抗体可变区，其包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的氨基酸序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及经修饰抗体。更具体地，本专利技术涉及特异结合人细胞表面鞘糖酯GD2的具有已降低免疫原性的经修饰抗体，以及它们作为治疗剂的用途。
技术介绍
许多年来，在研发基于抗体的治疗中有很大进展。例如，研究者不仅鉴定了许多癌特异标记物，也鉴定了许多与此类标记物特异结合的抗体。抗体可用于向表达标记物的癌细胞递送特定的分子，例如毒素或免疫刺激物如细胞因子以选择性杀死癌细胞。14.18抗体为针对细胞表面鞘糖脂GD2的小鼠来源单克隆抗体。GD2为通常只在神经元细胞外表面膜以显著水平表达的二唾液酸神经节苷酯，其中它暴露于免疫系统是受到血脑屏障限制的。相反的，许多肿瘤细胞鞘糖酯细胞表面表达具有异常水平。例如，GD2在广泛的肿瘤细胞表面表达，所述肿瘤细胞包括成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、黑素瘤、小细胞肺癌、骨肉瘤及其它软组织肉瘤。因此，GD2为用于将免疫刺激性蛋白质结构域靶向肿瘤细胞，以对肿瘤细胞引起有效的免疫反应而破坏它们的一种便利的肿瘤特异标记物。虽然14.18小鼠抗体(m14.18抗体)可有助于将此类蛋白质结构域靶向肿瘤细胞，但其小鼠来源的氨基酸序列可降低目的治疗作用。当施用于患者时，抗体在宿主哺乳动物中具有伴随的免疫原性。当抗体不是自体的时，这更有可能发生。结果基于抗体治疗的有效性常常受到针对治疗性抗体的免疫原性反应的限制。当抗体整个或部分来自与宿主哺乳动物不同的哺乳动物，例如当抗体来自小鼠且受者为人时，免疫原性反应一般增加。对于在人中的临床用途，将小鼠来源抗体修饰成与人抗体更接近，以将小鼠来源抗体的免疫原性降低或降到最小可能是有利的。小鼠来源抗体的免疫原性可通过制备嵌合抗体降低，所述嵌合抗体将人抗体的恒定区与小鼠可变结构域进行融合。然而，残留的小鼠可变结构域在人中一般仍具有免疫原性并因此可降低基于抗体治疗的功效。降低免疫原性的一些方法，如“镶嵌术(veneering)”及“人源化”涉及导入许多氨基酸替代并可破坏抗体与抗原的结合。m14.18抗体与GD2的结合具有中等亲和力。因此，预计显著降低m14.18对GD2亲和力的突变使得m14.18在人中的治疗性目的的作用降低。因此，本领域需要可有效靶向GD2并在施用于人时具有降低免疫原性的治疗性抗体。专利技术概述总体上，本专利技术提供了在人中具有较低免疫原性但仍保持m14.18对人GD2结合亲和力的m14.18抗体的经修饰形式。更具体地，本专利技术提供了m14.18抗体的人源化形式(hu14.18抗体)，其中一个或多个构架区的一些小鼠特异氨基酸用不同氨基酸替代以降低它们在人中的免疫原性。本专利技术也提供了hu14.18抗体与一种或多种非免疫球蛋白分子融合以增强靶向免疫治疗的作用。一方面，本专利技术提供了包括定义了免疫球蛋白轻链可变区(VL区)的SEQ ID N01所示氨基酸序列的抗体可变区。另一方面，本专利技术涉及包括定义了免疫球蛋白重链可变区(VH区)的SEQ ID NO2所示氨基酸序列的抗体可变区。在一个实施方案中，本专利技术提供了SEQ ID NO1所示氨基酸序列与SEQ ID NO2所示氨基酸序列连接的抗体可变区。氨基酸序列可例如通过二硫键或肽键连接。另一方面，本专利技术涉及与GD2特异结合并包括至少SEQ ID NO1的第1-23位氨基酸、SEQ ID NO2的第1-25位氨基酸或SEQ ID NO2的第67-98位氨基酸的抗体可变区。此类序列定义了hu14.18抗体的免疫球蛋白可变区中的构架区。构架区在以下进行更详细的描述。本专利技术的一方面涉及用于靶向表面具有GD2的细胞并包括向患者施用本专利技术所述抗体可变区的方法。在一个实施方案中，靶细胞为肿瘤细胞。本专利技术的另一方面包括编码抗体可变区的核酸或包括此核酸的细胞，所述核酸或包括此核酸的细胞可向患者施用或用于体外蛋白质产生。