用于免疫抑制剂药物的夹心测定制造技术

公开了用于测定怀疑含有免疫抑制剂药物的样品中的免疫抑制剂药物的方法。所述方法包括在介质中组合提供样品、针对免疫抑制剂药物的第一单克隆抗体和针对免疫抑制剂药物的第二单克隆抗体。第二单克隆抗体结合除了第一单克隆抗体结合免疫抑制剂药物的部分以外的免疫抑制剂药物的部分。在用于第一单克隆抗体和第二单克隆抗体结合免疫抑制剂药物的条件下孵育介质。检查该介质中包含免疫抑制剂药物、第一单克隆抗体和第二单克隆抗体的免疫复合体的存在。免疫复合体的存在和/或量表明样品中免疫抑制剂药物的存在和/或量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫抑制剂药物的夹心测定背景本专利技术涉及用于测定已知或怀疑含有一种或多种免疫抑制剂药物的样品(诸如患者样品)中的此类免疫抑制剂药物的化合物、方法和试剂盒。机体依赖于复杂的免疫应答系统来区分自身与非自身。有时，机体的免疫系统必须按顺序进行控制，以便增强缺陷应答或抑制过度应答。例如，当在人中移植器官诸如肾、心脏、心-肺、骨髓和肝脏，机体经常通过被称为同种异体移植排斥的过程排斥移植的组织。在治疗同种异体移植排斥中，频繁用药物治疗以受控的方式抑制免疫系统。免疫抑制剂药物是被小心地施用于移植受体以帮助防止非自身组织的同种异体移植排斥的治疗药物。免疫抑制剂药物可以如下分类：糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体、作用于抑免蛋白(immunophilin)的药物、和其他药物，诸如干扰素、阿片剂INF结合蛋白、麦考酚酯、FTY720等。免疫抑制剂药物的具体类别包含作用于抑免蛋白的那些药物。抑免蛋白是具有生理意义的高亲和力的特异性结合蛋白的实例。目前已知抑免蛋白的两个不同的家族：亲环蛋白和巨菲蛋白(macrophilins)，其中后者特异性结合，例如，他克莫司或西罗莫司。防止移植患者中的器官排斥的两种最常施用的免疫抑制剂药物是环孢菌素(CSA)和FK-506(FK或他克莫司)。在美国和其他国家中发现用作免疫抑制剂的另一种药物是西罗莫司，也称为雷帕霉素。雷帕霉素的衍生物也可用作免疫抑制剂。此类衍生物包括，例如，依维莫司等。可以部分通过小心控制患者中存在的药物水平来控制与一些免疫抑制剂药物相关的副作用。需要治疗性监测血液中免疫抑制剂药物和相关药物的浓度，以优化给药方案，以确保具有最小毒性的最大免疫抑制。尽管免疫抑制剂药物是非常有效的免疫抑制剂，但必须小心管理其使用，因为有效剂量范围通常是窄的且过度剂量可以导致严重的副作用。另一方面，太少剂量的免疫抑制剂可以导致组织排斥。因为免疫抑制剂药物的分布和代谢在患者之间变化很大，且由于不良反应的大范围和严重度，所以准确监测药物水平是必要的。因此，存在对于开发快速且准确的诊断方法来测量患者中免疫抑制剂药物或其衍生物的水平的持续需求。该方法应当能够完全自动化，且应当选择性地检测母体药物，同时尽可能减小由其代谢物的交叉反应性，或由怀疑含有免疫抑制剂药物的样品中的成分导致的不精确性。概述根据本文描述的原理的一些实例涉及用于测定怀疑含有免疫抑制剂药物的样品中的免疫抑制剂药物的方法。所述方法包括在介质中组合提供样品、针对免疫抑制剂药物的第一单克隆抗体和针对免疫抑制剂药物的第二单克隆抗体。第二单克隆抗体结合除了第一单克隆抗体结合免疫抑制剂药物的部分以外的免疫抑制剂药物的部分。在用于第一单克隆抗体和第二单克隆抗体结合免疫抑制剂药物的条件下孵育介质。检查该介质中包含免疫抑制剂药物、第一单克隆抗体和第二单克隆抗体的免疫复合体的存在。免疫复合体的存在和/或量表明样品中免疫抑制剂药物的存在和/或量。根据本文描述的原理的一些实例涉及用于测定怀疑含有他克莫司的样品中的他克莫司的方法。所述方法包括在介质中组合提供样品、针对他克莫司的第一单克隆抗体和针对他克莫司的第二单克隆抗体。第二单克隆抗体结合除了第一单克隆抗体结合他克莫司的部分以外的他克莫司的部分。在用于第一抗体和第二抗体结合样品中的他克莫司的条件下孵育介质，并且检查该介质中包含他克莫司、第一单克隆抗体和第二单克隆抗体的免疫复合体的存在。免疫复合体的存在和/或量表明样品中他克莫司的存在和/或量。根据本文描述的原理的一些实例涉及用于测定怀疑含有他克莫司的样品中的他克莫司的方法。所述方法包括在介质中组合提供样品、缔合磁性颗粒的针对他克莫司的第一单克隆抗体和与酶缔合的针对他克莫司的第二单克隆抗体。第二单克隆抗体结合除了第一单克隆抗体结合他克莫司的部分以外的他克莫司的部分。在用于第一抗体和第二抗体结合样品中的他克莫司的条件下孵育介质，并且检查该介质中包含他克莫司、第一单克隆抗体和第二单克隆抗体的免疫复合体的存在。免疫复合体的存在和/或量表明样品中他克莫司的存在和/或量。附图简述图1是具有编号的他克莫司的化学式。图2是图1的化学式，其描绘根据本文所述的原理单克隆抗体结合的分子部分。图3是描绘根据本文所述的原理他克莫司夹心免疫测定的信号剂量响应曲线的图。图4是描绘根据本文所述的原理他克莫司ELISA夹心免疫测定的信号剂量响应曲线的图。