本发明专利技术涉及多肽药物领域，具体涉及一种芋螺毒素多肽及其制备方法与应用，尤其一种作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体的芋螺毒素多肽。本发明专利技术所述芋螺毒素多肽其氨基酸序列为HPA。实验结果表明本发明专利技术所述芋螺毒素多肽HPA能够作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体，有效的抑制乙酰胆碱受体，可作为肌肉烟碱乙酰胆碱受体拮抗剂。本发明专利技术所述芋螺毒素多肽HPA可以用于制备抗皱化妆品，应用范围广泛，具有良好的经济和社会效应。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽药物领域，具体涉及，尤 其一种作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体的芋螺毒素多肽。
技术介绍
肌肉烟碱型乙酰胆碱受体存在于神经肌肉接头处突触后膜，由5个亚单位组成，在 胎儿肌肉为α2βγδ，在成人肌肉为α2βεδ。当神经冲动传导至运动终，突触前膜释放乙酰胆 碱，乙酰胆碱作用在突触后膜乙酰胆碱受体的α亚单位，开启离子通道，引起肌肉收缩。 现在在美容界广泛使用的Β0Τ0Χ(保妥适），即注射用Α型肉毒毒素，其作用机理正 是阻断神经末梢分泌能使肌肉收缩的乙酰胆碱，从而达到麻痹肌肉的效果。由于麻痹了肌 肉使得肌肉没有跳动能力而消除了皱纹，适用于暂时改善65岁及65岁以下成人因皱眉肌/ 或降眉间肌活动引起的中度至重度皱眉纹。然而肉毒杆菌毒素是由肉毒杆菌在繁殖过程中 所产生的一种神经毒素蛋白，价格较高。而且注射肉毒杆菌毒素有明显的副作用，会产生头 痛、过敏、复视、表情不自然的不良反应，因此不适合广泛使用。 抗皱蛇毒SYN-AKE是由瑞士 DSM荷兰皇家帝斯曼集团全资子公司PENTAPHARM通过 高科技生化科技，模拟Temple Viper毒蛇的血清中含有的Waglerinl蛋白，合成的三肽衍生 物。SYN-AKE为肌肉烟碱乙酰胆碱受体(nmAChR)拮抗剂，专门作用于肌肉烟碱乙醯胆碱突出 膜，通过竞争性结合乙酰胆碱受体亚基，阻断乙酰胆碱与通道的结合，以达到抑制神经肌肉 收缩之作用，在除皱方面有特效。但是相比肉毒杆菌SYN-AKE更安全有效。 芋螺毒素（conotoxin或conopeptide，或CTX)，由海洋腹足纲软体动物芋螺 (Conus)的毒液管和毒囊内壁的毒腺所分泌，由许多单一毒肽组成的鸡尾酒样的混合毒素， 主要成分是一些对不同离子通道及神经受体高专一性的活性多肽化合物。它们能特异性地 作用于乙酰胆碱受体及其他神经递质的各种受体亚型，以及钙、钠、钾等多种离子通道。芋 螺毒素与蛇毒的作用机理基本一致，而芋螺毒素相对分子质量更小、结构更稳定、作用效果 更强、更易于合成。因而芋螺毒素在开发为抗皱产品方面更有优势。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供。本发 明所述芋螺毒素多肽能够作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体，且分子量更小、结构更稳定、作 用效果更强、更易于合成。 为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案： -种芋螺毒素多肽，其氨基酸序列为ΗΡΑ。 本专利技术还提供了在ΗΡΑ的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基 所得到的氨基酸序列的多肽。本专利技术也提供了编码本专利技术所述多肽的DNA分子。本专利技术还提供了所述芋螺毒素多肽的制备方法，包括以下步骤： 1)固相合成ΗΡΑ-氨基树脂； 2)ΗΡΑ-氨基树脂裂解得到ΗΡΑ粗肽； 3)ΗΡΑ粗肽用1%醋酸溶液溶解后，凝胶柱层析分离，反相高效液相色谱法纯化得 到ΗΡΑ精肽。 优选的，所述固相合成为Fmoc-Arg(Pbf )-0Η和氨基树脂反应合成Fmoc-Arg(Pbf)-氨基树脂，然后采用逐一偶联的方式偶联Fmoc保护基团的其他氨基酸得到ΗΡΑ-氨基树脂。 其中，所述氨基树脂优选为Rink Amide树脂。 本专利技术所述制备方法步骤2)所述裂解的裂解剂为氟乙酸、三异丙基硅烷与苯酚的 混合物。 