本发明专利技术公开了一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒。所述试剂盒包括用活性氨基团包被的标准组织玻片作为表面载体，将多种抗原特异性抗体通过非接触性点样仪点微阵列在玻片表面；用可拆装的2×8孔塑料框架把玻片分割成16个互不干扰的小区，每个小区含有一个抗体微阵列。每个捕获抗体在每个抗体微阵列中有四次的重复。玻片和框架之间通过两侧的塑料夹板紧扣形成抗体芯片；在玻片表面完成多重夹心ELISA反应的实验试剂。本发明专利技术的抗体芯片试剂盒能够同时定量检测多项细胞因子，其灵敏度与单项ELISA类似，但细胞因子的动态检测范围更广，从单一样品实验中可得到四倍于ELISA的重复数据，具有高灵敏度、高通量、样品用量少、廉价、易推广等优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒。所述试剂盒包括用活性氨基团包被的标准组织玻片作为表面载体，将多种抗原特异性抗体通过非接触性点样仪点微阵列在玻片表面；用可拆装的2×8孔塑料框架把玻片分割成16个互不干扰的小区，每个小区含有一个抗体微阵列。每个捕获抗体在每个抗体微阵列中有四次的重复。玻片和框架之间通过两侧的塑料夹板紧扣形成抗体芯片；在玻片表面完成多重夹心ELISA反应的实验试剂。本专利技术的抗体芯片试剂盒能够同时定量检测多项细胞因子，其灵敏度与单项ELISA类似，但细胞因子的动态检测范围更广，从单一样品实验中可得到四倍于ELISA的重复数据，具有高灵敏度、高通量、样品用量少、廉价、易推广等优点。【专利说明】-种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒
本专利技术属于生物医学
，涉及一种同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片 试剂盒。 技术背景 细胞因子（cytokines)是机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的具有调节多 种细胞生理功能的小分子的多肽（低分子蛋白质）。 细胞因子具有非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感 染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响 细胞代谢等。与免疫有关的细胞因子主要包括淋巴细胞产生的淋巴因子、单核巨噬细胞产 生的单核因子、白细胞介素（interleukin, IL)、干扰素（interferon, IFN)、集落刺激因子 (colony stimulating factor，CSF)、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF)、趋化 因子（chemokine)、转化生长因子 β (transforming growth factori3，TGFi3)等，它们在 免疫系统中起着非常重要的调控作用，在异常情况下也会导致免疫病理反应。 细胞因子都是通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后才能发挥其生物学 效应，这些效应包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和杀肿瘤细胞效应，促进或抑制 其他细胞因子的合成，促进炎症过程，影响细胞代谢等。细胞因子的这些作用具有网络性的 特点，即每种细胞因子可作用于多种细胞；每种细胞可受多种细胞因子的调节；不同细胞 因子之间具有相互协同或相互制约的作用，由此构成了复杂的细胞因子免疫调节网络。 细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调 节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗。 目前常用的细胞因子的检测方法主要包括：酶联免疫吸附法（ELISA)，放 射免疫分析（radio immunoassay, RIA)，免疫印迹法(western blot),流式细胞仪 (Flow-Cytometry)等。其中，酶联免疫吸附法是最普遍的方法，具灵敏度高、特异性较好、操 作简便等优点。但一次试验只能检测单一指标，通量低、成本高，在具有多指标特性的细胞 因子检测中，该方法存在明显的不足；放射免疫分析（RIA)虽然灵敏度高，是由于具有放射 性污染，现在已很少采用；免疫印迹法能测定分子的大小，且无非特异的反应，但操作繁琐， 灵敏度低，且只能检测单一指标，不适合运用于细胞因子的检测；流式细胞仪能在细胞水平 上检测细胞因子的水平，但却存在低灵敏、低通量、高成本等缺点。 在细胞因子的多重ELISA检测上，常用的方法包括液相磁珠法（LUMINEX)和 96-孔ELISA板法。液相磁珠法（LUMINEX)是把不同的捕获抗体固定在有不同荧光波长的 磁珠上，不同的磁珠在同一液相完成反应后流经一检测小管并由两个不同的荧光检测仪来 读数。