本发明专利技术提供了人源化抗-C5aR抗体。本发明专利技术涉及与人C5a受体结合的人源化抗体及其作为治疗和诊断药剂的用途。本发明专利技术进一步涉及编码所述人源化抗体的核酸序列，及其在重组宿主细胞中的表达。特别地，本发明专利技术涉及来源于与人C5a受体特异性结合的小鼠抗体7F3的人源化抗体。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了人源化抗-C5aR抗体。本专利技术涉及与人C5a受体结合的人源化抗体及其作为治疗和诊断药剂的用途。本专利技术进一步涉及编码所述人源化抗体的核酸序列，及其在重组宿主细胞中的表达。特别地，本专利技术涉及来源于与人C5a受体特异性结合的小鼠抗体7F3的人源化抗体。【专利说明】人源化抗-C5aR抗体 本申请是申请日为2009年2月19日的题为"人源化抗-C5aR抗体"的中国专利 申请No. 200980105691. 9的分案申请。
本专利技术涉及与人C5a受体结合的人源化抗体及其作为治疗和诊断药剂的用途。本 研究中进一步涉及编码所述人源化抗体的核酸序列，及其在重组宿主细胞中的表达。特别 地，本专利技术涉及来源于与人C5a受体特异性结合的小鼠抗体7F3的人源化抗体。
技术介绍
每种补体蛋白C3 - C5的蛋白水解都会产生称为过敏毒素的含有信号分子的氨基 末端阳离子片段。这些片段中最有效的片段C5a引发了最广泛的反应。认为炎症反应的 组成部分是白细胞边集（margination)和浸润、颗粒结合型蛋白水解酶（granule-bound proteolytic enzyme)的释放、活性氧和氮源自由基的产生、血流和毛细血管渗透性改变以 及具有收缩平滑肌的能力，C5a分子是"完全的"促炎性介质。C5a分子在次纳摩尔到纳摩 尔水平上引发的所有髓系细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞、巨噬细胞和 单核细胞）的化学趋化作用，并引起血管通透，前列腺素和循环白细胞显著地增强了血管 通透性。较高的纳摩尔浓度可以引发NADPH氧化酶的脱粒和活化。这种生物活性的广度与 其他炎性介质形成鲜明对比。C5a参与包括风湿性关节炎、牛皮癣、败血症、再灌注损伤和 成年呼吸窘迫综合症在内的各种疾病的发病机制（Gerard and Gerard, 1994 ;Murdoch and Finn,2000)〇 C5a通过与其受体（C5aR)的结合介导C5a的活性。C5aR属于七次跨膜的G-蛋白 偶联受体家族。C5aR是对C5a具有高亲和力的受体，其中Kd为?InM，其位于包括白细胞 在内的一些不同细胞类型上。每个细胞的受体数量都非常高，每个白细胞可高达200, 000 个位点。受体的生物活化发生在使结合饱和的范围内。 C5aR结构符合七次跨膜受体家族，紧接于细胞外N-末端之后的是七个跨膜螺旋， 七个跨膜螺旋通过螺旋间结构域连接，螺旋间结构域交互地作为细胞内和细胞外环，以细 胞内C-末端结构域为终点。C5aR含有延伸的N-末端细胞外结构域。这种大型的N-末端 结构域是典型的结合包括IL-8和fMet-Leu-Phe (FMLP)受体家族的肽的G-蛋白偶联受体。 用C5aR拮抗剂抑制C5a反应可减少由C5a介导的急性炎性反应，而不影响其他 补体成分。为了这个目的，先前已经描述了 C5aR肽拮抗剂和抗_C5a受体抗体（Watanabe 等人，1995 ;Pellas 等人，1998 ;Konteatis 等人，1994 ;Kaneko 等人，1995 ;Morgan 等 人，1993)。例如，W095/00164描述了针对C5aR的N-末端肽（残基9-29)的抗体。 W003/062278也描述了针对C5aR的抗体。这些小鼠抗体中的三个称为7F3、6C12 和12D4。这些抗体显示出优异的性质，例如可非常有效地阻断C5a结合到它的受体，中止体 外中性粒细胞的C5a-定向迁移，并阻止动物模型中的炎症。为了控制慢性疾病，有必要在 数月或数年内连续几次给予小鼠抗体。然而，给予小鼠抗体的一个缺点是人免疫系统可产 生针对小鼠抗体（HAMA反应）其自身的抗体。HAMA反应通过从血液迅速清除小鼠抗体使它 们无效，从而阻止小鼠抗体与它的靶结合。 为了避免形成HAMA反应，已采取的一个方法是通过用人序列取代非表位结合区 中的许多"外来"残基而"人源化"小鼠抗体。然而，这个过程通常导致抗原性的丧失。