本发明专利技术涉及医学生物检测技术领域，提供了lncARSR在制备肾癌舒尼替尼耐药检测标志物中的应用，以及lncARSR在制备诊断肾癌舒尼替尼耐药的检测试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术还建立了人血清中lncARSR的检测方法并提供了血清中lncARSR检测的试剂盒，通过对接受舒尼替尼治疗的肾癌病人血清的检测，发现在耐药病人血清中的lncARSR含量明显高于敏感病人。本发明专利技术有助于对临床舒尼替尼药物疗效的监测，避免进一步的无效治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及医学生物检测
，具体设及一种检测血清中IncARSR的试剂盒 及其在检测肾癌舒尼替尼耐药中的应用。
技术介绍
肾癌（renalcellcarcinoma,RCC)在中国的发病率位居泌尿系统肿瘤第二位。 约20-30%的肾癌患者在诊断时已经处于晚期，原位肾癌患者术后复发、转移的发生率则高 达30%。肾癌对传统放疗、化疗不敏感，对白介素-2、干扰素-α等细胞因子治疗的有效率 也不到20%，且副作用明显。目前，W小分子抑制剂舒尼替尼为代表的受体型酪氨酸激酶 (RTK)抑制剂是晚期肾癌的主要治疗手段。舒尼替尼是多祀点的酪氨酸激酶抑制剂，主要祀 向血管内皮生长因子受体（VEGFR)、血小板源性生长因子受体（PDGFR)、干细胞生长因子受 体化口)、FMS样酪氨酸激酶3 (FLT3)等，具有抗血管生成和抑制肿瘤细胞生长的双重作用。 虽然舒尼替尼能显著缩减肾癌肿瘤体积，但大部分患者在治疗6-15个月后会出现耐药，使 舒尼替尼不能有效延长晚期肾癌患者的无进展生存期和总体生存期。因此，如果能在影像 学检查之前及时监测舒尼替尼耐药的发生，可W避免进一步的无效治疗，及时采取其他联 合治疗手段，提高治愈率。 近年来，血清学标志物的筛选鉴定和在临床诊疗中的应用是医学领域的研究热 点。目前细胞因子和非编码RNA中microRNA作为血清学标志物的研究取得了很大进展， 但是，长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)在血清学标志物中的应用研究还较 少。IncRNA是长度大于200个碱基、无蛋白编码功能的RNA。IncRNA参与调控肿瘤多方面 的特征，包括肿瘤生长、调亡、转移、代谢等。研究表明IncRNA还可W调控肿瘤耐药，但在 舒尼替尼耐药中的作用尚不清楚。IncARSRQncRNAActivatedinRCCwithSunitinib Resistance,ENST00000424980)是本专利技术人在前期研究肾癌舒尼替尼耐药中鉴定的新的 IncRNA,IncARSR位于人9号染色体，全长591个核巧酸。IncARSR作为血清学标志物的价 值至今尚未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种长链非编码RNAIncARSR的用途，具体是IncARSR作 为肾癌舒尼替尼耐药标志物的应用，W及在制备肾癌舒尼替尼耐药血清学检测试剂或试剂 盒中的应用。 本专利技术的另一个目的在于提供一种检测血清中IncARSR的试剂盒，及该试剂盒在 肾癌舒尼替尼耐药的血清学检测中的应用。 本专利技术人在前期研究中，利用IncRNA忍片和RNAi技术筛选了与肾癌舒尼替尼耐 药相关的IncRNA,结果发现IncARSR在耐药细胞中高表达，并且高表达IncARSR的肾癌患者 对舒尼替尼反应性差。 进一步地，本专利技术人发现IncARSR可w通过外泌体的形式分泌出来，因此建立了 人血清中IncARSR的检测方法和试剂盒，通过对接受舒尼替尼治疗的肾癌病人血清的检 测，我们发现耐药病人血清中IncARSR表达水平明显高于未出现耐药的病人。因此，我们认 为，IncARSR具备作为肾癌舒尼替尼耐药的血清学标志物的可能性。 本专利技术的第一方面，提供了一种长链非编码RNAIncARSR在制备肾癌舒尼替尼耐 药诊断标志物中的应用。 本专利技术的第二方面，提供了IncARSR在制备肾癌舒尼替尼耐药的检测试剂或试剂 盒中的应用。 