【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程与适体技术，公开了针对筛选细菌群体感应抑制物的噬菌体展示技术。具体而言，特指一种筛选细菌群体感应抑制物的技术，该方法同样也适用于长、短链N-酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)的群体感应分子抑制物的筛选。本专利技术中涉及的噬菌体展示技术可适用于例如噬菌体抗体库、环肽、线性多肽等带有随机文库的任何噬菌体文库。涉及的宿主菌为可以被噬菌体文库侵染的雄性F’细菌，例如ER2738、DH5αF’、XL1-Blue，涉及的载体为加入QS分子可导致自身基因诱导细菌死亡的载体pSB537。属于病原微生物预防与控制领域。
技术介绍
细菌耐药的形势严峻，如何提高新药研发速度，抑制或杀死病原菌的要求迫在眉睫。目前新药的开发主要有几种方法：一是传统的经典方法，即从自然环境例如土壤或者植物中筛选天然抗生素或者抗菌物质。但筛选天然抗菌物质的方法存在着过程繁琐，工作量大等问题，需要在筛选规模与通量上得到质的提高；二是人工合成或者半合成的抗生素，通过修改一些化学修饰改变化合物...
【技术保护点】
一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法，其特征在于：所述方法为：感应到QS分子将致死的感应菌株与噬菌体随机肽库孵育侵染，再添加入相应抗生素、特异QS分子、致死条件诱导剂和IPTG/X‑gal诱导孵育平板长菌，在自然光下，没有被噬菌体侵染的细菌不显蓝色，噬菌体侵染的细菌显蓝色；在加入致死条件诱导剂诱导下，具有抑制QS功能的特异多肽因抑制QS分子的活性而不启动自杀基因的表达，因此存活；而非特异多肽无法抑制QS分子，导致自杀基因启动致死；然后将存活的候选克隆挑出来，进一步功能验证，最后通过DNA测序的方法获得特异多肽序列对应的DNA序列，从而获得高效、特异的QSI多肽。
【技术特征摘要】
1.一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法，其特征在于：所述方法为：
感应到QS分子将致死的感应菌株与噬菌体随机肽库孵育侵染，再添加入相应抗生素、特异
QS分子、致死条件诱导剂和IPTG/X-gal诱导孵育平板长菌，在自然光下，没有被噬菌体侵染
的细菌不显蓝色，噬菌体侵染的细菌显蓝色；在加入致死条件诱导剂诱导下，具有抑制QS功
能的特异多肽因抑制QS分子的活性而不启动自杀基因的表达，因此存活；而非特异多肽无
法抑制QS分子，导致自杀基因启动致死；然后将存活的候选克隆挑出来，进一步功能验证，
最后通过DNA测序的方法获得特异多肽序列对应的DNA序列，从而获得高效、特异的QSI多
肽。
2.根据权利要求1所述的一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法，其
特征在于：所述方法具体包括如下：
（1）将QS信号分子C4-AHL感应自杀质粒转导入大肠杆菌ER2738菌株，获得菌株，从划线
平板中挑取该单菌落并接种到5ml添加有20μg/mL四环素和100μg/mL氨苄青霉素的LB
培养基中，37oC、250rpm振荡过夜，以2%接种量转接到LB培养基中，然后在200rpm条件
下振荡至对数生长中期并收集1mL菌体后重悬于200μLLB培养基中待用；
（2）将噬菌体肽库放置冰上化冻，取10μL稀释到90μL无菌水中，再分别将步骤（1）中
待用重悬后的200μL菌液与10μL已稀释的噬菌体肽库轻轻混匀，在室温条件下孵育2-5
min；吸取上述所有预混液加入3mL、45oC温浴已融化的含有10-30wt.%蔗糖、0.7wt.%
琼脂粉的上层琼脂LB培养基中，迅速充分混匀并倾倒到添加含有终浓度为20μg/mL四环
素、100μg/mL氨苄青霉素、10μMC4-AHL、10-30wt.%蔗糖、1.5wt.%琼脂粉的IPTG/X-
galLB培养基平板上；待上层琼脂充分凝固后，倒置放入37oC培养箱中静...
【专利技术属性】
技术研发人员：林向民，姚祖杰，林文雄，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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