本发明专利技术属于生物化学和分子生物学领域，涉及一种α-芋螺毒素肽、其药物组合物、其制备方法及用途。本发明专利技术还涉及所述芋螺毒素肽的前肽、其核酸构建体、其表达载体和转化的细胞、以及其融合蛋白。本发明专利技术还涉及一种阻断乙酰胆碱受体的方法、以及所述芋螺毒素肽的制药用途。本发明专利技术的α-芋螺毒素肽能够特异地阻断乙酰胆碱受体(nAChRs)(例如α3β2?nAChR)，并且具有强的镇痛活性、以及戒除成瘾的活性，具有在制备镇痛药物、戒烟或戒毒药物等方面的良好应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学和分子生物学领域，涉及一种α -芋螺毒素肽、其药物组合物、其制备方法及用途。本专利技术还涉及所述芋螺毒素肽的前肽、其核酸构建体、其表达载体和转化的细胞、以及其融合蛋白。本专利技术还涉及一种阻断乙酰胆碱受体的方法、以及所述芋螺毒素肽的制药用途。
技术介绍
芋螺毒素(conopeptide, conotoxin, CTX)大多是由7-50个氨基酸残基组成的、富含半胱氨酸(Cys)的神经肽毒素。芋螺毒素(肽)按其作用的受体靶可分为α、ω、μ、δ等多种亚型。a-CTX能够特异性地作用于神经末端的乙酰胆碱(acetylcholine, nAChR)受体(Livett BG, Sandall Dff, Keays D, Down J, Gayler KR, Satkunanathan N, KhalilZ.Therapeutic applications of conotoxins that target the neuronal nicotinic·acetylcholine receptor. Toxicon. 2006,48(7) :810-829.)。烟瘾是由烟草中的烟碱(尼古丁)引起的，其体内受体就是烟碱乙酰胆碱受体(nAChRs)(Azam L, McIntosh JM. Alpha-conotoxins as pharmacological probes ofnicotinic acetylcholine receptors. Acta Pharmacol Sin. 2009 ；30 (6) :771-783.)。众所周知，吸烟几乎损害人体全部重要器官(例如呼吸系统、循环系统、神经系统、泌尿系统及其它重要脏器)，并且对孕妇和胎儿的特殊危害。据调查，抽烟是美国人健康的第一大杀手，每年因抽烟死亡的人数高达43万多人，居所有死亡原因之首，其次是酒精中毒引起的死亡人数为每年约10万人。抽烟在中国更是普遍，且危害更严重，每天有2000个中国人是因抽烟而死亡，到2050年，这个死亡人数将上升到每天8000人。抽烟引起的死因主要来自癌症和肺病。烟碱乙酰胆碱受体具有重要生理作用和临床研究意义，其介导众多中枢和外周神经系统的生理功能，包括学习、记忆、应答、镇痛和运动控制等。nAChRs激活多巴胺、去甲肾上腺素、五羟色胺、Y-氨基丁酸等多种神经递质的释放。已证实nAChRs是筛选诊断和治疗一大类重要疾病药物的关键靶点，这些疾病包括智障、成瘾、疼痛、帕金森症、精神病、抑郁、重症肌无力等疑难杂症。至今对于上述疾病还没有对症治疗的药物。常用的非选择性的nAChR激动剂如烟碱，虽然可以缓解上述神经疾病的症状，但它们对心脏和胃肠道产生强烈的副作用，且有成瘾性。因此，开发针对nAChRs各种亚型具有高选择性的配体药物是治疗上述疾病的关键所在。然而，要开发这样的药物的前提是，要获得可以特异结合nAChRs各种亚型的选择性化合物，作为工具药来研究和鉴定各种亚型的精细组成和生理功能，或直接作为相关疾病的治疗药物。另外，在小细胞肺癌中，肿瘤细胞膜上烟碱乙酰胆碱受体的激活促进肿瘤细胞增殖，用药物阻断这些受体的激活，可有效地进行早期诊断，或治疗这种灾难性癌症。药物成瘾既是医疗难题亦是严重的社会问题。截至2008年12月，全国登记在册的吸毒人员为112. 7万，比90年代初期相比增加了近16倍，全国所有刑事案件60%以上与吸毒有关，戒毒难难于上青天，主要原因就在于没有有效的治疗成瘾的药物面世，加上药物成瘾的机制尚不明确。国际上至今还没有有效的戒烟、戒毒对症药物，能治疗成瘾的α-芋螺毒素的预期经济和社会效益无可限量。新近研究表明，阻断含有α3β2或α6β 2的nAChRs可有效防止烟瘾和吗啡毒瘾的发作，显著抑制吸烟和吸毒的欲望(Brunzell DH, Boschen KE, Hendrick ES, Beardsley PM, McIntosh JM. Alpha-conotoxinMII—sensitive nicotinic acetylcholine receptors in the nucleus accumbensshe 11 regulate progressive ratio responding maintained by nicotine.Neuropsychopharmacology. 