本发明专利技术涉及一种确定药剂是否会在人类中引起免疫毒性的方法。该方法包括向已被移植人造血干细胞(HSC)和施用一种或多种人细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定药剂是否在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，其中如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，则所述药剂在人类中引起毒性。在另一个方面，本发明专利技术涉及一种确定药剂施用是否在需要的个体中引起细胞因子释放综合征的方法。该方法包括向已移植HSC和施用一种或多种人细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；和确定所述药剂是否在非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，其中如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，则该药剂在人类中引起细胞因子释放综合征。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及一种确定药剂是否会在人类中引起免疫毒性的方法。该方法包括向已被移植人造血干细胞(HSC)和施用一种或多种人细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定药剂是否在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，其中如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，则所述药剂在人类中引起毒性。在另一个方面，本专利技术涉及一种确定药剂施用是否在需要的个体中引起细胞因子释放综合征的方法。该方法包括向已移植HSC和施用一种或多种人细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；和确定所述药剂是否在非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，其中如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，则该药剂在人类中引起细胞因子释放综合征。【专利说明】利用人源化的小鼠来确定毒性 相关申请 本申请要求2011年12月6日提交的61/567, 466号美国临时申请的优先权。 上述申请的全文通过引用在此引入。 专利技术背景 由于接近于人体的模型往往无法准确地预测许多不利的影响，临床前和临床试验 之间存在明显的差距。在I期临床试验中，施用TGN1412(开发用于治疗自身免疫性疾病的 人源化超激动（superagonistic)CD28单克隆抗体（IgG4))导致了与"细胞因子风暴"症状 相关的灾难性事件。急需建立一个可以准确地预测这种不利影响的模型。具有增强的人免 疫细胞移植特性的免疫缺陷NOD-scid IL2rY null小鼠给出了一种有吸引力的模型。然而， 由于在当前的模型中观察到弱的人类免疫反应，它们的广泛使用受到限制。 因此，需要可以准确地预测药剂（例如，治疗剂）对人体免疫系统的不利影响的改 进的模型。 专利技术概沭 通过向小鼠注射人造血干细胞和人细胞因子（例如，人IL-I5和Flt-3L细胞因 子）改进人源化小鼠模型的免疫反应。本专利技术证明，细胞因子处理的人源化（CTH)小鼠模型 得以以高保真度预测了在临床中或临床前试验中使用的四种不同单克隆抗体的不利影响。 因此，在一个方面中，本专利技术涉及一种确定（一种或多种）药剂是否会在人类中引 起免疫毒性的方法。该方法包括向已移植人造血干细胞（HSC)和施用一种或多种人类细 胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定药剂是否会在非人类哺乳动物中引起免疫 毒性，其中，如果所述药剂在非人类哺乳动物中引起免疫毒性，则所述药剂在人类中引起毒 性。 在另一个方面，本专利技术涉及一种确定施用（一种或多种）药剂是否会在需要的个 体（例如，人）中引起细胞因子释放综合征的方法。该方法包括向已移植人造血干细胞 (HSC)和施用一种或多种人类细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；以及确定所述药剂 是否会在该非人类哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，其中，如果所述药剂在该非人类 哺乳动物中引起细胞因子释放综合征，则该药剂在人类中引起细胞因子释放综合征。 附图简要说明 本专利或申请文件包含至少一张以彩色绘制的附图。带有彩色附图的本专利或专 利申请的副本将经请求和支付必要费用后由专利局提供。 图1 :注射TGN 1412引起一大组全身性促炎性细胞因子产生。