而 且，人源化抗体领域的研究人员一直在努力确定能可靠生产具有人治疗中使用的所有必需 要求的人源化抗体的合适方法。 人源化步骤的主要问题在于对抗原的亲和力的丧失（Jones等人，1986)，在一些 情况下，损失到十分之一或更少，尤其当抗原是蛋白质时（Verhoeyen等人，1988)。当然，任 何亲和力的丧失都是及其不愿意看到的。至少，它意味着必需将更多人源化抗体以更高代 价和更大副作用的风险注射到病人中。更严重地，亲和力减小的抗体的生物功能如补体裂 解、抗体依赖的细胞毒性或病毒中和作用较差。因而，对基于人源化的治疗或诊断应用有用 的任何最后抗体的结构都是当前不可预知的，通常需要数个技术的多次重复和应用从而获 得有用的人源化抗体。 需要可用于诊断和/或治疗方法中的可替换的和/或改进的C5aR拮抗剂。特别 地，需要开发用于所述人的诊断和/或治疗方法的适宜的人源化抗_C5aR抗体。
技术实现思路
已生产了大量结合C5aR的人源化抗体，但具有结合特异性差和/或其他不期望的 特性。然而，本专利技术的专利技术人生产了几种相关的人源化抗体，其具有用于人的诊断和/或治 疗方法的合适活性。 第一方面，本专利技术提供了基本上纯化的和/或重组的人源化抗体，其包含 i)包含可变区的免疫球蛋白轻链，该可变区包含与SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:32、 SEQ ID N0:33和SEQ ID N0:48中的一个或多个序列至少93%相同的氨基酸序列，和/或 ii)包含可变区的免疫球蛋白重链，该可变区包含与SEQ ID N0:34、SEQ ID N0:35、SEQ ID N0:36和SEQ ID N0:39中的一个或多个序列至少90%相同的氨基酸序列， 其中该抗体结合人C5aR。 在优选的实施例中，免疫球蛋白重链包含可变区，该可变区包含选自由SEQ ID N0:34、SEQ ID N0:35和SEQ ID N0:36组成的组的氨基酸序列。更优选地，免疫球蛋白重 链包含可变区，该可变区包含由SEQ ID N0:36提供的氨基酸序列。 在另一个优选的实施例中，免疫球蛋白轻链包含可变区，该可变区包含选自由SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:32和SEQ ID N0:33组成的组的氨基酸序列。更优选地，免疫球蛋白 轻链包含可变区，该可变区包含由SEQ ID N0:31提供的氨基酸序列。 在特别优选的实施例中，免疫球蛋白轻链包含可变区，该可变区包含由SEQ ID N0:31提供的氨基酸序列，而免疫球蛋白重链包含可变区，该可变区包含由SEQ ID N0:36 提供的氨基酸序列。优选地，免疫球蛋白轻链包含恒定区，该恒定区包含由SEQ ID N0:41 提供的氨基酸序列，而免疫球蛋白重链包含恒定区，该恒定区包含由SEQ ID N0:42、SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:44或SEQ ID N0:45提供的氨基酸序列。更优选地，免疫球蛋白轻链包含 恒定区，该恒定区包含由SEQ ID N0:41提供的氨基酸序列，而免疫球蛋白重链包含恒定区， 该恒定区包含由SEQ ID N0:43或SEQ 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基本上纯化的和/或重组的人源化抗体，包括：i)包括了包含与SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:48中的一个或多个序列至少93％相同的氨基酸序列的可变区的免疫球蛋白轻链，和/或ii)包括了包含与SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:39中的一个或多个序列至少90％相同的氨基酸序列的可变区的免疫球蛋白重链，其中所述抗体结合人C5aR。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·惠特菲尔德，戴维·扎赫拉，查尔斯·麦凯，
申请(专利权)人：G二炎症私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU
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