人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法技术

本发明专利技术提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法。根据本发明专利技术一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体以及链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。根据本发明专利技术另一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备方法，包括制备：包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板、CCL2标准品、生物素标记抗人CCL2抗体以及链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。根据本发明专利技术又一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的使用方法，包括加样、加生物素化抗体、加辣根过氧化物酶、显色以及终止步骤。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法。根据本专利技术一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体以及链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。根据本专利技术另一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备方法，包括制备：包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板、CCL2标准品、生物素标记抗人CCL2抗体以及链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。根据本专利技术又一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的使用方法，包括加样、加生物素化抗体、加辣根过氧化物酶、显色以及终止步骤。【专利说明】人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法
本专利技术涉及免疫学检测领域，具体而言，涉及一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法。
技术介绍
人单核细胞趋化蛋白-1(CCL2/Monocyte Chemotactic Protein-l,MCP_l)也被称为单核细胞趋化和激活因子，是趋化因子超家族中CC亚族的主要成员，具有很强的诱导和活化单核/巨噬细胞的能力。NK细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等细胞类型也对其有反应。人单核细胞趋化因子的cDNA编码的是一个99个氨基酸残基的前体蛋白，剪除一个23个氨基酸残基的疏水信号肽生成最终的76氨基酸残基的成熟蛋白。单核细胞、肥大细胞、成骨细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞等多只能够细胞都可生成CCL2。 CCL2是7次跨膜的G蛋白偶联受体CCR2的配体。在炎症进程中发挥重要作用，它能在炎症发生时募集炎症细胞，诱导浸润。CCL2的升高常与败血症、狼疮性肾炎、多发性硬化、急性胰腺炎、类风湿性关节炎有关。在一些肿瘤诸如胃癌、乳腺癌、卵巢癌、恶性胶质瘤、食管鳞状细胞癌发生时也能检测到CCL2的上调。 可见CCL2无论是对炎症的评估还是对肿瘤的监测都有很高的价值，将其作为疾病的指标的研究也越来越受到重视，CCL2有望成为实验室诊断的常规指标，用于肿瘤或肿瘤转移的辅助诊断。目前国外已有测定CCL2的ELISA试剂盒面市，但多为仅供科研应用，由于价格昂贵、操作耗时等因素还不适合用于临床，如R&D Systems的Immunoassay DCPOO系列。而国内测定CCL2的ELISA试剂盒，虽然价格适中，但试剂盒质量不稳定，灵敏度和准确度都达不到临床应用的要求。 因此，为了解决现有技术中的上述不足，本专利技术提出了一种新的解决方案。
技术实现思路
为了解决现有技术中的上述问题，本专利技术一方面提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，另一方面提供了上述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备和使用方法。根据本专利技术提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，成本低，稳定性好，具有较高的灵敏度和准确度；根据本专利技术另一方面提供的上述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备和使用方法，操作简单，步骤简化，用时较短。 本专利技术一方面提供了一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括:包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体，链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。 优选地，所述CCL2标准品由重组人CCL2制备，共8瓶，其含CCL2的浓度范围为 0-2000pg/ml ;所述生物素标记抗人CCL2抗体的浓度为83_125ng/ml。 进一步地，所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒还包括洗涤液、稀释液、显色液A、显色液B和终止液。 进一步地，所述洗涤液为含吐温的磷酸盐缓冲液，所述稀释液为含BSA的磷酸盐缓冲液，所述显色液A为含H2O2的磷酸盐柠檬酸缓冲液，所述显色液B为含TMB的柠檬酸缓冲液，所述终止液为1-2M的H2SO4溶液。 本专利技术另一方面提供了所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备方法，包括包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板的制备，CCL2标准品的制备，生物素标记抗人CCL2抗体的制备，链酶亲和素标记辣根过氧化物酶的制备。 进一步地，包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板的制备过程为:取空白酶标反应板，每孔加入100-200 μ I的鼠抗人CCL2单克隆抗体，室温过夜孵育，弃去孔内液体，拍干后进行封闭。 进一步地，所述封闭过程为:每孔加入250_350μ I封闭液，孵育后弃去孔内液体， 拍干后风干。 可选地，所述封闭过程中的孵育条件为37°C孵育2个小时或者4°C过夜孵育。 优选地，包被的所述鼠抗人CCL2单克隆抗体的浓度为2000-2500ng/ml，所述封闭液为含有BSA和蔗糖的0.0lM的磷酸盐缓冲液。 本专利技术又一方面提供了一种检测人血清中CCL2含量的方法，使用所述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括以下步骤: (I)加样:取所述CCL2标准品分别加入所述酶标反应板，作为标准孔；所述酶标反应板上除所述标准孔外为样品孔，所述样品孔内依次加入所述稀释液和检测样品，所述稀释液和检测样品的加入量相等，且所述稀释液和检测样品的加入量之和与所述CCL2标准品的加入量相等；所述酶标反应板的加样顺序为先于所述样品孔内加入所述稀释液，然后于所述标准孔内加入所述标准品，最后于所述样品孔内加入所述检测样品； (2)加生物素化抗体:取所述生物素标记抗人CCL2抗体加入所述酶标反应板的标准孔和样品孔，室温孵育I个小时，洗板； (3)加辣根过氧化物酶:取所述链酶亲和素标记辣根过氧化物酶加入所述酶标反应板的标准孔和样品孔，室温孵育I个小时，洗板； (4)显色:向所述标准孔和样品孔中分别依次加入所述显色液A和所述显色液B，避光反应15-20分钟； (5)终止:用所述终止液终止反应。 根据本申请提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法，能够带来以下有益效果:本专利技术提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，成本低，稳定性好，具有较高的灵敏度(灵敏度可高达0.007ng/ml)和准确度，弥补了我国国内自主研发人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的空缺，为人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的临床应用奠定了基础；本专利技术另一方面提供的上述人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒的制备和使用方法，优化了试验条件，操作简单，步骤简化，用时较短，且能够取得较好的结果，为基础研究和临床提供服务，有助于提闻临床诊治水平。 【专利附图】【附图说明】 图1示出了本专利技术实施例提供的使用本专利技术提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒检测人血清中CCL2含量的方法的流程示意图； 图2示出了本专利技术实施例提供的使用本专利技术提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒检测人血清中CCL2含量的检测的标准曲线。 【具体实施方式】 下面参照附图详细介绍本专利技术的示例性实施例。提供这些示例性实施例的目的是为了使得本领域普通技术人员能够清楚地理解本专利技术，并且根据这里的描述能够实现本专利技术。附图和具体实施例不旨在对本专利技术进行限定，本专利技术的范围由所附权利要求限定。 根据本专利技术一方面提供的人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括:包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体，链酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人血清CCL2酶联免疫检测试剂盒，包括：包被有鼠抗人CCL2单克隆抗体的酶标反应板，CCL2标准品，生物素标记抗人CCL2抗体，链酶亲和素标记辣根过氧化物酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张健，卢奕，李会强，黄昕，郭宏伟，邹春林，
申请(专利权)人：广西南宁隆吉维特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45