具体实施方案的详述总体讨论本专利技术人已经发现，可以制备特异性结合免疫抑制剂药物分子的分开部分的单克隆抗体。这个发现是令人惊讶的，因为免疫抑制剂药物是半抗原，其是相对小的分子(分子量小于约2500，或小于约2000，或小于约1500，或小于约1000)，并且不被认为具有多于一个抗体可以结合的位点。根据本文所述的原理，可以制备至少两种不同的抗体，其同时结合免疫抑制剂药物分子的分开部分。短语“针对免疫抑制剂药物的抗体”意指特异性结合免疫抑制剂药物且不在任何显著程度结合可以扭曲免疫抑制剂药物的分析的其他物质的抗体。特异性结合涉及相比于对其他分子实质上较差的识别，对于两种不同分子中的一种相对于另一种的特异性识别。另一方面，非特异性结合涉及相对独立于特定表面结构的分子之间的非共价结合。非特异性结合可以由几种因素导致，包括分子之间的疏水性相互作用。半抗原是能够特异性结合相应抗体，但本身不充当用于制备抗体的免疫原(或抗原)的化合物。因此，半抗原与用来产生抗体的免疫原性载体连接。同时结合免疫抑制剂药物上的两个不同位点的单克隆抗体的制备使得能够在夹心测定中使用此类抗体，其中所述免疫抑制剂药物被两种不同抗体同时结合以形成免疫复合体。对免疫抑制剂药物进行夹心测定的能力增强了测定对免疫抑制剂药物的灵敏度。此外，在涉及结合至支持物的一种单克隆抗体的夹心测定的情况下，该测定可以在杂质和样品的干扰物质存在的情况下进行，因为可以在已经使免疫抑制剂药物结合至支持物的单克隆抗体之后、但在引入第二单克隆抗体之前，将支持物与样品分离和并洗涤。术语“免疫抑制剂药物”包括作用于抑免蛋白的那些，诸如，但不限于，例如，环孢菌素(包括环孢菌素A、环孢菌素B、环孢菌素C、环孢菌素D、环孢菌素E、环孢菌素F、环孢菌素G、环孢菌素H、环孢菌素I)、他克莫司(FR-900506、FK506、PROGRAF®)、西罗莫司(雷帕霉素、RAPAMUNE®)和依维莫司(RAD、CERTICAN®)。抗体可以包括完整的免疫球蛋白或其片段，所述免疫球蛋白包括各种类型和同种型，诸如IgA、IgD、IgE、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。其片段可以包括Fab、Fv和F(ab')2、Fab'等。此外，适当时可以使用免疫球蛋白的聚集体、聚合物和缀合物或其片段，只要维持了对特定分子的结合亲和力。单克隆抗体可以通过本领域众所周知的技术(诸如制备连续杂交细胞系和收集分泌的蛋白(体细胞杂交技术))来制备。单克隆抗体可以根据Köhler和Milstein，Nature265:495-497，1975的标准技术来产生。单克隆抗体技术的综述可见LymphocyteHybridomas，编辑Melchers，等人Springer-Verlag(NewYork1978)，Nature266：495(1977)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于测定怀疑含有免疫抑制剂药物的样品中的免疫抑制剂药物的方法，所述方法包括：(a) 在介质中组合提供：　　(i) 所述样品，　　(ii) 针对所述免疫抑制剂药物的第一单克隆抗体，和　　(iii) 针对所述免疫抑制剂药物的第二单克隆抗体，其中所述第二单克隆抗体结合除了所述第一单克隆抗体结合所述免疫抑制剂药物的部分以外的所述免疫抑制剂药物的部分，(b) 在用于所述第一单克隆抗体和所述第二单克隆抗体结合所述免疫抑制剂药物的条件下孵育所述介质，和(c) 检查所述介质中包含所述免疫抑制剂药物、所述第一单克隆抗体和所述第二单克隆抗体的免疫复合体的存在，所述免疫复合体的存在和/或量表明所述样品中所述免疫抑制剂药物的存在和/或量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.07 US 13/4139251.用于测定怀疑含有他克莫司的样品中的他克莫司的方法，所述方法包括：(a)在介质中组合提供：(i)所述样品，(ii)针对他克莫司的第一单克隆抗体，和(iii)针对他克莫司的第二单克隆抗体，其中所述第二单克隆抗体结合除了所述第一单克隆抗体结合他克莫司的部分以外的他克莫司的部分，(b)在用于所述第一单克隆抗体和所述第二单克隆抗体结合所述样品中的他克莫司的条件下孵育所述介质，和(c)检查所述介质中包含他克莫司、所述第一单克隆抗体和所述第二单克隆抗体的免疫复合体的存在，所述免疫复合体的存在和/或量表明所述样品中他克莫司的存在和/或量；所述第一单克隆抗体结合基本上由包括甲氧基和羟基取代基的C29-C34环和包括甲氧基取代基的C15组成的他克莫司的部分，且所述第二单克隆抗体结合基本上由C10-C14环的甲氧基和包括C22酮氧的C1-C26环的C19-C27组成的他克莫司的部分；或者所述第一单克隆抗体针对包含在C22处连接至他克莫司的免疫原性载体的免疫原产生，且所述第二单克隆抗体针对包含在C32处连接至他克莫司的免疫原性载体的免疫原产...

【专利技术属性】
技术研发人员：TQ魏，
申请(专利权)人：西门子医疗保健诊断公司，
类型：发明
国别省市：美国;US