酶联免疫快速检测的微流控芯片及其预处理和检测方法技术

本申请公开了一种酶联免疫快速检测的微流控芯片及其预处理和检测方法，该微流控芯片包括：第一芯片层，其上分布有至少一条检测通道，该检测通道具有第一进样口、第二进样口和出样口，所述第二进样口位于所述出样口和第一进样口之间；第二芯片层，相对所述第一芯片层可移动，其上开设有第三进样口和第四进样口，并满足：所述第二芯片层在第一位置时，所述第三进样口与所述第一进样口连通，且所述第四进样口与第二进样口不连通；所述第二芯片层在第二位置时，所述第三进样口与所述第一进样口不连通，且所述第四进样口与第二进样口连通。本发明专利技术检测所用样品量大大减少，预处理后，加入待测样品孵育后，再加入检测试剂可以快速分析结果。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于酶联免疫快速检测
，特别是涉及一种酶联免疫快速检测的微流控芯片及其预处理和检测方法。
技术介绍
传统的酶联免疫反应分析方法(ELISA)是在96孔板上操作，首先，将一抗加入孔板中孵育，一定时间后抗体吸附在孔板表面。洗去没吸附的抗体后，封闭没有吸附一抗的固体表面从而减少蛋白的非特异性吸附。然后，加入含有已知抗原的标准品或待检测样品，孵育一定时间后，再加入特异酶标记的二抗，孵育一定时间后，二抗与抗原结合，然后洗涤除去没结合的多余的二抗。最后，加入底物，底物经过酶催化反应发生显色反应，产生检测信号(颜色)进行检测。由于每一酶分子可催化大量的底物反应产生检测信号，因此ELISA法检测灵敏度高。然而，常规ELISA分析在96孔板上进行，为技术密集型手工操作，操作步骤繁琐、耗时长，一般数小时甚至更长时间，该操作抗体和试剂消耗大，且结果误差大、易产生交叉反应，重现性差，导致ELISA检验费用高。微流控芯片是通过多种的微通道网络结构将多种化学和生物学的过程集成到同一张芯片的快速、自动化的分析技术平台。目前市场对酶联免疫试剂耗材和自动化酶联免疫检测的需求量很大，已有的ELISA孔板不但价格昂贵，而且不能同时检测多种目标蛋白的含量。因此，利用微流控芯片技术的优势，开发易操作、低成本、低样品量、多种目标蛋白快速检测的酶联免疫微流控芯片，是目前重要的发展方向。
技术实现思路
本专利技术的目的在于借助微流控芯片微通道优势，设计一款可以实现同一待测样品内一种或多种目标蛋白的检测的芯片。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本申请实施例公开了一种酶联免疫快速检测的微流控芯片，包括：第一芯片层，其上分布有至少一条检测通道，该检测通道具有第一进样口、第二进样口和出样口，所述第二进样口位于所述出样口和第一进样口之间；第二芯片层，相对所述第一芯片层可移动，其上开设有第三进样口和第四进样口，并满足：所述第二芯片层在第一位置时，所述第三进样口与所述第一进样口连通，且所述第四进样口与第二进样口不连通；所述第二芯片层在第二位置时，所述第三进样口与所述第一进样口不连通，且所述第四进样口与第二进样口连通。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，所述第二芯片层贴合并通过导引装置滑动于所述第一芯片层表面。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，所述导引装置包括相配合的滑动槽和滑动榫。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，所述第一芯片层表面凸伸有两条平行设置的所述滑动榫，所述滑动槽凹设于所述第二芯片层的表面。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，还包括第三芯片层，所述第二芯片层、第一芯片层和第三芯片层上下依次叠加，所述检测通道凹设于所述第一芯片层的下表面。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，所述第一芯片层上分布有多条检测通道，该多条检测通道的一端连接于同一个第一进样口，该多条检测通道的另一端连接于同一个出样口。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，每一条所述检测通道上还连通有一检测沟道，该检测沟道的宽度大于所述检测通道。优选的，在上述的酶联免疫快速检测的微流控芯片中，位于所述第一进样口和第二进样口之间的检测通道的宽度小于所述第二进样口和出样口之间的检测通道的宽度。相应的，本申请还公开了一种酶联免疫快速检测方法，包括：（1）、预处理：s11、第二芯片层滑动至第一位置，从第三进样口加入NaOH处理一定时间，冲洗干净，加入聚乙烯亚胺室温处理一定时间，加入戊二醛室温处理一定时间；双蒸水冲洗干净，然后干燥处理；s12、第二芯片层滑动至第二位置，从第四进样口加入一抗，使得一抗充满检测通道，然后孵育，使得一抗与芯片固相载体充分结合，完成不同一抗的包被处理；s13、孵育结束后，将第二芯片层滑动至第一位置，从第三进样口加入PBS缓冲液，洗去没有包被的一抗，然后加入封闭蛋白或者脱脂奶粉，封闭没有吸附一抗的固体表面以减少蛋白的非特异性吸附；（2）、检测：s21、取预处理好并且包被好一抗的芯片，从第三进样口加入待测样品或者含有已知抗原的标准品，孵育一定时间后，用PBS润洗干净；s22、从第三进样口加入生物素化的检测抗体作为二抗，孵育一定时间后，用PBS润洗干净；s23、加入荧光分子标记的链霉亲和素蛋白，孵育一定时间后，用PBS润洗干净；s24、荧光显微镜下观察，分析荧光强度，通过标准品制作荧光强度与抗原浓度的标准曲线，对应标准曲线上的荧光强度，分析待测样品的浓度。