本发明专利技术提供了一种用于检测血清HER2的试剂盒及用途。所述试剂盒包括配对的抗HER2单克隆抗体曲妥珠单抗和生物素化的A18。本发明专利技术还提供了抗HER2抗体和血清专用样品稀释液在检测血清HER2中的用途以及在制造用于检测血清HER2的试剂盒中的用途。本发明专利技术可以作为一种无创伤性、简便、迅速的诊断和监测HER2阳性肿瘤病程发展的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和医学领域。具体地说，本专利技术涉及一种用于检测肿瘤患者尤其是乳腺癌血清中的表皮生长因子受体2 (HER2)含量的试剂盒及其用途，例如用于通过酶联免疫吸附法(ELISA)来检测乳腺癌患者血清中的HER2含量的试剂盒及其用途。更具体的说，本专利技术涉及一种在通过可定量检测肿瘤患者尤其是乳腺癌患者血清中HER2的量的一种ELISA检测方法中使用的试剂盒及其在患者尤其是乳腺癌患者诊断和治疗中的用途。
技术介绍
肿瘤是严重影响公众健康的主要疾病之一。我国目前每年有新发肿瘤患者近220万人，因肿瘤死亡患者超过160万人，给家庭和社会造成了严重的经济负担。肿瘤的有效治疗依赖于对肿瘤的早期筛查与及时诊断，其中肿瘤标志物检测对肿瘤研究和临床治疗实践有着重大作用，已被广泛应用于肿瘤早期筛查、诊断、治疗、疗效评价及预后监测等。国内肿瘤诊断试剂行业2009年市场规模为37亿元，并每年以15%的速度增长。但是，该市场长期由罗氏等外资企业所把持，目前外资企业的市场份额仍然高达80%。因此，研究新的肿瘤标志物并开发相应的肿瘤标志物检测技术，对提升我国医药产业技术水平和人民群众的健康水平有着重要的现实意义。表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中高表达，目前检测肿瘤组织HER2表达水平已作为一个独立指标用于肿瘤的临床诊断和治疗。近年来，肿瘤患者血清HER2水平在肿瘤临床实践中的应用价值已引起越来越多的关注，国外已有HER2血清检测试剂盒被批准用于临床，但是国内尚无同类产品上市。但是，在现有的HER2血清检测试剂盒中，由于血清中复杂成分的干扰，往往导致HER2血清水平定量的不准确性，由此影响了 HER2血清检测技术在肿瘤研究和临床使用的效果。近年来，以单克隆抗体药物为代表的肿瘤靶向药物在肿瘤临床治疗中得到了广泛应用并取得了较好的疗效，针对HER2的人源化抗体药物曲妥珠单抗(trastuzumab,商品名Herceptin)已经在包括中国在内的很多国家用于HER2表达阳性的转移性乳腺癌和胃癌的临床治疗。传统的HER2检测主要通过创伤性的肿瘤组织活检，使用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)等方法，但是这些方法不能检测手术治疗后患者或复发及转移性肿瘤患者体内的HER2水平。大量研究表明，肿瘤病人血清中可溶性的HER2胞外区片段与肿瘤组织的HER2表达水平存在明显相关性，且有高达50%以上的转移性乳腺癌患者血清中存在HER2水平升高现象(大于15ng/mL即可提示肿瘤有进展)，并且HER2血清水平及其变化趋势可用作肿瘤治疗效果的评价与预后评估指标。因此HER2血清水平检测在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用价值。在国家“863”计划、科技部“新药创制”重大科技专项与国家自然科学基金等项目的资助，我们研制了两株高度特异的HER2单克隆抗体A21和A18，并以此开发了 HER2免疫组化体外诊断试剂盒，获得了二项国家专利技术专利授权(专利号:ZL 01113787.8，ZL98116523.0)和一项诊断试剂新药证书(证书号:国药证字S20040023)。针对目前使用的HER2血清检测试剂盒存在容易受到血清中的其他物质的干扰而导致检测结果准确性和稳定性较低的问题，本专利技术提供了一种新的试剂盒可显著改善这方面问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了通过提供检测结果稳定性和/或准确性高的HER2血清检测试剂盒，从而避免或者减少在检测血清HER2时血清中的其他物质对检测结果造成的干扰现象。