2010 ；35 (3) :665-673.)。据调查，疼痛影响1/6的人群，包括关节炎、神经痛、肿痛。其中神经痛影响4-8%的人群。现有治疗神经痛的方法，主要是局部麻醉用药，来阻断由于外周神经、神经丛、背根神经、交感神经系统等产生的疼痛信号。但这些治疗只能短时间有镇痛效果，但并不能根治神经痛。而据调查，疼痛影响1/6的人群，包括关节炎、神经痛、肿痛。其中神经痛影响4-8%的人群，很多疾病都会引起神经痛，包括癌症与癌症化疗、酒精中毒、坐骨神经痛、糖尿病、三叉神经痛、硬化症、带状疱疹、机械伤和手术伤、艾滋病、头部神经瘫痪、药物中毒、工业污 染中毒、淋巴神经痛、骨髓瘤、多点运动神经痛、慢性先天性感觉神经病、急性剧烈自发性神经痛、挤压神经痛、脉管炎(血管炎)/局部缺血、尿毒症、儿童胆汁肝脏疾病、慢性呼吸障碍、复合神经痛、多器官衰竭、脓毒病/脓血症、肝炎、叶啉症、维生素缺乏、慢性肝脏病、原生胆汁硬化、高血脂症、麻疯病、莱姆关节炎、感觉神经束膜炎、过敏症等。目前有研究表明，阻断脊髓神经上的α3β2 nAChRs，通过抑制C-纤维释放谷氨酸进行疼痛信号的传递，可产生镇痛效应(Young T, Wittenauer S, McIntosh JM, Vincler M. Spinal alpha3beta2*nicotinic acetylcholine receptors tonicalIy inhibit the transmission ofnociceptive mechanical stimuli. Brain Res. 2008 ；1229 :118-124.)。因此，急需发现新的高特异性的nAChRs各种亚型的阻断剂。而且，估计在芋螺属的毒液中至少有1000中不同的a -CTXU-芋螺毒素)，而至今已发现和研究过的、或有临床应用价值的a-CTX仅十来种，绝大多数a-CTX尚未被发现和研究。因此研究与开发新的a-CTX具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术人经过深入的研究和创造性地劳动，发现了一类新型α -芋螺毒素肽，并且惊奇地发现，其能够特异性地阻断乙酰胆碱受体，并且具有很强的镇痛作用，具有在制备镇痛药物、戒烟或戒毒药物等方面的良好应用前景。由此提供了下述专利技术本专利技术的一个方面涉及一种多肽，其包含选自如下(I)至(4)中任一项所述的氨基酸序列(I)SEQ ID NO :3(下文中也称为LvIA)或者SEQ ID NO :6 (下文中也称为TxIC)或者SEQ ID NO 13所示的氨基酸序列；(2) SEQ ID NO 2或者SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列；(3)与上述(I)或⑵所述氨基酸序列至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、尤其优选至少95%、最优选至少97%相同的氨基酸序列(在本文中称作“同源肽”)；或本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多肽，其包含选自如下(1)至(4)中任一项所述的氨基酸序列：(1)SEQ？ID？NO：3或者SEQ？ID？NO：6或者SEQ？ID？NO：13所示的氨基酸序列；(2)SEQ？ID？NO：2或者SEQ？ID？NO：5所示的氨基酸序列；(3)与上述(1)或(2)所述氨基酸序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、尤其优选至少95％、最优选至少97％相同的氨基酸序列；或(4)被1？5个、优选1？3个、更优选1？2个、最优选1个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加而与上述(1)或(2)所示序列有所不同的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗素兰，长孙东亭，吴勇，胡远艳，朱晓鹏，陈琴，保罗·F·阿莱温奥德，J·迈克尔·麦克托什，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
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