自身免疫疾病，包括格雷夫斯病(Graves’ disease, GD)、桥本甲状腺炎(Hashimoto’ s thyroiditis, HT)等。人血清细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)是一种细胞表面单链糖蛋白，在细胞膜上分为细胞外区段、疏水的跨膜区段和短的细胞内区段。细胞外区段有5个细胞外免疫球蛋白样结构区，其中第一个免疫球蛋白样结构区与淋巴细胞功能相关抗原 _1 (lymphocyte function-associated antigen-1 LFA-1)配基相结合，LFA-1 在所有白细胞上均有表达，第三个结构样区与补体受体3 (又称Mac-Ι)相结合。它的分子量为80 — 115kD，位于染色体19。ICAM-1的功能是通过与LFA-1和Mac-1结合而实现的。ICAM-1分布广泛，如:血管内皮细胞、胸腺上皮细胞、多种肿瘤细胞以及人类甲状腺上皮细胞等均表达，并且在白细胞介素I (IL-1)、肿瘤坏死因子α (TNF-α )、干扰素Y (INF-Y )刺激下表达明显增加。可溶性细胞间粘附分子_1 (soluble intercellular adhesionmolecule-1 sICAM-1)为细胞表面ICAM-1脱落入血所形成。ICAM-1的功能是参与抗原识另O、补体结合、细胞粘附功能，其表达是导致GD发生的重要因素之一，并且其血清水平对于判断GD的发生、停药时机的确定和复发具有重要意义。近年来的研究表明，细胞间粘附分子-1的表达与自身免疫甲状腺病免疫病理过程密切相关。⑶和桥本甲状腺炎患者的甲状腺组织内浸润淋巴细胞、内皮细胞的ICAM-1和sICAM-1表达异常活跃。另外，发现伴有突眼的⑶患者血清sICAM-1水平异常增高，这是因为⑶患者眼球后组织强烈表达sICAM-1，所以血清sICAM-1升高的水平多与眶周炎症浸润程度密切相关。此外，研究还发现，在药物的治疗过程中，甲状腺功能和临床症状的好转与血清sICAM-1水平的下降并不同步，往往甲状腺功能的恢复在很大程度上要早于sICAM-1的恢复。综上所述，可溶性细胞间粘附分子-1的浓度变化可能对于判断GD的自身免疫紊乱水平、停药与否和是否复发等具有重要意义。目前，没有国产的sICAM-1化学发光检测技术。国外仅有美国R&D公司生产的人血清sICAM-1酶联免疫分析试剂盒，阳性检出率较低，方法烦琐，流程长，而且价格十分昂贵，至今在国内未能推广。
技术实现思路
本专利技术是为了克服进口试剂盒存在的问题，解决进一步推广应用的需求，而提供一种灵敏度高、特异性好、操作简便、一次可测定大量样品的定量人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析检测试剂盒及检测方法。本专利技术是基于免疫反应和化学发光反应，能够检测人血清中sICAM-1的含量，其测定原理是用抗ICAM-1单克隆抗体包被多孔酶标板，用含1.0%-5.0%牛血清白蛋白的磷酸盐漂洗液(PBST)封闭，然后分别加入待测血清样品和标准液，其中sICAM-1与包被在固相载体上的单抗特异性结合，未结合成分经漂洗去除，再加入辣根过氧化物酶标记的抗ICAM-1多克隆抗体IgG (即酶标二抗)，进行二次抗原抗体反应，经漂洗去除未结合成分后，加发光底物鲁米那发光液，最后在化学发光仪上测定发光值，通过标准曲线计算待测样品中的sICAM-1浓度。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的。一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒,该试剂盒内包括有预包被抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体的96孔板，以及瓶装的以下试剂:磷酸盐漂洗液，封闭液，样品稀释液，细胞间粘附分子-1标准液，辣根过氧化物酶标记的抗细胞间粘附分子-1多克隆抗体IgG，发光底物鲁米那发光液和质控血清。所述定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，所述预包被抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体的96孔板，其是经以下重量份数比的原料制成pH9.6的碳酸盐缓冲液包被所述单克隆抗体的，碳酸钠0.78-0.80份、碳酸氢钠1.45-1.49份、去尚子水500份。所述定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其磷酸盐漂洗液是按以下重量份数比的原料制成PH7.4的液体，磷酸二氢钾0.3-0.5份、磷酸氢二钠3.5-4.0份、氯化钠7.8-8.2份、氯化钾0.1-0.3份、吐温-20 0.3-0.6份和去离子水1000份。所述定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其封闭液是含1.0-5.0%牛血清白蛋白的磷酸盐漂洗液。