本申请还公开一种酶联免疫快速检测的微流控芯片的预处理方法，包括：s11、第二芯片层滑动至第一位置，从第三进样口加入NaOH处理一定时间，冲洗干净，加入聚乙烯亚胺室温处理一定时间，加入戊二醛室温处理一定时间；双蒸水冲洗干净，然后干燥处理；s12、第二芯片层滑动至第二位置，从第四进样口加入一抗，使得一抗充满检测通道，然后孵育，使得一抗与芯片固相载体充分结合，完成不同一抗的包被处理；s13、孵育结束后，将第二芯片层滑动至第一位置，从第三进样口加入PBS缓冲液，洗去没有包被的一抗，然后加入封闭蛋白或者脱脂奶粉，封闭没有吸附一抗的固体表面以减少蛋白的非特异性吸附；s14、芯片包被好一抗，并且封闭处理后，将芯片封存。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1、通过设置滑动（slip）的榫卯结构，巧妙完成不同试剂进样，第一进样口和第二进样口可以在打开与闭合之间随意切换，结构简单，操作简便，避免了阀门结构的复杂性。2、芯片预处理过程中，表面改性操作简单、几乎无需任何仪器设备，成本低，改性表面分布均匀，批内和批间差异更小，试验重现性更好。3、检测快速，在芯片预处理之后，芯片直接用于样品检测。4、试剂与样品使用量减少，样品总使用量在10μL以内，试剂总体使用量在50μL以内。传统ELISA检测的96孔板每孔加入样品50μL。5、检测时间减少，传统ELISA检测时间3小时左右，该芯片检测时间最多1小时。6、同一样品中多个目标同时检测，传统ELISA检测中，一种试剂盒只能检测一种目标蛋白，该芯片可以实现多个目标平行、快速检测，进一步缩短了目标蛋白检测的单位时间。同时市场中ELISA试剂盒价格昂贵，该芯片减少了目标蛋白的检测成本。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1所示为本专利技术具体实施例中微流控芯片的立体结构分解示意图；图2所示为本专利技术具体实施例中第一芯片层的俯视图；图3所示为本专利技术具体实施例中微流控芯片的侧视图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行详细的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。结合图1和图2所示，酶联免疫快速检测的微流控芯片，包括上下依次叠加设置的第二芯片层1、第一芯片层2和第三芯片层3。第一芯片层2，其上分布有至少一条检测通道21，该本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于，包括：第一芯片层，其上分布有至少一条检测通道，该检测通道具有第一进样口、第二进样口和出样口，所述第二进样口位于所述出样口和第一进样口之间；第二芯片层，相对所述第一芯片层可移动，其上开设有第三进样口和第四进样口，并满足：所述第二芯片层在第一位置时，所述第三进样口与所述第一进样口连通，且所述第四进样口与第二进样口不连通；所述第二芯片层在第二位置时，所述第三进样口与所述第一进样口不连通，且所述第四进样口与第二进样口连通。

【技术特征摘要】
1.一种酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于，包括：第一芯片层，其上分布有至少一条检测通道，该检测通道具有第一进样口、第二进样口和出样口，所述第二进样口位于所述出样口和第一进样口之间；第二芯片层，相对所述第一芯片层可移动，其上开设有第三进样口和第四进样口，并满足：所述第二芯片层在第一位置时，所述第三进样口与所述第一进样口连通，且所述第四进样口与第二进样口不连通；所述第二芯片层在第二位置时，所述第三进样口与所述第一进样口不连通，且所述第四进样口与第二进样口连通。2.根据权利要求1所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：所述第二芯片层贴合并通过导引装置滑动于所述第一芯片层表面。3.根据权利要求2所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：所述导引装置包括相配合的滑动槽和滑动榫。4.根据权利要求3所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：所述第一芯片层表面凸伸有两条平行设置的所述滑动榫，所述滑动槽凹设于所述第二芯片层的表面。5.根据权利要求1所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：还包括第三芯片层，所述第二芯片层、第一芯片层和第三芯片层上下依次叠加，所述检测通道凹设于所述第一芯片层的下表面。6.根据权利要求1所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：所述第一芯片层上分布有多条检测通道，该多条检测通道的一端连接于同一个第一进样口，该多条检测通道的另一端连接于同一个出样口。7.根据权利要求1所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：每一条所述检测通道上还连通有一检测沟道，该检测沟道的宽度大于所述检测通道。8.根据权利要求1所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片，其特征在于：位于所述第一进样口和第二进样口之间的检测通道的宽度小于所述第二进样口和出样口之间的检测通道的宽度。9.权利要求1至8任一所述的酶联免疫快速检测的微流控芯片的检测方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雯婷，陈红梅，顾志鹏，李乃鹏，聂富强，
申请(专利权)人：苏州汶颢芯片科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32