本发明专利技术公开了一种抑制２型志贺毒素活性的多肽ＷＡ８及其编码基因与应用。本发明专利技术提供的多肽，命名为ＷＡ８（又名Ｐ８），其氨基酸序列如序列表中序列２所示。该多肽Ｐ８可以做成药物以预防和／或治疗由２型志贺毒素或产２型志贺毒素的病原菌所引起疾病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抑制2型志贺毒素活性的多肽WA8及其编码基因与应用。
技术介绍
志贺毒素(ShigaToxin，Stx)，又称志贺样毒素(Shiga-like Toxin, Sit)作为肠 道病原菌产生的一类具有肠毒性、细胞毒性和神经毒性的细菌外毒素，包括1型、2型志贺 毒素(Stxl，Stx2)，是急性细菌性痢疾、霍乱0139、0157:H7等新发肠道病原菌最为关键的 强致病毒力因子，可以引起出血性结肠炎(hemorrhagic colitis, HC)、血栓形成性血小板 减少性紫癜(TTP)以及高病死率的溶血性尿毒症(hemolytic uremic syndrome,HUS)等严 重并发症。而流行病学研究和临床资料均表明，相比较Stxl，Stx2与感染并发症，特别是 HUS发生的相关性更高，被认为是重要的防治药物设计靶标。目前针对志贺毒素相关病原菌的重症感染尚无特异有效的预防产品和急救治疗 药物。临床普遍采用的抗生素治疗已经引起多重耐药菌株的出现，造成抗生素治疗的失效。 抗生素使用造成更加不利的后果是菌体崩解引发志贺毒素过量释放，加大了由毒素引发各 种并发症的风险。因此针对志贺毒素相关疾病的治疗主张慎用抗生素，而应寻求特异性药 物作为新的有效治疗手段。Stx2(又称Slt2)由1个志贺毒素A亚单位(Stx2A)和5个志贺毒素B亚单位 (Stx2B)组成，毒素通过Stx2B介导与真核细胞表面的Gb3受体结合，进而Stx2A作用于 细胞28S rRNA引起细胞病变。Stx2B与细胞Gb3受体的结合是毒素发挥作用的起始关键 环节，如能阻断这种结合，将从根本上抑制Stx2分子毒性的发挥。国内外研究方向主要集 中在毒素受体类似物和抗体治疗方面。Mshikawa报道了能与Stx结合的多糖化合物，具 W^^W^n^TlSffl^ll (Nishikawa K, Matsuoka K, ffatanabe M, et al. Identification of the optimal structure required for a Shiga toxin neutralizer with oriented carbohydrates to function in the circulation. J Infect Dis 2005 ；191 2097-2105.) ；2002 年 Natori Y.报道了 Gb3 受体治疗的实例(Natori Y. New drugs that prevent cytotoxicity of Shiga toxins. Nippon Rinsho. 2002. 60(6) :1131_1137.),包 括一种能在胃肠道途径阻止毒素扩散的新制剂和另一种可在循环系统抑制志贺毒素毒性 的水溶性制剂。但是受体类多糖化合物的复杂制备工艺和副作用成为制约其发展的障碍。 最近，有学者报道可表达毒素模拟受体的益生菌具有显著的毒素中和效果，可用于治疗志 贺毒素相关疾病(Paton JC，Rogers TJ，Morona R，Paton AW. Oral administration of formaldehyde—killed recombinant bacteria expressing a mimic of the Shiga toxin receptor protects mice from fatal challenge with Shiga-toxigenic Escherichia coli. Infect Immun 2001 ;69 :1389-1393.)，但是这种活菌治疗的安全性有待进一步考察 和验证。在抗体治疗方面，Sheorm等研究报道的单克隆抗体能够阻断Stx2与细胞受体的 结合，中禾口 Stx2 细胞毒f生(SheoranAS，Chapman—Bonof iglio S，Harvey BR, et al. Human antibody against shiga toxin 2administered to piglets after the onset of3diarrhea due to Escherichia coli 0157 :H7prevents fatal systemic complications. Infect Immun 2005 ;73 :4607_4613.)，但临床应用有待于抗体制备工艺的改进完善。近年来日益引起人们研究关注的肽类小分子物质，作为药物具有很鲜明的技术优 势，包括分子量小，结构相对简单，可通过化学合成或基因工程方法进行大量低成本制备； 功能明确，免疫原性低，副作用小，安全性高；易于从多途径吸收，给药途径可多样化。小分 子肽成为新药筛选的重要来源之一(李越希，黄培堂。多肽在生物医药和诊断试剂中的应 用。中国生化药物杂志2001. 22(4) :208-210.)。其中利用噬菌体肽库具有高容量的特点， 筛选具有毒素抑制作用的多肽分子就是可行的技术手段。目前针对志贺毒素的肽类抑制 剂鲜见报道。可参考的科学文献主要为2006公开的Nishikawa K的研究报道(Nishikawa K, ffatanabe M, Kita E, et al. A multivalent peptide library approach identifes a novel Shiga toxin inhibitor that induces aberrant cellular transport of the toxin. Faseb J 2006 ;20 :2597_2599.)，以及 Miura Y 的研究报道(Miura Y, Sakaki A, Kamihira M, Iijima S, Kobayashi K. A globotriaosylceramide(Gb3Cer)mimic peptide isolated from phage display library expressed strong neutralization to Shiga toxins. Biochem Biophys Acta 2006 ；1760 :883_889.)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抑制2型志贺毒素活性的多肽。本专利技术提供的多肽，命名为WA8(又名P8)，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。本专利技术的另一目的在于提供上述的多肽的修饰体。本专利技术提供的多肽的修饰体是在上述多肽的N端和/或C端进行化学修饰或生物 修饰得到的。进一步，上述化学修饰可为乙酰化修饰或氨酰化修饰。上述修饰体可为单肽或分支肽。上述多肽的编码基因也属于本专利技术的保护范围之内。含有上述基因的重组载体、重组菌或转基因细胞系也属于本专利技术的保护范围之内。上述多肽或者上述的修饰体在制备预防和/或治疗由2型志贺毒素或产2型志贺 毒素的病原菌所引起疾病的药物中的应用也属于本专利技术的保护范围之内。上述病原菌为产2型志贺毒素的大肠杆菌、志贺氏痢疾菌或霍乱弧菌。具体地讲，上述产2型志贺毒素大肠杆菌为肠出血性大肠杆菌0157。实验证明本专利技术提供的多肽P8的浓度越大，其与Stx2B结合量越大本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列２所示。
【技术特征摘要】
一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。2.权利要求1所述的多肽的修饰体，其特征在于所述修饰体是在权利要求2所述多 肽的N端和/或C端进行化学修饰或生物修饰得到的。3.如权利要求2所述的修饰体，其特征在于所述化学修饰为乙酰化修饰或氨酰化修饰。4.如权利要求2所述的修饰体，其特征在于所述修饰体为单肽或分支肽。5.权利要求1所述多肽的编码基因。6.含有权利要求5所述基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，李涛，侯晓军，王琴，屠伟，刘越男，史晶，蔡昆，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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