其中的一个读不同的磁珠信号用以代表不同的检测因子，另一个则读该磁珠上的检 测信号用以代表该因子的浓度。因为固定有不同捕获抗体的磁珠在同一反应体系中进行， 捕获抗体彼此之间就有交叉干扰，以至于同时检测因子的数目有限。另外一个常用的方法 是把不同的捕获抗体以微阵列的方式固定在96-孔酶标板底，然后通过类似ELISA的操作 来达到多因子的联合检测。但由于96孔酶标板受孔径大小限制，在一个孔内点的数目有 限。另外由于96孔酶标板有很强的自身荧光，所以检测通常只能用化学发光法。由于化学 发光法信号的弥散特性以至于检测的数目受到进一步的限制。用以上两类多因子联合检测 的方法一次最多只能检测几个因子，并且检测结果的重复性也差。 有鉴于此，有必要开发一种新型的多细胞因子定量检测试剂盒，以克服现有技术 中亟待解决的问题，实现多细胞因子的高通量、高灵敏度、高特异性和低成本检测。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种改良的同时定量检测多个细胞 因子的体芯片试剂盒，该试剂盒采用荧光检测信号，能够同时定量检测几十项细胞因子，克 服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有低成本、便利、高通量、高灵 敏度、高特异性、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。 本专利技术所述的改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒，反应装置包 括固相载体，为用活性氨基包被的标准组织玻片；在一张玻片表面用非接触性点样仪将多 种抗原特异性抗体通过微阵列的方式点有2X8个相同的抗体微阵列，将点有2X8个抗体 微阵列的标准组织玻片用可拆装的2X8孔框架结构把玻片分割成16个互不干扰的小区， 每个小区含有一个抗体微阵列；反应剂包括：抗体混合液，所述抗体混合液为所述若干种 特异性抗体的混合溶液，抗体混合液中的特异性抗体上标记有生物素；识别生物素标记的 链霉亲和素，所述链霉亲和素标记有荧光染料，所述荧光染料为Cy3或具有类似吸收波长 的荧光染料；细胞因子标准品，包含若干种所述的细胞因子的具有梯级浓度的混合物。 根据本专利技术所述的试剂盒的进一步特征，所述的框架结构由三部分组成：上层塑 料硬框，下层软乳胶片，和两侧的塑料夹板；通过两侧的塑料夹板将上层塑料硬框与下层软 乳胶片紧扣在玻片上，形成矩阵为2 X 8的16孔抗体芯片；框架的每个孔的尺寸大小与常规 ELISA的96孔板的孔间距相符，以致适用于标准ELISA系统的自动化操作。 根据本专利技术所述的试剂盒的进一步特征，所述的多种抗原特异性抗体是细胞-巨 噬细胞集落刺激因子、干扰素 Y、白介素-2、白介素4、白介素5、白介素6、白介素8、白介素 10、白介素13、和肿瘤坏死因子α这10种T细胞分泌因子的特异性抗体。 根据本专利技术所述的试剂盒的进一步特征，每种特异性抗体的点制浓度分别为 200ug/ml ;每个捕获抗体在每个抗体微阵列中有四次的重复。 根据本专利技术所述的试剂盒的进一步特征，芯片处理完成后，拆除可拆装的框架，玻 片由含Cy3通道的激光扫描仪扫描成像，所成的像用芯片读数软件将每个点的荧光信号转 化为数码信号，再通过与细胞因子标准曲线的对应关系，定量测出样品中细胞因子的浓度。 与现有技术相比，本专利技术所述的改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试 剂盒具有以下优点和特点： (1)选用没有空间限制的标准组织玻片作为载体，这样点在同一微阵列上检测因 子的数目就可以不受空间的限制。 (本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒，其特征在于：反应装置包括固相载体，为用活性氨基包被的标准组织玻片；在一张玻片表面用非接触性点样仪将多种抗原特异性抗体通过微阵列的方式点有2×8个相同的抗体微阵列，将点有2×8个抗体微阵列的标准组织玻片用可拆装的2×8孔框架结构把玻片分割成16个互不干扰的小区，每个小区含有一个抗体微阵列；反应剂包括：抗体混合液，所述抗体混合液为所述若干种特异性抗体的混合溶液，抗体混合液中的特异性抗体上标记有生物素；识别生物素标记的链霉亲和素，所述链霉亲和素标记有荧光染料，所述荧光染料为Cy3或具有类似吸收波长的荧光染料；细胞因子标准品，包含若干种所述的细胞因子的具有梯级浓度的混合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，毛应清，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，广州华南生物芯片研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44
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