本专利技术也提供了包括本专利技术所述抗体可变区及至少包含CH2结构域的Fc部分的多肽、编码多肽的核酸、包括核酸的细胞以及通过向患者施用多肽、核酸或细胞用于靶向表面具有GD2的细胞的方法。在本专利技术的一些实施方案中，Fc部分来自IgG1。有或无插入Fc部分的抗体可变区可与非免疫球蛋白分子连接。具体地，非免疫球蛋白分子可为细胞因子，如白细胞介素、造血因子、淋巴因子、干扰素或趋化因子。白细胞介素可为例如白细胞介素-2或白细胞介素-12。造血因子及淋巴因子可分别为例如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及淋巴毒素。干扰素可为例如干扰素-α、干扰素-β或干扰素-γ。在本专利技术的一些实施方案中，融合蛋白包括第二种非免疫球蛋白分子，如第二种细胞因子。在具体的实施方案中，融合蛋白包括抗体可变区、IL-2及IL-12。可以理解文中描述的多种实施方案的特征不是互相排斥的并可以多种组合及互换存在。附图描述附图说明图1A显示根据本专利技术所述的免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列。图1B显示根据本专利技术所述的免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列。图2A-D显示表达载体的核苷酸序列，包括编码根据本专利技术所述的免疫球蛋白轻链及免疫球蛋白重链-IL-2融合蛋白的核酸构建体。图3A显示根据本专利技术所述的免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。图3B显示根据本专利技术所述的免疫球蛋白重链的氨基酸序列。专利技术详述本专利技术提供了在人中具有较低免疫原性但仍能特异结合人GD2的m14.18抗体的经修饰形式。降低的免疫原性是由免疫球蛋白可变结构域中一个或多个经改变氨基酸序列提供的。抗体用于治疗GD2阳性肿瘤，特别是当与细胞因子或其它免疫调节剂融合时，抗体用于治疗GD2阳性肿瘤。如文中应用的，术语“抗体”及“免疫球蛋白”理解为表示(i)完整抗体(例如，单克隆抗体或多克隆抗体)，(ii)其抗原结合部分，包括例如Fab片段、Fab’片段、(Fab’)2片段、Fv片段、单链抗体结合部位、sFv，(iii)双特异抗体及其抗原结合部分，和(iv)多特异性抗体及其抗原结合部分。如文中应用的，术语“特异结合”及“特异性结合”理解为表示抗体对特定抗原具有至少约106M-1，更优选地至少约107M-1，更优选地至少约108M-1及最优选地至少约1010M-1的结合亲和力。如文中应用的，术语“构架区”及“FR”理解为表示与互补性决定区(CDR)相邻的免疫球蛋白可变区的区域。CDR为与抗原主要相互作用的免疫球蛋白部分。如图1中显示的，VH及VL区域均包含四个FR并位于氨基酸序列的加框部分。特别地，对于图1A(SEQ ID NO1)显示的氨基酸序列，轻链FR由自Aspl至Cys23(huVLFR1)、自His39至His54(huVLFR2)、自Gly62至Cys93(huVLFR3)及自Phe104至Lys113(huVLFR4)的氨基酸序列定义。对于图1B(SEQ ID NO2)中显示的氨基酸序列，重链FR由自Glu1至Ser25(huVHFR1)、自Trp36至Gly49(huVHFR2)、自Arg67至Ser98(huVHFR3)及自Trp103至Ser113(huVHFR4)的氨基酸序列定义。本专利技术的蛋白质序列本专利技术以与人细胞表面鞘糖酯GD2结合优选地特异结合、并具有衍生自m14.18抗体的经修饰区域的抗体为特征。将VH或VL氨基酸序列(或两者的氨基酸序列)进行修饰或人源化以在向人施用时，降低本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：S·D·吉利斯，劳健明，
申请(专利权)人：默克专利有限公司，
类型：发明
国别省市：
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