在TGN 1412-IgG4(小鼠抗-人⑶28抗体5· 11A1的人源化形式（同种型：人IgG4/Kappa)，在本文 也被称为TGN1412)和TGN1412-AA (小鼠抗-人⑶28抗体5. 11A1的人源化FcR-非结合形 式（同种型：人IgG4/Kappa))处理组的血清中在处理前48小时、注射后2小时和24小时 测量细胞因子产生。也将值与盐水注射的对照组进行了比较。通过BD FACSArray分析来 测定人白介素-2〇111^-2)、1111^-6、1111^-8、1111^-10、1111^-4、11正^￥和於呖-〇的量。各个 符号代表一只小鼠。相同的符号表不在不同时间点的相同的小鼠。η值表不在每一组中使 用的小鼠的数目，来自两个独立的实验。 图2A-2B :在TGN1412处理后注意到T细胞和NK细胞百分比和绝对数的变化。在指 示时间点对小鼠采血和分析PBMC的人CD45 (hCD45)。（2A)显示了按照流式细胞分析，门控 于人⑶45细胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、⑶56+的百分比和门控于来自小鼠 PBMC的⑶45+⑶3+ 细胞上的CD4+和CD8+的百分比的比较。（2B)根据使用血细胞计数仪计算的活细胞数和从 流式细胞分析获得的相应细胞群的百分比之间的相关性计算不同细胞谱系的绝对数。 图3 :向没有用IL-15和FLT3L细胞因子处理的人源化小鼠注射TGN1412-lgG4未 伴随细胞因子产生的增加。在处理前48小时、注射后2和24小时测量TGN1412-IgG4处理 组的血清中的细胞因子产生。也将值与盐水注射的对照组进行比较。通过BD FACSArray 分析测定 1111^-2、1111^-6、1111^-8、1111^-113、11几 -4、11正^￥和1^呖-〇的量。各个符号代表一 只小鼠。相同的符号表示在不同时间点的相同的小鼠。η值表示在每组中使用的小鼠的数 目，来自单一的实验。 图4Α-4Β :在未用IL-15和FLT3L细胞因子处理的人源化小鼠的TGN1412处理后 注意到Τ、Β和ΝΚ细胞百分比和绝对数的变化。在指示时间点对小鼠采血和分析PBMC的人 ⑶45(h⑶45)。（4Α)显示了按照流式细胞分析，门控于人⑶45细胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、 ⑶56+的百分比和门控于来自小鼠的PBMC的⑶45+⑶3+细胞上的⑶4+和⑶8+的百分比的比 较。（4B)根据使用血细胞计数仪计算的活细胞数和从流式细胞分析获得的相应细胞群的百 分比之间的相关性计算不同细胞谱系的绝对数。 图5 :注射0KT3引起一大组全身的促炎性细胞因子产生。在处理前48小时、注射 后2小时和24小时，在0KT3治疗组的血清中测量细胞因子的产生。也将值与盐水注射的 对照组进行比较。通过 BDFACSArray 测定 hIL-2、hIL-6、hIL-8、hIL-Ι β、hIL-4、hlFN- γ 和hTNF-α的量。各个符号代表一只小鼠。相同的符号表不在不同时间点的相同的小鼠。 η值表示在每一组中使用的小鼠的数目，来自三个独立的实验。 图6Α-6Β :在0ΚΤ3处理后注意到几个细胞百分比和绝对数的变化。在指示时间点 对小鼠采血和按在图1中提到的分析PBMC的人CD45(hCD45)。（6Α)显示了按照流式细胞 仪分析，门控于来自小鼠 PBMC的人⑶45细胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+、⑶56+的百分数的比 较。（6B)示出不同细胞谱系的绝对数。 图7 :阿仑单抗注射表现出促炎性细胞因子的略微增加。在在处理前48小时、注 射后2小时和24小时测量阿仑单抗治疗组的血清中的细胞因子的产生。也将值与盐水注 射的对照组进行比较。η值表示在每一组中使用的小鼠的数目，来自两个独立的实验。 图8Α-8Β :阿仑单抗的注射与淋巴细胞、ΝΚ细胞和单核细胞的急剧减少相关联。在 指示时间点对小鼠采血和按在图1中提到的分析PBMC的人CD45(hCD45)。（8Α)显示了按 照流式细胞分析，门控于来自小鼠 PBMC的人⑶45+细胞上的⑶3+、⑶14+、⑶19+和⑶56+的 百分数的比较。（8B)示本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种确定药剂是否在人类中引起免疫毒性的方法，包括：a)向已移植人造血干细胞(HSC)和施用一种或多种人细胞因子的非人类哺乳动物施用该药剂；和b)确定该药剂是否在该非人类哺乳动物中引起免疫毒性，其中，如果所述药剂在该非人类哺乳动物中引起免疫毒性，则所述药剂在人类中引起毒性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·鲍格尔莫哈，M·库利，陈清风，陈建竹，
申请(专利权)人：麻省理工学院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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