本发明专利技术公开了一种Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽及其在制备检测或治疗类风关滑膜细胞增生、银屑病表皮细胞增生及炎症疾病的药物中的应用，其氨基酸序列为如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还公开了与Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽结合的特异性抗Cyr61/CCN1单抗、以及Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽抑制剂。本发明专利技术Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽及其相关新药物具有广泛应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本申请是2014年4月16日提交的、申请号为201410152740.7、名称为：“Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽及其抑制剂和单抗及其应用”的中国专利技术专利申请的分案申请，该母案申请以申请号为201410045817.0，名称为“Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽及其抑制剂和单抗及其应用”中国专利技术专利申请的申请日2014年02月08日为优先权日。
本专利技术属于医药领域，涉及Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽以及其在制备检测或治疗类风关(RA)滑膜细胞(FLS)增生、银屑病表皮细胞增生及炎症疾病的药物中的用途。
技术介绍
Cyr61(cysteine-rich61)，又称为CCN1，是一种由381个氨基酸残基的相对分子质量为42kDa的分泌蛋白，最早被克隆的Cyr61/CCN1是1985年Lau等在用血清或血小板衍生生长因子(PDGF)刺激小鼠BALB/c3T3成纤维细胞时发现的，因富含半胱氨酸(含10％的半胱氨酸残基)被命名为Cyr61/CCN1。Cyr61/CCN1具有明显的促有丝分裂活性和趋化性，可诱导成纤维细胞与表皮细胞增殖和分泌细胞外基质，参与调节细胞增生、分化、胚胎发育形成,是生命活动的基本蛋白。在抗原抗体的结合反应中，抗体参与结合的部位称抗体的对位(paratope)，而抗原(Cyr61/CCN1蛋白)参与结合的部位称为抗原的表位(epitope)。表位是蛋白质抗原性的基础。抗原表位(小分子肽段)的确定对于明确蛋白的作用位点即小分子肽段、进而设计采用该小分子肽段而模拟蛋白作用、或者设计能够模拟该肽段的小分子化合物用于代替蛋白或肽分子的作用、或者设计小分子化合物以阻断该蛋白作用具有重要意义，这也是当今国际上流行的新型药物的发展和制备方法之一。
技术实现思路
本专利技术提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，为GLECNFG。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽，其为如SEQIDNO.2所示的环状肽段，即在SEQIDNO.1的肽段的N端添加一个半胱氨基酸，从而构成如SEQIDNO.2所示的环状肽段“C-GLECNFG”。本专利技术的Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽是位于Cyr61/CCN1蛋白的第75-81位氨基酸，能够和特异性抗Cyr61/CCN1单抗093G9结合(KD为10-7)并在体内外中和Cyr61/CCN1功能，当N端添加一个C时可经人工合成为环状肽段“C-GLECNFG”。本专利技术中，Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽可通过蛋白酶水解制备得到，Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽还可以通过常规的固相多肽合成方法合成或基因工程技术制备得到。本专利技术中，根据基因库检索所得的人Cyr61/CCN1蛋白全长序列(GenBank：M_001554)，如SEQIDNO.3所示，为：其中，黑框中序列为Cyr61/CCN1蛋白的信号肽。本专利技术还提供了特异性抗Cyr61/CCN1单抗，所述特异性抗Cyr61/CCN1单抗能与本专利技术Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽结合。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂，其能与本专利技术Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽结合、能与GLECNFG环状结构结合、并能够阻断由此介导的生物学功能。本专利技术Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂，包括能够阻断Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽生物学功能的小分子化合物。较佳地，如本专利技术实施例所示的小分子化合物SC1-SC15。具体地，可以根据Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的肽段构象表位能够设计具有模拟和抑制该肽段生物学功能的小分子化合物。能够阻断该多肽肽段的小分子化合物具有抑制Cyr61/CCN1分子病理生物学的作用，这对于进一步发展成为先导化合物及其在制备抗滑膜增生和骨破坏、抗Cyr61/CCN1高表达乳腺癌细胞增殖、抗表皮细胞过度增生以及抗纤维化(如肝纤维化)的药物均有重要用途。本专利技术抑制剂能够和GLECNFG环状结构相结合、并能够阻断由此介导的病理作用(包括致炎，致纤维母细胞增生、致Cyr61/CCN1高表达乳腺癌细胞增生与转移、致表皮细胞增生与活化等)。本专利技术之前的研究已经表明，IL-17能够上调Cyr61/CCN1的表达，而上调表达Cyr61/CCN1能够通过与滑膜细胞表明整合素受体AvB5结合后而促进滑膜细胞的过度增生，并可促进金属蛋白酶3和金属蛋白酶9的合成而参与软骨和骨破坏。