本发明专利技术涉及一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒。该试剂盒包括：由玻片、软质硅胶垫、硬质框架、U形框夹形成反应槽，硬质框架划分为1×2或者1×4个小格，形成2或4孔框架；其中，软质硅胶垫尺寸对应于所述硬质框架以及标准玻片；硬质框架的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准玻片结合有相应浓度的抗凋亡因子的特异性抗体。优选地，所述特异性抗体为针对选自43种凋亡因子的抗体。本发明专利技术所述的抗体芯片试剂盒能够迅速、简捷、准确地测定信号通路中43个蛋白质的表达情况，通过监测实验模型系统中的蛋白表达变化，便能快速检测到细胞中的途径激活作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒。
技术介绍
凋亡是细胞程序性凋亡过程，涉及一系列生化事件，导致特定细胞形态改变及凋亡，细胞膜改变，如膜不对称性排列与附着、细胞收缩、核碎列、染色体凝聚及染色体DNA片段化。细胞过度凋亡会导致发育不良，如局部器官缺血损伤，而凋亡不足则导致细胞增殖失控，如HIV病毒的发展和癌症的发生。一系列细胞外和胞内信号介导细胞的凋亡。胞外信号包括毒素、激素、生长因子、一氧化氮或细胞因子。胞内信号包括热量、辐射、营养匮乏、病毒感染、缺氧及细胞内钙浓度增加等。这些信号可抑制或诱导凋亡。已报道了两个哺乳动物细胞凋亡信号转导通路:TNF-α诱导的模型和Fas-Fas配体介导的模型。TNF是细胞凋亡主要的调解因子，在人体内的大多数细胞中有两个肿瘤坏死因子受体：TNF-R1和TNF-R2。肿瘤坏死因子结合TNF-R1的结合能启动信号转导通路，通过肿瘤坏死因子受体相关凋亡结构域与Fas相关凋亡结构域蛋白介导caspase活化。受体结合间接地导致转录因子参与细胞的存活和炎症反应的激活。Fas受体与Fas配体结合，Fas和FasL的相互作用结果形成诱导凋亡信号复合体，其中包含FaDD，caspase-8的和caspase-10。通过哺乳动物细胞中TNF-R1和Fas激活，建立促凋亡和抗凋亡的Bcl-2家族成员之间的平衡。这种平衡以促凋亡同型二聚体形式在线粒体外膜形成。促凋亡同型二聚体使线粒体膜渗透释放半胱天冬酶的活化物如细胞色素C和SMAC。肿瘤抑制蛋白p53也在细胞凋亡中起着至关重要的作用。DNA损伤后，通过α-干扰素和β-干扰素通路，p53蛋白累积并诱导p53基因的转录，导致p53蛋白水平的增加和癌细胞凋亡的增强。P53可以在细胞周期的G1阶段阻止细胞的复制，给细胞修复时间，但如果损害严重且修复失败，它会诱导细胞凋亡。任何阻止p53或干扰素基因的调控将导致细胞凋亡受限甚至形成肿瘤。目前常用的凋亡因子检测方法为采用流式细胞仪法，该方法将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体，较其它方法有不可比拟的优越性，既可定性又可定量，具有快速和敏感性高的特点。但是，该方法也存在明显的不足，例如操作繁琐、成本高，仪器昂贵，尤其需要进行多指标特性的凋亡因子检测。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，该试剂盒采用抗体芯片技术，能够检测四十三个凋亡因子，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、需有费仪器等缺陷，具有高通量、高灵敏度、高特异性和低成本、规模化等优点，能在普通实验室推广和应用。本专利技术所述的一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，包括：由用于点样的标准载玻片、用于防止漏液的软质硅胶垫、划分为若干个小格的硬质框架、U形框夹形成的反应槽，所述U形框夹从两侧将由下至上放置的尺寸对应的所述硬质框架、所述软质硅胶垫和所述标准载玻片夹紧在一起，以致所述标准载玻片贴紧封闭所述硬质框架的底部，使所述硬质框架上的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准玻片结合有相应浓度的抗凋亡因子的特异性抗体；所述硬质框架划分为1×2或者1×4个小格，从而形成2或4孔框架。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，所述特异性抗体为针对选自如下43种凋亡因子的抗体：Bad、bax、bcl-w、BID、Caspase3、Caspase8、CD40、CD40L、cIAP-2、cytoC、DR6、Fas、FasL、HSP27、HSP60、HSP70、HTRA、IGF-1、IGF-II、IGFBP-1、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5、IGFBP-6、IGF-1sR、livin、p21、p27、p53、SMAC、Survivin、sTNF-R1、sTNF-R2、TNF-alpha、TNF-beta、TRAILR-1、TRAILR-2、TRAILR-3、TRAILR-4、XIAP。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，所述特异性抗体是采用以下步骤固定于玻片：1)特异性抗体与含有1.4至2％酪蛋白的pH7.4磷酸盐缓冲液混合形成抗体混合物；2)于抗体混合物中将每个抗体含量以0.01至2ng固定于所述点样孔，每个抗体设置2至4个重复孔；3)抗体芯片点阵排布于玻片，玻片每平方厘米点10至100个特异性抗体。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，所述
