本实用新型专利技术涉及一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。试剂盒包括：盒体及盒盖，所述盒体内有一个中间板，中间板上设置一个包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板凹槽；水平设置六个STXⅡ参考标准品试剂瓶孔，一个Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶孔；还包括三个较大的孔，分别为增强液试剂瓶孔，浓缩洗板液试剂瓶孔，缓冲液试剂瓶孔。凹槽内设置包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板；各试剂瓶孔内对应放置相应试剂瓶。该试剂盒利用镧系元素铕的荧光和高效价的单克隆抗体，达到灵敏特异的对血清中的抗原进行定量检测的目的；灵敏度高、特异性好、测量范围宽、操作简单，便于临床使用，利于大规模推广应用，市场前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本技术设及定量检测血清中II型志贺毒素含量的时间分辨巧光免疫分析 灯RFIA)试剂盒，属于体外试剂诊断
技术介绍
肠出血性大肠杆菌巧nterohemorrhagicEscherichiacoli,E肥C)是大肠杆菌的 一个亚型，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。E肥C感染在世界各地包 括发达及发展中国家都有流行，其感染具有暴发性、强烈的致病性与致死性等特点，是一种 重要的人畜共患病，对人类健康构成巨大威胁。研究表明，E肥C感染的主要致病机理之一是分泌志贺毒素（Shigatoxin,Stx)， 该毒素分为StxI和StxII两个亚型，其中StxII的毒性最强，能引起病人的溶血性尿 毒综合征化emolytic化emicSyn化ome,皿巧，危及生命。菌体在病人肠道中分泌StxII 可W穿越破损的肠上皮细胞进入血液循环，与祀器官上皮细胞受体，丙糖酷基銷氨醇 (Globotriaosylceramide,抓3)或下糖酷基銷氨醇（Globotetraosylceramide,抓4)结合， 造成肠道、中枢神经系统等器官的损伤，特别是Gb3受体丰度较高的肾脏。由于Stxn是由 整合到E肥C基因组中类A隧菌体基因编码，临床上使用的某些抗生素，如哇诺酬类（环 丙沙星等），容易使细菌进入SOS应激状态，隧菌体从静止的溶源状态进入裂解状态，在肠 道内产生大量的StxII毒素，并进入血液循环，使患者发生皿S。而临床上对E肥C引起的 前期腹泻和其他病原体所引起的腹泻在症状上不易区分，抗生素的使用一方面杀死部分菌 体，患者腹泻症状消失，造成表观"康复"的假象；另一方面，刺激残存的菌体分泌StxII毒 素，从而诱发患者的皿S。因此，作为引发皿S的物质基础，E肥CStxII的检测将直接有助 于对分离菌株致病力强弱的判定，提高对高致病性大肠杆菌的检出。 由于目前临床上对E肥C感染缺乏有效的治疗和预防措施，如能在患者的血清、或 腹泻的血便中检出毒素，快速、准确地诊断病原，则能及时采取免疫干预措施。对于病人救 治方案的制定、传染源头追踪和整个疫情控制均具有重大意义 阳〇化]与发达国家不同，我国疫情主要集中在卫生保健条件较差的农村地区，患者主要 是农民，就医观念薄弱，大多具有群发性特点，等到卫生机构介入时，疫情已比较严重；目 前，与人居住环境关系密切的家畜、家禽带菌情况较为普遍，并且菌群的毒力基因改变明 显，从StxI、StxII并存为主逐步演变为StxII为主，提示E肥C疫情不可能短期内消失。 并且我国农村基层医疗卫生机构不同程度存在抗生素滥用的现象，也迫切需要一种W毒素 分子为祀向的快速、易操作的诊断方法，作为传统依靠病原体分离进行确诊的补充。 采用时间分辨巧光测量技术，^稀±离子为示踪材料，研制的StxII的TRFIA试剂 盒具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染等优点，是目 前StxII检测方法中最灵敏、测量范围最宽的方法之一，非常有利于大规模的普查筛选及 患者病程检测。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种II型志贺毒素时间分辨巧光免疫检测试剂盒，运 用铜系元素館的巧光放大效应，达到灵敏度高、特异性好、量程范围宽的目的。该试剂盒能 够实现快速、简便的检测。 本技术是通过W下技术方案实现的： 一种II型志贺毒素时间分辨巧光免疫检测试剂盒包括盒体、盒盖，其特征在于， 所述盒体内有一个中间板，所述中间板上设置一个包被有STXII单克隆抗体的微孔板凹 槽，所述凹槽内放置包被有STXII单克隆抗体的微孔板；中间板上还设置：六个STXII参 考标准品试剂瓶孔，STXII参考标准品试剂瓶孔内放置STXII参考标准品试剂瓶；一个化 标抗STXII单克隆抗体试剂瓶孔，化标抗STXII单克隆抗体试剂瓶孔内放置化标抗STX II单克隆抗体试剂瓶己个较大的孔，分别为增强液试剂瓶孔，增强液试剂瓶孔内放置增强 液试剂瓶；浓缩洗板液试剂瓶孔，浓缩洗板液试剂瓶孔内放置浓缩洗板液试剂瓶；缓冲液 试剂瓶孔，缓冲液试剂瓶孔内放置缓冲液试剂瓶。 