优选的，所述三氟乙酸、三异丙基硅烷与苯酚的体积比为95:2.5:2.5。本专利技术利用膜片钳技术对上述筛选出的多肽进行检测，结果显示多肽ΗΡΑ能够作 用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体，有效的抑制乙酰胆碱受体。因此，本专利技术提供了所述多肽 ΗΡΑ作为肌肉烟碱乙酰胆碱受体拮抗剂的应用。 进一步的，本专利技术还提供了所述多肽ΗΡΑ在制备抗皱化妆品中的应用。 由上述技术方案可知，本专利技术提供了。本 专利技术所述芋螺毒素多肽其氨基酸序列为ΗΡΑ。实验结果表明本专利技术所述芋螺毒素多肽ΗΡΑ能 够作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体，有效的抑制乙酰胆碱受体，可作为肌肉烟碱乙酰胆碱 受体拮抗剂。本专利技术所述芋螺毒素多肽ΗΡΑ可以用于制备抗皱化妆品，应用范围广泛，具有 良好的经济和社会效应。【附图说明】 为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。 图1示实施例2ΗΡΑ成品质谱图； 图2示实施例2ΗΡΑ成品高效液相色谱图；图3示实施例4对比于阳性药物，ΗΡΑ对于乙酰胆碱引起的电流的抑制图，其中图A 为加入ΙΟμπι乙酰胆碱引起的电流，图B为加入ΙΟμπι乙酰胆碱后再加入ΙΟμπι阳性药物引起的 电流，图C为加入ΙΟμπι乙酰胆碱引起的电流，图D为加入ΙΟμπι乙酰胆碱后再加入ΙΟμπι ΗΡΑ引 起的电流； 图4示实施例4ΝΡΑ、WNPA、GKYYS、GKHFN对于乙酰胆碱引起电流的作用图，其中图A、 C、E、G均为加入ΙΟμπι乙酰胆碱引起的电流，图B为加入1 Ομπι乙酰胆碱后再加入1 Ομπι NPA引起 的电流，图D为加入1 ΟμL?乙酰胆碱后再加入1 ΟμL? 了 WNPA引起的电流，图F为加入1 ΟμL?乙酰胆 碱后再加入ΙΟμπι GKYYS引起的电流，图Η为加入ΙΟμπι乙酰胆碱后再加入ΙΟμπι GKHFN引起的 电流；图5示实施例5对于乙酰胆碱引起的电流，ΗΡΑ的浓度效果曲线图。【具体实施方式】下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本专利技术保护的范围。 为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案： -种芋螺毒素多肽，其氨基酸序列为ΗΡΑ。 现在已知的作用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体的α-芋螺毒素多为10-20个氨基酸的 多肽，本专利技术通过生物信息学方法，筛选α3/5芋螺毒素半胱氨酸环内小肽的序列在NCBI中 的blastp中进行同源序列比对，对于有相同序列的蛋白和国际化妆品原料表(INCI)-一匹 配，将两者均能匹配上序列作为候选的小肽。筛选出NPA，ΗΡΑ、WNPA、GKYYS、GKHFN。人乙酰胆碱受体主要来源于临床外科断肢肌肉和表达人乙酰胆碱受体的人横纹 肌肉瘤细胞ΤΕ 671细胞株。而膜片钳技术则可以对电极尖端下面积仅为几平方微米的细胞 膜片上一个或几个离子通道的电流进行记录，从而检测是否产生可引起肌肉收缩的动作电 位。因此，本专利技术利用膜片钳技术对上述筛选出的多肽进行检测，结果显示多肽ΗΡΑ能够作 用于肌肉烟碱型乙酰胆碱受体，有效的抑制乙酰胆碱受体。 因此，本专利技术提供了一种芋螺毒素多肽，其氨基酸序列为ΗΡΑ。 本专利技术还提供了在ΗΡΑ的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基 所得到的氨基酸序列的多肽。所述的氨基酸取代、缺失或添加，可以在氨基酸序列的任意位 点进行当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种芋螺毒素多肽，其特征在于，其氨基酸序列为HPA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华洋林，梁东，李莉楠，唐健，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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