一种pH敏感性多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种pH敏感性多肽及其应用，该pH敏感性多肽是将一段净电荷可逆变化的肽链通过柔性肽链连接于细胞穿膜肽的一端而形成。该pH敏感性多肽能够选择性发挥其pH敏感性，在酸性环境部位恢复正电性实现高效细胞摄取。将该pH敏感性多肽连接于两亲性嵌段共聚物上合成pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物；然后采用薄膜分散法制备包含脂质载体材料和pH敏感性多肽修饰两亲性嵌段共聚物的脂质体，所得脂质体表现出易于与酸性微环境的部位(如肿瘤、炎症或感染部位、细胞内涵体或溶酶体内环境等)亲和的靶向性，对靶向治疗具有重要意义。

PH sensitive polypeptide and application thereof

The invention discloses a pH sensitive polypeptide and an application thereof, wherein the pH sensitive polypeptide is formed by connecting a peptide chain whose reversible change of a net charge is connected to one end of the cell penetrating peptide through a flexible peptide chain. The pH sensitive peptide can selectively exert its pH sensitivity, restore positive energy in acidic environment, and realize efficient cell uptake. The sensitivity of pH polypeptide connected to two amphiphilic copolymers on the synthesis of pH sensitive peptide modified two amphiphilic copolymers; then prepared by film dispersion method contains lipid carrier material and the sensitivity of pH peptide modified two amphiphilic copolymers of liposome, the liposomes showed easy and acidic microenvironment site (such as cancer, inflammation or infection, cell endosomes or lysosomes environment) targeting affinity, to targeted therapy has important significance.

