人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，其特征在于：所述固相载体上设置有多个微孔，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由抗人催产素抗体和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相载体的微孔表面上形成的复合层。本实用新型专利技术的试剂盒操作简便，成本低，稳定性好，可以满足普通实验室的要求。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于涉及生物
，具体而言，涉及人催产素Oxytocin(OT)酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
技术介绍
催产素，Oxytocin(OT)，又称缩宫素，是一种哺乳动物激素。由9个氨基酸构成的特殊结构的环状肽类激素，分子量为1007.19，在大脑下视丘“室旁核”与“视上核(supraoptic nucleus) ”神经元所自然分泌,经下视丘脑下垂体路径神经纤维送到后叶分泌。催产素在雌性哺乳动物生产时大量释放，扩张子宫颈和收缩子宫，促进分娩。分娩后催产素也会刺激乳头，促进乳汁产生。最近的研究已经开始探讨催产素对于各种行为的影响，包括性高潮、社会认同、夫妻或情侣间的成对结合、焦虑，和产妇的行为等。出于这个原因，它有时被称为“爱情激素”。催产素有助于减轻压力及缓解疼痛。无法分泌催产素和无法感到同情和反社会，精神病，自恋和一般的操控个性有关。目前国际已报道的催产素定量测定方法主要有高效液相色谱法、放射免疫测定法和酶联免疫吸附测定法。高效液相色谱法(HPLC)具有灵敏度高、准确性和重复性好等优势，但需要昂贵的仪器设备，而且检测过程繁琐、样本前处理的技术要求很高，难于操作。检测人员需要具备专业的检测技能和丰富的实验经验。放射免疫分析法(RIA)是一种应用放射性同位素的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合而成的体外微量分析方法。虽然该技术特异性较高，灵敏度也较高，但其局限性也很显著，主要有以下几点:I)原料来源:必须使用放射性核素，需要防护和防止污染；2)稳定性差:放射性同位素易衰减，标记抗原有效使用时间短；3)难以实现操作和测量的自动化。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测技术是在RIA基本理论的基础上发展起来的一种非放射性标记免疫分析技术。利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。由于其特异性强、灵敏度、操作简便及不需大型仪器等优点，现广泛用于生物样本的定量检测实验中。酶联免疫吸附测定试剂盒中的关键因素是获得高特异性、高亲和力的抗体，但由于人催产素是小分子多肽物质，免疫原性较弱，通过传统的免疫方法不易产生特异性的抗体，而本专利利用偶联载体来增加其免疫原性，获得高质量的抗体。本专利从酶联免疫吸附测定试剂盒制备的源头入手，将人催产素与BSA偶联，通过利用新技术提高偶联效率，制备稳定的0T-GA-BSA(催产素-戊二醛-牛血清白蛋白)，再使用免疫技术制备特异性高亲和力强的抗体，为试剂盒的制备提供高品质原材料。同法制得抗原OT-GA-OVA (催产素-戊二醛-鸡卵白蛋白)。因此，有必要选用一种快速、简便能够定量且灵敏度、准确度和特异性高的方法来进行人催产素的检测。
技术实现思路
本技术目的是人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒，其操作简便，成本低，稳定性好，可以满足普通实验室的要求。为了实现本技术的目的，拟采用如下技术方案:本技术一方面涉及一种人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，其特征在于:所述固相载体上设置有多个微孔，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由人催产素抗体和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相载体的微孔表面上形成的复合层。在本技术的一个优选实施方式中，所述的多个微孔是指96个微孔。在本技术的一个优选实施方式中，所述的固相载体是聚苯乙烯试剂板。本专利通过高效的偶联方法的得到稳定性好的0T-GA-BSA，并通过免疫动物得到特异性高及亲和力强的抗体，用来制备人催产素免疫免疫吸附测定试剂盒。通过于与HPLC法的比较，其精密度、回收率、准确性和批量检测样本等方面均优于HPLC法。ELISA法比HPLC法样品前处理简单得多，特异性好，无需纯化浓缩。另外，ELISA法比HPLC法操作时间短，一次可处理大量样品，节约了大量的人力、物力，提高了工作效率。而且，ELISA法比HPLC法投资小，仪器的使用不需要专业培训技术人员，更适合基层单位使用。附图说明图1为本技术一具体实施例酶标板结构示意图。I固相载体，2微孔,3包被层。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对本技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本技术的限定。如图1所示，本技术试剂盒的酶标板，其包括固相载体I和包被层3，固相载体I采用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)。固相载体I上有多个微孔2，包被层3附着在固相载体上的微孔2上。包被层3是包括抗人催产素抗体和牛血清白蛋白的复合层。本专利采用效率高的新型偶联技术，获得稳定性好的0T-GA-BSA，并利用免疫技术制备高特异性及高亲和力的抗体，将其应用于酶联免疫吸附测定试剂盒的制备和生产中。为了制备高品质的酶联免疫吸附测定试剂盒，首先必须制备出效价高特异性强的抗体。人催产素是小分子多肽物质，本身不具有诱导产生抗体的能力。为此，必须设法先将人催产素与载体蛋白BSA偶联制备成全抗原，这是制备高品质人催产素酶联免疫试剂盒的最为关键的因素之一。1、人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒的研制:本试剂盒应用竞争抑制酶联免疫分析法测定血清或血浆样本中人催产素的水平。制备过程如下:使用96孔聚苯乙烯试剂板(PS)作为固相载体，先将其置于紫外光下辐照2小时，使PS板活化。在试剂板微孔条上预先包被一定浓度的抗体，4°C过夜，经洗板及牛血清白蛋白封闭处理后制成包被好的酶标板。检测时，依次加入待测标本及生物素化的人催产素，形成待测标本中的人催产素和生物素化的人催产素竞争结合酶标板上包被的抗体的局面，再通过亲和素化辣根过氧化物酶(HRP)放大信号，以3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液，完成人催产素的酶联吸附测定试剂盒的制备。经过对试剂盒一系列的质量指标检测，包括灵敏度、重复性、特异性、回收率及线性测定，表明该检测体系成熟，本试剂盒各项指标检测结果:a.标准曲线本文档来自技高网...

【技术保护点】
人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，其特征在于：所述固相载体上设置有多个微孔，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由抗人催产素抗体和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相载体的微孔表面上形成的复合层。

【技术特征摘要】
1.人催产素酶联免疫吸附测定试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，其特征在于:所述固相载体上设置有多个微孔，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由抗人催产素抗体和牛血清白蛋白依次涂布在所...

【专利技术属性】
技术研发人员：万定一，何峰容，朱馨蕾，杨娟，汪景，谢正红，李庆，丛旭霞，刘晓乐，
申请(专利权)人：武汉优尔生科技股份有限公司，
类型：实用新型
国别省市：