进一步，所述中间板与盒体非一体设置，分离的中间板可W取下，方便对盒体内的 清理。 进一步，盒体上可设置任意阻挡结构，只要保证中间板有效放置在盒体中部即 可，其中优选为在盒体内设置阻挡环，中间板放置在阻挡环上。 进一步，所述六个STXII参考标准品试剂瓶孔水平均匀的设置在中间板内侧，六 个STXII参考标准品试剂瓶对应设置在相应孔内，水平均匀的设置是相同的试剂设置在一 个区域内，能够很容易知道所述试剂瓶内的试剂相同，防止取放时发生错误。 进一步，所述化标抗STXII单克隆抗体试剂瓶孔设置在中间板内侧，且与六个 STXII参考标准品试剂瓶孔间隔一段距离，使两者能明显分为两个区域；化标抗STXII单 克隆抗体试剂瓶设置与该孔内。 进一步，所述的=个较大的孔，增强液试剂瓶孔，浓缩洗板液试剂瓶孔和缓冲液试 剂瓶孔为倾斜孔；增强液试剂瓶，浓缩洗板液试剂瓶和缓冲液试剂瓶倾斜设置在相应孔内， 为防止竖直防止，试剂瓶容易超过试剂盒的高度，倾斜防止可W保证试剂瓶高度不超过盒 体高度，且较横置放置的方式更加容易取出。 进一步，所包被有STXII单克隆抗体的微孔板为96孔板。 进一步，所述盒盖可W采取任意方式设置与盒体上，其中优选为一种扣合式盒盖。 进一步，所述盒体底部设置与盒体大小相同的海绵托，海绵托的设置可W有效防 止试剂瓶的晃动。 进一步，在所述各试剂瓶孔周围设置弹性结构，使各试剂瓶有效放置在试剂瓶孔 内，防止移动过程中发生晃动或脱出。 本技术的特点：一、灵敏度高，可达O.Olng/mL;二、量程宽，血清样本不需要 稀释，样品浓度值介于0-l(K)ng/mL的都能准确检测；S、检测时间短，2小时完成。【附图说明】 图1本技术的整体结构示意图； 图2本技术未放置试剂瓶结构示意图； 图3本技术阻挡环结构示意图； 图中：1、包被有STX II单克隆抗体的微孔板；11、包被有STX II单克隆抗体的微 孔板凹槽；2、STX II参考标准品试剂瓶2 ;21、STX II参考标准品试剂瓶2孔；3、化标抗STX II单克隆抗体试剂瓶3 ;31、化标抗STX II单克隆抗体试剂瓶孔；4、缓冲液试剂瓶：41、缓 冲液试剂瓶孔：5、增强液试剂瓶：51、增强液试剂瓶孔：6、浓缩洗板液试剂瓶：6、浓缩洗板 液试剂瓶孔；7、盒体；71、中间板；72、盒盖；73、阻挡环。【具体实施方式】 实施例1 一种II型志贺毒素时间分辨巧光免疫检测试盒 阳0巧]一种II型志贺毒素时间分辨巧光免疫检测试盒，包括盒体7、盒盖72,盒盖72采 用扣合式方式盖在盒体7上，该试剂盒的盒体7内有：有一个中间板71，中间板71与盒体7 一体连接；中间板71上设置一个包被有STX II单克隆抗体的微孔板凹槽11，抗体反应板凹 槽11内放置96孔的包被有STX II单克隆抗体的微孔板1，即抗体反应板；中间板71上还 设置六个STX II参考标准品试剂瓶孔21，孔内设置STX II参考标准品试剂瓶2(0-l(K)ng/ mL);设置一个化标抗STX II单克隆抗体试剂瓶孔31，孔内设置化本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒包括盒体(7)、盒盖(72)，其特征在于，所述盒体(7)内有一个中间板(71)，所述中间板(71)上设置一个包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板凹槽(11)，所述凹槽(11)内放置包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板(1)；中间板上还设置六个STXⅡ参考标准品试剂瓶孔(21)，STXⅡ参考标准品试剂瓶孔(21)内放置STXⅡ参考标准品试剂瓶(2)；一个Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶孔(31)，Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶孔(31)内放置Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶(3)；三个较大的孔，分别为增强液试剂瓶孔(51)，增强液试剂瓶孔(51)内放置增强液试剂瓶(5)；浓缩洗板液试剂瓶孔(61)，浓缩洗板液试剂瓶孔(61)内放置浓缩洗板液试剂瓶(6)；缓冲液试剂瓶孔(41)，缓冲液试剂瓶孔(41)内放置缓冲液试剂瓶(4)。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：温恬，黄超，曾晓燕，史凤娟，焦永军，郭喜玲，
申请(专利权)人：江苏省疾病预防控制中心，
类型：新型
国别省市：江苏;32
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