所述定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其样品稀释液是按以下重量份数比的原料制成PH7.4液体，磷酸二氢钾0.3-0.5份、磷酸氢二钠3.5-4.0份、氯化钠7.8-8.2份、氯化钾0.1-0.3份、吐温-20 0.3-0.6份、牛血清白蛋白10-15份、去尚子水1000份。所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其细胞间粘附分子-1标准液是购买的美国R&D公司生产的纯品细胞间粘附分子-1，用样品稀释液稀释而成，稀释浓度分别是200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml, 10ng/ml, 5ng/ml,2ng/ml。所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析的检测方法，该试剂盒是按以下步骤检测的: ①取出96孔酶标板，待测血清用样品稀释液稀释10倍，每孔加稀释后的待测血清100 μ I ;标准曲线各孔分别加浓度为 200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml, 10ng/ml, 5ng/ml, 2ng/ml的标准液ΙΟΟμ 1，37°C温育I小时； ②甩掉反应液，每孔用200-300μ I磷酸盐漂洗液洗3次，拍干； ③每孔加辣根过氧化物酶标记的抗ICAM-1多克隆抗体IgGlOOy1，37°C温育I小时； ④甩掉反应液，每孔用200-300μ I磷酸盐漂洗液洗6次，拍干； ⑤每孔加发光底物鲁米那发光液100μ1，37°C温育5分钟；⑥混匀后30分钟内在化学发光仪上测定发光值； ⑦在计算机中分别输入测定的标准液和待测样品的发光值，根据Microsoftexcel软件绘制的线性标准曲线和方程，即可自动计算出各待测样品中sICAM-1的浓度值。本专利技术的优点； 1、本专利技术试剂盒以抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体做包被抗体，检测的人血清sICAM-lj^⑶患者阳性检出率高。2、本专利技术试剂盒实现了人血清sICAM-1的定量测定，测定结果精确、客观。3、本专利技术试剂盒检测灵敏、稳定、方法简便，对AITD特别是GD的自身免疫紊乱水平、停药与否和是否复发等具有重要意义。本专利技术试剂盒价格低廉，易于推广应用，解决了广大临床医师的迫切需求。【本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子‑1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：该试剂盒内包括有预包被抗细胞间粘附分子‑1单克隆抗体的96孔板，以及瓶装的以下试剂：磷酸盐漂洗液，封闭液，样品稀释液，细胞间粘附分子‑1标准液，辣根过氧化物酶标记的抗细胞间粘附分子‑1多克隆抗体IgG为第二抗体，发光底物鲁米那发光液和质控血清。
【技术特征摘要】
1.一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于:该试剂盒内包括有预包被抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体的96孔板，以及瓶装的以下试剂:磷酸盐漂洗液，封闭液，样品稀释液，细胞间粘附分子-1标准液，辣根过氧化物酶标记的抗细胞间粘附分子-1多克隆抗体IgG为第二抗体，发光底物鲁米那发光液和质控血清。2.如权利要求1所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于:所述预包被抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体的96孔板，其是经以下重量份数比的原料制成PH9.6的碳酸盐缓冲液包被所述单克隆抗体的，碳酸钠0.78-0.80份、碳酸氢钠1.45-1.49份、去离子水500份。3.如权利要求1所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于:所述的磷酸盐漂洗液是按以下重量份数比的原料制成PH7.4的液体，磷酸二氢钾0.3-0.5份、磷酸氢二钠3.5-4.0份、氯化钠7.8-8.2份、氯化钾0.1-0.3份、吐温-20 0.3-0.6份和去离子水1000份配制成。4.如权利要求1或3所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于:封闭液是含1.0-5.0%牛血清白蛋白的磷酸盐漂洗液。5.如权利要求1所述一种定量检测人血清可溶性细胞间粘附分子-1的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于:样品稀释液是按以下重量份数比的原料制成PH7.4液体，磷酸二氢钾0.3-0.5份、磷酸氢二钠3.5-4.0份、氯化钠7.8-8.2份、氯化钾...
【专利技术属性】
技术研发人员：柴锦燕，李宁，方佩华，白庆双，高硕，谭建，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：天津;12
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