玻片包括阳性对照孔和阴性对照孔；阳性对照孔为对应特异性抗体的具有相应浓度的生物素化IgG抗体，每个反应的生物素化的IgG抗体的浓度一致，以便于标准化检测；阴性对照孔为具有相应浓度的生物素化的无关抗体，每个反应的生物素化的无关抗体的浓度一致，以便于标准化检测。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，所述样本处理液为包含蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液，用于裂解细胞沉淀物，可处理血浆、血清、尿液、咽拭子、细胞培养物、组织等样本。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，利用荧光素作为检测信号，通过比较未知样品和标准样本的信号来确定样品中的目标抗原的浓度。根据本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的进一步特征，利用Genepix Pro 6.1软件获取芯片上所有点的信号强度，利用电子表格版的分析软件计算每个蛋白的表达水平和标准曲线，利用阳性对照信号标准化，背景阈值设置对照组的平均强度加上2倍标准偏差(SD)进行统计，表达水平高于背景加上2×SD的蛋白用于校正的T检验分析。本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒的检测流程是：样品首先和抗体芯片反应，非特异性蛋白质被洗涤液洗脱后，将被生物素化的抗体所识别。然后，HRP酶连的亲和素或者Alexa Fluor 555连接的亲和素结合到抗原抗体混合物上，通过发光化学或者荧光来检测最终的信号。本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒具有以下优点：(1)在一个实验中，能同时检测出43种凋亡因子表达情况；(2)无需进行蛋白沉淀和蛋白印记等实验；(3)不需要特殊的设备，普通实验室即可应用；(4)工作流程短，不需要同位素放射性物质；(5)灵敏度高(可检测出pg量的蛋白质)；(6)检测的特异性高、样品范围广、信号检测多样。综上所述，本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒使研究者们能够通过一个实验，迅速、简捷、准确地测定信号通路中43个蛋白质的表达情况，通过监测实验模型系统中的蛋白表达变化，便能快速检测到细胞中的途径激活作
用，而不必再进行免疫组化以及印迹等繁琐的实验。本专利技术所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒可应用于以下几大类：(1)有助于有关细胞凋亡在临床和基础等各个领域的研究。细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡，乃至机体衰老方面都起着重要作用。(2)用于监测细胞信号传导，凋亡因子的表达水平。(3)从细胞凋亡角度来理解肿瘤的发生机制，过细胞凋亡角度和机制来设计对肿瘤的治疗方法。(4)筛选细胞信号传导，发育和生长过程中起到激活和抑制作用的蛋本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，其特征在于，包括：由用于点样的标准载玻片、用于防止漏液的软质硅胶垫、划分为若干个小格的硬质框架、U形框夹形成的反应槽，所述U形框夹从两侧将由下至上放置的尺寸对应的所述硬质框架、所述软质硅胶垫和所述标准载玻片夹紧在一起，以致所述标准载玻片贴紧封闭所述硬质框架的底部，使所述硬质框架上的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准玻片结合有相应浓度的抗凋亡因子的特异性抗体；所述硬质框架划分为1×2或者1×4个小格，从而形成2或4孔框架。
【技术特征摘要】
2014.10.17 CN 20141055554631.一种用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，其特征在于，包括：由用于点样的标准载玻片、用于防止漏液的软质硅胶垫、划分为若干个小格的硬质框架、U形框夹形成的反应槽，所述U形框夹从两侧将由下至上放置的尺寸对应的所述硬质框架、所述软质硅胶垫和所述标准载玻片夹紧在一起，以致所述标准载玻片贴紧封闭所述硬质框架的底部，使所述硬质框架上的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准玻片结合有相应浓度的抗凋亡因子的特异性抗体；所述硬质框架划分为1×2或者1×4个小格，从而形成2或4孔框架。2.根据权利要求1所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，其特征在于，所述特异性抗体为针对选自如下43种凋亡因子的抗体：Bad、bax、bcl-w、BID、Caspase3、Caspase8、CD40、CD40L、cIAP-2、cytoC、DR6、Fas、FasL、HSP27、HSP60、HSP70、HTRA、IGF-1、IGF-II、IGFBP-1、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5、IGFBP-6、IGF-1sR、livin、p21、p27、p53、SMAC、Survivin、sTNF-R1、sTNF-R2、TNF-alpha、TNF-beta、TRAILR-1、TRAILR-2、TRAILR-3、TRAILR-4、XIAP。3.根据权利要求1所述的用于检测凋亡因子的抗体芯片试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛应清，方建民，黄若磐，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。