特别是，IncARSR在制备肾癌舒尼替尼耐药的血清学检测试剂或检测试剂盒中的 应用。 所述的检测试剂或检测试剂盒，是通过原位杂交、实时定量PCR技术等方法检测 生物样品中IncARSR的表达量。 所述的检测试剂或检测试剂盒，包括：对IncARSR具有检测特异性的探针、基因忍 片，或PCR引物等。 所述的生物样品选自：获自对象的新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组 织或细胞、血液或体液等。优选为血清。 所述的检测试剂或试剂盒，优选为通过实时定量PCR技术检测血清中IncARSR的 表达量。 阳01引所述的对IncARSR具有检测特异性的PCR引物如下： 上游引物：TTTGAAATGCTCTTTGAGGGAT(沈QIDN0:1); 下游引物：TGCAGGTTGTCTGAAGTTGGA(SEQIDN0:2)。 本专利技术的第Ξ方面，提供了一种检测血清中IncARSR的试剂盒，该试剂盒的组成 包括： 1.RNA抽提系统 由外源标准RNA(λpolyA+RNA-A)、mirVana?PARISTMKit组成； 2.逆转录系统 由随机引物N6、dNTPs、逆转录体系缓冲液、逆转录酶和RNA酶抑制剂组成； 阳〇2引 3.引物系统 由1对检测λpolyA的Real-timePCR引物和1对特异性检测IncARSR的Real-timePCR引物组成，IncARSR的引物序列为： 阳0巧]上游引物：TTTGAAATGCTCTTTGAGGGAT(沈QIDNO: 1); 下游引物：TGCAGGTTGTCTGAAGTTGGA(SEQIDN0:2); 4.扩增系统 由SYBRPremixExTaq?试剂组成。 本专利技术的第四方面，提供了上述用于检测血清中IncARSR的试剂盒的检测方法， 具体步骤如下： 1.按常规方法抽血并取血清； 2.向血清中加入外源标准RNA工作液，然后抽提血清中的小RNA; 阳〇3引 3.用逆转录系统将RNA逆转录成cDNA; 阳03引 4.用扩增系统进行Real-timePCR扩增，测定IncARSR的含量。 本专利技术的第五方面，提供了上述的检测血清中IncARSR的试剂盒在制备肾癌舒尼 替尼耐药的检测试剂盒中的应用。[00对本专利技术优点在于： 本专利技术提供了IncARSR作为肾癌舒尼替尼耐药的血清学标志物，为诊断肾癌舒尼 替尼耐药提供了新的临床手段，有助于对临床舒尼替尼药物疗效的监测，避免进一步的无 效治疗，具有良好的转化医学前景。【附图说明】 图1为舒尼替尼耐药细胞7SuR(A)和ACSuR度）干扰IncRNA后的IC50检测； 图2为舒尼替尼敏感与耐药肾癌病人血清中IncARSR的表达检测； 图3为血清IncARSR高水平与低水平的舒尼替尼治疗病人的无进展生存曲线。【具体实施方式】 下面结合实施例和附图对本专利技术提供的【具体实施方式】作详细说明。 实施例1 :IncARSR的筛选、鉴定 阳0创我们前期构建了舒尼替尼耐药的肾癌细胞株7SuR、ACSuR(保藏号：CCTCC C2014217，CCTCCC2014238)，并已申请了中国专利技术专利CN201510304372.8,专利技术名称为"肾 癌舒尼替尼耐药细胞系及其构建方法"。 为了研究舒尼替尼耐药相关的IncRNA，我们对肾癌亲本细胞和耐药细胞采用 IncRNA忍片分析，筛选到8条升高最显著的IncRNA。进一步地，我们采用RNAi技术对8条 IncRNA进行功能验证，结果发现干扰IncARSR使耐药细胞恢复了对舒尼替尼的敏感性（图 1)。W上结果提示了IncARSR在肾癌舒当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
lncARSR在制备肾癌舒尼替尼耐药诊断标志物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曲乐，陈程，王林辉，刘冰，吴震杰，张雯，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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