在第一方面，本专利技术提供了一种用于检测血清HER2的试剂盒，其中，所述试剂盒包括:抗HER2抗体；和血清专用样品稀释液。在第二方面，本专利技术提供了抗HER2抗体与所述血清专用样品稀释液在制造本专利技术第一方面所述的试剂盒中的应用。本专利技术人发现，本专利技术的血清专用样品稀释液可以避免或减轻血清尤其是血清中除了 HER2之外的其他物质对HER2检测结果干扰的现象，从而提供能够获得稳定性和准确性高的HER2血清检测结果。因此，本专利技术对HER2血清水平检测在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用价值。【附图说明】图1是梯度稀释的HER2/EO) (extracellular domain, EO))的检测结果和是否加入血清的结果，结果显示血清对实验结果具有一定的干扰性，降低了试剂盒检测的灵敏性。图2是是否加入本专利技术的血清专用样品稀释液检测的结果，结果显示血清专用样品稀释液可降低血清对HER2/ECD的干扰，提高试剂盒的灵敏度和稳定性。【具体实施方式】本专利技术的目的是提供一种用于通过ELISA方法来检测患者尤其是乳腺癌患者血清中HER2的量的试剂盒。优选的是，所述检测试剂盒包括曲妥珠单抗和生物素化的A18(b1tin-A18)双夹心抗体；进一步优选的是，所述试剂盒包括血清专用稀释液缓冲液，以减少受检血清中其他物质实验的干扰。本专利技术的第一方面提供了一种用于检测血清HER2的试剂盒，其中，所述试剂盒包括:抗HER2抗体；和用于配制血清专用样品稀释液的稀释液试剂，所述稀释液试剂包括DTT(二硫苏糖醇)、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、盐酸、乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P40)、脱氧胆酸钠、氯化钠(NaCL)。也就是说，所述血清专用样品稀释液采用DTT (二硫苏糖醇)、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)、盐酸、乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P 40)、脱氧胆酸钠、NaCL和水制得。在一个优选的实施方式中，所述血清专用样品稀释液由20mmol/L的DTT、0.5mol/L pH7.4的Tris-HCL缓冲液、I % (v/v)的乙基苯基聚乙二醇、10g/L脱氧胆酸钠和25g/L的NaCL和余量的水组成。使用本所述血清专用样品稀释液可以使血清样品处理、稀释、上样一次完成，操作简便，并有效降低了血清成分的干扰。HER2片段进入血液，从而可以在患者尤其是乳腺癌患者血清中检测到HER2，且其含量的多少及其变化均与患者尤其是乳腺癌患者的治疗和预后有着密切的关系。本专利技术采用了 b1tin-A18和曲妥珠单抗两种抗HER2抗体以及所述血清专用样品稀释液的ELISA方法可以准确的检测出血清中HER2的含量及提高其灵敏度，为乳腺癌患者在诊断、及其病情的发展程度及其治疗效果提供参考标准。在一些实施方式中，所述试剂盒进一步包括选自由如下物质组成的组中的一种或者多种物质:牛血清白蛋白(BSA)、胎牛血清(FBS)、HER2ECD、b1tin_A18、辣根过氧化物酶、四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine，TMB)、显色剂和硫酸。在另外一些实施方式中，所述抗HER2抗体为选自由曲妥珠单抗、4D5(曲妥珠单抗对应的鼠源当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测血清HER2的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：抗HER2抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈国栋，胡世莲，刘兢，程民，王璐，龚欢秀，徐婷娟，
申请(专利权)人：安徽省立医院，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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