本专利技术研究表明，Cyr61/CCN1蛋白能直接促进滑膜细胞产生IL-6，从而参与炎症发生发展。进一步地，本专利技术研究表明Cyr61/CCN1还能够促进人类表皮细胞增生，参与银屑病发生。本专利技术动物实验中还发现Cyr61/CCN1能够介导干燥综合征、增生型炎性肠病发生。本专利技术实验已经证实用抗Cyr61/CCN1单抗中和该蛋白表达可以抑制滑膜细胞增生和IL-6产生、减轻CIA模型中关节炎的临床症状和组织破坏与炎症；抑制表皮细胞增生，减轻银屑病样小鼠的皮肤增厚与鳞屑产生、缓解干燥综合征和增生型肠病动物模型的炎症和临床症状。本专利技术制备得到能够结合Cyr61/CCN1蛋白的单克隆抗体。这些抗体表现出功能的不同，其原因在于这些不同的单克隆抗体所结合的抗原表位，也就是Cyr61/CCN1蛋白的不同部位所造成的。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽在制备检测和/或治疗炎症性疾病药物中的应用。优选地，所述炎症性疾病包括风湿性疾病、类风湿性关节炎、银屑病。优选地，所述炎症性疾病包括干燥综合征。优选地，所述炎症性疾病包括增生型炎性肠病。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽在制备抗类风关滑膜细胞增生的药物中的应用。本专利技术的实施例表明，能够特异性中和这一抗原表位的单克隆抗体093G9在体内和体外可以抑制类风关及其动物模型的滑膜细胞增生抑制银屑病及其动物模型的表皮细胞增生、抑制干燥综合征动物模型的症状和炎症、抑制增生型炎性肠病动物模型的炎症和症状。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽在制备抑制乳腺癌细胞高表达的药物中的应用。本专利技术实施例表明，能够特异性中和Cyr61/CCN1蛋白抗原表位的单克隆抗体093G9在体内和体外可以抑制高表达Cyr61/CCN1蛋白的乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，在动物模型(体内)中可以抑制该类型的肿瘤生长和淋巴转移。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽在制备抗纤维化药物中的应用。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽在制备抗银屑病的药物中的应用。本专利技术实施例表明，能够特异性中和这一抗原表位的单克隆抗体093G9在体内和体外可以抑制表皮细胞增殖、银屑病样小鼠的皮肤增厚与鳞屑产生。本专利技术还提供了Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂在制备治疗风湿性疾病药物中的应用。对于本专利技术位于Cyr61/CCN1蛋白上的抗原表位进行功能分析表明，抗体093G9的识别肽段的环肽具有刺激类风关滑膜细胞体外增殖的作用，而对照抗体096B7的识别表位不具有这样的特性，如图1所示。将所获得的抗体识别表位用人工本文档来自技高网...
【技术保护点】
Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂在制备治疗炎症性疾病药物中的应用；其中，所述炎症性疾病包括风湿性疾病和/或银屑病；所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为GLECNFG，如SEQ ID NO.1所示；或所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为C‑G LECNF G，如SEQ ID NO.2所示，其是在序列如SEQ ID NO.1所示的Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的N端添加半胱氨基酸所形成的环状肽段。
【技术特征摘要】
2014.02.08 CN 20141004581701.Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂在制备治疗炎症性疾病药物中的应用；其中，所述炎症性疾病包括风湿性疾病和/或银屑病；所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为GLECNFG，如SEQIDNO.1所示；或所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为C-GLECNFG，如SEQIDNO.2所示，其是在序列如SEQIDNO.1所示的Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的N端添加半胱氨基酸所形成的环状肽段。2.Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂在制备抗类风关滑膜细胞增生的药物中的应用；所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为GLECNFG，如SEQIDNO.1所示；或所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为C-GLECNFG，如SEQIDNO.2所示，其是在序列如SEQIDNO.1所示的Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的N端添加半胱氨基酸所形成的环状肽段。3.Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的抑制剂在制备抑制乳腺癌细胞增殖的药物中的应用；所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为GLECNFG，如SEQIDNO.1所示；或所述Cyr61/CCN1蛋白抗原表位多肽的氨基酸序列为C-GLE...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴峻，王荣芳，钱震斌，
申请(专利权)人：德赛诊断系统上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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