【技术实现步骤摘要】
一种pH敏感性多肽及其应用
本专利技术属于药物制剂
，具体涉及一种靶向酸性环境的pH敏感性多肽及其应用。
技术介绍
细胞穿膜肽(cell-penetratingpeptides，CPPs)，是一类由不超过30个氨基酸残基组成的小分子多肽，具有很强的跨膜转运能力和生物相容性，根据氨基酸组成的不同，可分为阳离子CPPs和两亲性CPPs。尽管CPPs能够有效介导外源性生物大分子的入胞作用，但由于缺乏特异性限制了CPPs的体内应用。基于阳离子CPPs的电荷特性，近年来通过“先屏蔽再激活”的策略构建的环境敏感性细胞穿膜肽已经成为新的研究热点，尤其是针对生理或病理条件下人体中所存在的酸性微环境。人体中，酸性微环境的部位主要包括肿瘤、炎症或感染部位、细胞内涵体或溶酶体等。其中，由于肿瘤细胞具有较强的增殖分化能力，肿瘤部位氧供不足，使得肿瘤组织细胞外微环境含有较多乳酸，其细胞外的pH值(6.5～6.8)普遍低于正常组织和血液的pH值(7.2～7.4)。因此，近年来，针对肿瘤微环境的以上特点，利用肿瘤组织这一特殊的微环境构建pH敏感型药物传递系统成为中外学者们的研究热点。参考文献：1.VijayA.Sethuraman，YouHanBae.TATpeptide-basedmicellesystemforpotentialactivetargetingofanti-canceragentstoacidicsolidtumors.JournalofControlledRelease118(2007)216-224.2.A.M.Hamilton，S.Aidoudi-Ahmed，S.Sharma，V.R.Kotamraju，P.J.Foster，K.N.Sugahara，E.Ruoslahti，B.K.Rutt.Nanoparticlescoatedwiththetumor-penetratingpeptideiRGDreduceexperimentalbreastcancermetastasisinthebrain.J.Mol.Med.，93(2015).991-1001.3.S.W.Chung，B.S.Lee，J.U.Choi，S.W.Kim，I.-S.Kim，S.Y.Kim，Y.Byun.OptimizationofastablelinkerinvolvedDEVDpeptide-doxorubicinconjugatethatisactivateduponradiation-inducedcaspase-3-mediatedapoptosis.J.Med.Chem.，58(2015).6435-6447.4.SoonSikKwon，SunYoungKim，BongJuKong.CellpenetratingpeptideconjugatedliposomesastransdermaldeliverysystemofPolygonumaviculareL.extract.InternationalJournalofPharmaceutics483(2015)26-37.5.XiaoyingChen，JennicaZaro，andWei-ChiangShen.FusionProteinLinkers：Property，DesignandFunctionality.AdvDrugDelivRev.2013Oct15；65(10)：1357-1369.
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术的目的是提供一种靶向于酸性微环境的pH敏感性多肽及其应用，该多肽表现出易于与肿瘤细胞亲和的靶向性，对肿瘤靶向治疗具有重要意义。技术方案：一种pH敏感性多肽，包括净电荷可逆变化的肽链HX、柔性肽链Y和细胞穿膜肽CPP三部分，其结构为HX-Y-CPP或CPP-Y-HX。进一步地，所述净电荷可逆变化的肽链HX由组氨酸H与谷氨酸E或天冬氨酸D的一种或两种组成。进一步地，所述柔性肽链Y是由单一氨基酸或混合氨基酸组成。进一步地，所述细胞穿膜肽CPP为含有正电性氨基酸的肽链。上述pH敏感性多肽在纳米靶向递药系统中的应用。一种纳米靶向脂质体递药系统，包括脂质载体材料和pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物。进一步地，所述脂质载体和pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物的摩尔比例为99∶1-9∶1，优选为19∶1。进一步地，所述脂质载体材料选自中性脂质载体材料、阳离子脂质载体材料或阴离子脂质载体材料。进一步地，所述pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物是将pH敏感性多肽与两亲性嵌段共聚物的亲水段进行共价连接。上述纳米靶向脂质体递药系统的制备方法，包括以下步骤：步骤1，采用共价连接合成pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物；步骤2，制备包含脂质载体材料和pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物的脂质体。有益效果：pH敏感性多肽修饰的脂质体可有效实现多肽携带载体进入细胞的穿透细胞膜的能力。并通过pH敏感性多肽的电荷可逆的转变，减少在非靶部位的吸收摄取，增加多种药物的主动靶向效果。附图说明图1为pH敏感性多肽的作用机制图；图2为实施例1中HE-CPP修饰的脂质体在不同pH的PBS缓冲液里的Zeta电荷变化；图3为检测例1中空白脂质体、CPP修饰的脂质体和HE-CPP修饰的的脂质体对Hela细胞增值的抑制效果；图4为检测例2中CPP修饰的脂质体和HE-CPP修饰的的脂质体在2h和6h时不同pH条件下的细胞摄取。具体实施方式以下实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。细胞穿膜肽(cell-penetratingpeptides，CPPs)，也称为蛋白转导域(proteintransductiondomains，PTDs)或膜转运蛋白(membranetransductionpeptides，MTPs)，是一类由不多于30个氨基酸残基组成的小分子多肽，自从1988的HIVTAT发现以来，通过蛋白结构分析衍生，或通过构效关系研究合成不断地发现新的细胞穿膜肽，具有很强的跨膜转运能力，而且能够携带比其分子质量大100倍的外源性大分子(蛋白质或者载体等)进入细胞，是一系列具有高效介导入胞能力的短肽。以其理化性质为基础，细胞穿膜肽可以简单的划分为三类：阳离子细胞穿膜肽、疏水性细胞穿膜肽和两亲性细胞穿膜肽。其中，阳离子细胞穿膜肽中的氨基酸残基主要由精氨酸和赖氨酸组成。两亲性细胞穿膜肽则主要由赖氨酸组成，序列中还分布有亲水或疏水性的其它氨基酸残基，其空间构象主要为α-螺旋结构。然而，细胞穿膜肽的应用受到较大的局限性，一方面，细胞穿膜肽较强的正电性导致其在血液循环中极易与血浆蛋白或调理素结合后被网状内皮系统吞噬；另一方面，细胞穿膜肽作为一种非特异性的“功能分子”，能够非选择性地介导穿透进入所有细胞，这样的特点限制了细胞穿膜肽在全身系统给药中的应用。本专利技术基于对肽链长度、氨基酸组成及序列、氨基酸侧链pKa、重组多肽等电点、不同pH条件下重组多肽净电荷、多肽序列与其二级结构的相关性等多种因素的考虑，构建了一种p本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种pH敏感性多肽，其特征在于：包括净电荷可逆变化的肽链HX、柔性肽链Y和细胞穿膜肽CPP三部分，其结构为HX‑Y‑CPP或CPP‑Y‑HX。

【技术特征摘要】
1.一种pH敏感性多肽，其特征在于：包括净电荷可逆变化的肽链HX、柔性肽链Y和细胞穿膜肽CPP三部分，其结构为HX-Y-CPP或CPP-Y-HX。2.根据权利要求1所述的pH敏感性多肽，其特征在于：所述净电荷可逆变化的肽链HX是由组氨酸H与谷氨酸E或天冬氨酸D的一种或两种组成。3.根据权利要求1所述的pH敏感性多肽，其特征在于：所述柔性肽链Y是由单一氨基酸或混合氨基酸组成。4.根据权利要求1所述的pH敏感性多肽，其特征在于：所述细胞穿膜肽CPP为含有正电性氨基酸的肽链。5.权利要求1所述的pH敏感性多肽在纳米靶向递药系统中的应用。6.一种纳米靶向脂质体递药系统，其特征在于：包括脂质载体材料和pH敏感性多肽修饰的两亲性嵌段共聚物。7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙春萌，涂家生，余荧蓝，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32